输日动物源性蜂产品残留限量及检测技术PPT69(3).ppt

AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 输日动物源性 蜂产品 残留限量及检测技术 报告人 沈崇钰2006年4月北京 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 介绍内容 一 日本肯定列表与蜂产品出口 二 蜂产品中各类抗生素残留检测 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 一 日本肯定列表与蜂产品出口 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 2003年5月 日本修订了 食品卫生法 依据新修订的 食品卫生法 2006年5月29日 实施食品中农业化学品 农兽药及饲料添加剂 残留限量 肯定列表制度 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 日本将要实施的 肯定列表制度 对食品 农产品中所有农业化学品残留物都作了明确规定 其中15种农药 兽药禁止使用 797种农药 兽药及饲料添加剂设定了53862个限量标准 包括 现行标准 和 暂定标准 对没有设定限量标准的 执行 一律标准 即含量不得超过0 01毫克 公斤 只有65种天然和化学合成物质 主要是营养剂 做为豁免物质不设限量 从2006年5月29日起 只有符合 肯定列表制度 要求的食品 农产品才能进入日本市场 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 日本厚生省网站上公布了一批检测方法 176个 单品种检测方法166个多残留检测方法6个大多数为植物源性食品中农药残留检测方法涉及肯定列表中505种化学物质 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 这176个检测方法中涉及蜂蜜检测的很少方法陈旧 很多方法都是上世纪80年代的且大多数不适用 都是单残留检测方法 日本国内实验室也不使用这些方法日本国内大多采用多残留检测技术 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 目前日本对蜂产品中残留分类 兽药类 农药类 添加剂类 极少 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 目前日本对蜂产品中动物用药分类 兽药分类 氯霉素类 四环素类 硝基呋喃类 氨基糖苷类 大环内酯类 内酰胺类 苯并咪唑类 硝基咪唑类 阿维菌素类 大环内脂类 同化激素类 苯乙胺类 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 农药分类 菊酯类 有机氯类 有机磷类 其它 杀鼠剂类 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 出口日本蜂蜜现在要求检测的重要兽药项目 高风险项目 双氢 链霉素 氨基糖苷类 氯霉素硝基呋喃类喹诺酮类泰勒菌素 红霉素 大环内脂类 内酰胺类 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 二 蜂产品中各类抗生素残留检测技术 高风险类药物 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 氯霉素 Chloramphenicol 简称CAP 是一种十分有效的广谱抗生素 自从1950年来 广泛的应用于食用动物的疾病的预防和治疗 一 氯霉素检测 目前限量暂时定为0 1ug kg AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 至今为止 氯霉素残留仍然在蜂蜜和王浆产品中大量检出 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 目前检测氯霉素的方法 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 目前为止 LC MS MS方法是最为普遍的确证方法 MS MS 然而 有新的检测氯霉素技术出现 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 推荐检测技术 生物传感检测Biosensortechnology AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 蛋白捕获体核分析物之间特定作用可以实时监控并定量分析 无需标记 测定原理 SurfacePlasmonResonance SPR Immobilisationofbindingpartner分析物通过微流体注射技术从分析物表面通过传感器表面可以再生 简介 生物技术 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ Autosamplerunit OpticalDetectionUnit IFC Dockingstation Remotedataacquisition Sensorchip AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ Biosensorchip AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ SurfacePlasmonResonance SPR 1 4 IFC Flowchannel Reflectedlight 3 Sensorsurfacewithgoldfilm Polarizedlight 2 Prism OpticalDetectionUnit 1 Light source Sample 1 Sampleisloadedontothechip AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 4 Flowchannel Reflectedlight 3 Sensorsurfacewithgoldfilm Polarizedlight 2 Prism OpticalDetectionUnit 1 Light source Sample 2 Molecularbindingdetected AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ MASSCHANGE TIME Flowchannel Reflectedlight Sensorsurfacewithgoldfilm Polarizedlight Prism Light source Dissociation Association Sample 3 Moleculardissociationdetected OpticalDetectionUnit AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 本实验室开发王浆和蜂蜜中氯霉素检测方法原则 1 准确 2 快速 3 节约成本 使用内标 不使用固相萃取 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 2 可以利用王浆中氯霉素的提取方法 结合试剂盒技术进行初筛 节省企业成本 1 已有蜂蜜和王浆中氯霉素检测国标方法 总结 3 生物传感检测技术在欧盟已经开始使用 测定氯霉素 甚至13种磺胺等 但是仪器昂贵 使用面相对质谱较窄 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 二 硝基呋喃类代谢物检测和非人为污染途径 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 高效液相色谱 质谱联用 唯一仪器方法 优点 抗干扰能力强 定性准确 定量下限低 可以达到欧盟检测要求 缺点 仪器昂贵 操作复杂 需要衍生化 目前可以测定四种硝基呋喃类代谢物的方法 目前限量定为1ug kg AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 是否会有其它污染途径 非人为因素 1 Azodicarbonamide ADA 偶氮甲酰胺 2 卡拉胶 3 食品加工过程中氧化剂或者加热 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 是否会有其它污染途径 非人为因素 动物源性食品 植物源性食品 鸡蛋 奶粉 等等 小麦粉 面包 等等 SEM AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 可能的非人为因素污染途径 Azodicarbonamide ADA 偶氮甲酰胺 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ Azodicarbonamide 面粉改良剂 发泡剂 在面制品生产中 常加入面粉强筋剂来增强面筋的弹性和韧性 改善面团流变学特性和机械加工性能 垫圈幼儿食品罐密封圈 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 另外一种可能的污染途径 SEMat 20 g kg AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 卡拉胶是从红藻的角叉菜属 Chondrus 麒麟菜属 Eucheuma 杉藻属 Gigartina 及沙菜属 Hypnea 等品种海藻中提取的海藻多糖的统称 在食品工业中卡拉胶主要用作凝胶剂 稳定剂和持水剂 广泛使用于鸡肉产品和冰淇淋食品中 卡拉胶 Carrageenan AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ SEMincarageenan processing AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 总结 1 在一些特定的条件下 硝基呋喃类药物和其代谢物具有非指纹性 存在非人为污染的可能性 2 测定硝基呋喃类代谢物的方法 液质联用是唯一的选择 3 内标法是准确定量的必要条件 4 已有蜂蜜中硝基呋喃类代谢物检测国标方法 王浆中该类药物残留检测方法已经申报 验证阶段 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 三 链霉素检测技术 无限量规定 暂时定为10ug kg AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 放射免疫分析法 CHARMII 酶联免疫吸附分析法 ELISA 高效液相色谱法 HPLC 液相色谱质谱联用分析法 LC MS MS AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 可以初筛 确认方法 柱后衍生荧光测定方法和气质联用方法 目前有液质方法 但必须使用挥发性含氟酸 三氟乙酸和七氟正丁酸 做为流动相使用 保持峰形 严重影响负离子测定 例如氯霉素 对正离子测定无影响 目前已有蜂蜜中链霉素检测国标方法 王浆中链霉素检测方法国标已申报 验证阶段 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ Suitableforuseasscreeningassays Discriminationdependsonmethodused AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ SuitableforuseasconfirmatoryassaysforMRLcompounds Discriminationdependsonmethodused AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 四 蜂产品中氟喹诺酮类药物测定 喹诺酮类 quinolones QNs 药物是近二十年来迅速发展起来的一类十分重要的光谱抗生素 是继磺胺类药物之后人类在合成抗生素方面最重要的突破 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 由于QNs属于高极性 高熔点物质 因此无法用气相色谱 GC 方法进行测定 而液相色谱配合不同检测器是目前测定QNs类物质的主要方法 根据QNs具有强紫外吸收合荧光性质 因此 紫外检测器合荧光检测器是使用最为广泛的检测器 荧光检测方法检测限一般在10 g kg 能满足多数测定需求 灵敏度比紫外检测方法高10 20倍 紫外方法用于制剂 饲料中QNs检测 检测波长254 280nm 随着质谱检测器的普及和应用 高效液相色谱 串联质谱方法已经成为所有检测方法中的首选 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 分析QNs中需要注意问题 1 通过调节适合的pH 4 6 酸 碱LLE是提取QNs的基本方法 可以满足一般分析要求 近些年来 固相萃取 尤其是SCX 阳离子交换柱 或者SAX 阴离子交换柱 广泛使用 利用pH调节QNs的电荷状况 可以有效去处某些基质干扰 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 2 仪器分析容易产生残留记忆效应 选择合适的溶剂 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 已经申请蜂蜜和王浆中喹诺酮检测国家标准 市场上某些品牌蜂蜜中喹诺酮类残留情况 ugkg AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 五 硝基咪唑类残留检测技术 硝基咪唑类 nitroimidazoles 药物是近些年来迅速发展起来的一类十分重要的抗生素 其具有抗厌氧菌感染作用 用来治疗各种动物的球虫病 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 目前国内外测定硝基咪唑类的仪器方法有极谱法 气相色谱法 气质联用方法 酶联免疫吸附法和高效液相色谱配合紫外检测器和质谱检测器方法 气相方法需要进行衍生化 过程较为繁琐 酶联免疫吸附方法不适合基质复杂样品 同样液相色谱配合紫外检测器尽管灵敏度可以勉强达到欧盟要求 但是对前处理净化要求严格 而液相色谱配合质谱检测器是目前国外首选方法 抗干扰能力强 定性定量准确 完全可以满足目前国内外要求 目前已经申请蜂蜜和王浆中该类药物残留的国家标准 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 分析硝基咪唑类药物残留需要注意问题 在动物组织中分析目标化合物会不一致 二甲硝 代谢物 目标化合物 异丙硝唑 目标化合物 代谢物 然而 甲硝唑和洛硝哒唑其在动物体内目标化合物仍然是母体 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 在动物组织中存在不均匀性 蜂产品中是否需要测定代谢物 没有定论 分析硝基咪唑类药物残留需要注意问题 在室温下保存迅速分解 甚至在4 冷藏 状态下保存在冷冻保存状态下稳定 可以选择动物血浆作为测定目标组织 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 六 磺胺类残留检测技术 取代基 取代基 已有蜂蜜中10种和16种磺胺类液相 液质国家标准 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 目前 磺胺类药物残留的检测方法主要有免疫法微生物法理化分析法 气相色谱 GC 分光光度法 高效液相色谱 HPLC 联用技术 GC MS LC MS 薄层分析法 TLC ELISA CHARMII AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 磺胺种类多 性质差异大 大部分磺胺药物的pKa在5 8之间 提取方法各式各样 A 单一溶剂提取 B 混合溶剂提取 C 酸碱缓冲溶液提取 D 酸碱缓冲溶液 溶剂提取 对于蜂蜜样品 可以通过缓冲溶液 固相萃取方式得到比较好的结果目前 本实验室可以同时测定蜂蜜中17种磺胺类药物残留 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 六 蜂蜜中多抗生素残留检测技术 兽药种类多 单独检测时间长 成本高 目前蜂蜜已经有多农药残留检测技术 需要开发蜂蜜中多兽药残留技术 满足目前出口日本 欧盟等国家要求 目前可以测定蜂蜜中共9大类 48种兽药残留同时检测 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 多残留分类 一 四环素类 tetracyclines 1 四环素 tetracycline 2 土霉素 oxytetracycline 3 金霉素 chlortetracycline 二 硝基咪唑类 nitroimidazoles 1 二甲硝咪唑 dimetridazole 2 甲硝哒唑 metronidazole 3 洛硝哒唑 ronidazole 三 二氨基嘧啶类 diaminopyrimidines 1 三甲氧苄氨嘧啶 trimethoxypyrimidine 四 大环内酯类 macrolides 1 竹桃霉素 oleandomycin 2 泰乐菌素 tylosin 3 红霉素 erythromycin 5 罗红霉素 roxithromycin 6 交沙霉素 josamycin 7 替米卡星 timicosin 8 北里霉素 kitasamycin 9 螺旋霉素III spiramycinIII 10 螺旋霉素II spiramycinII 11 螺旋霉素I spiramycinI AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 五 林可胺类 lincosamides 1 林可霉素 lincomycin 2 氯林可霉素 clindamycin 六 内酰胺类 lactamantibiotics 1 青霉素G benzylpenicillin 2 青霉素V penicillinV 3 乙氧萘青霉素 nafcillin 4 苯唑青霉素 oxacillin 5 邻氯青霉素 cloxacillin 6 双氯青霉素 dicloxacillin 七 磺胺类 sulfonamides 1 磺胺嘧啶 sulfadiazine 2 磺胺二甲基嘧啶 sulfamethazine 3 磺胺喹噁啉 sulfaquinoxaline 4 磺胺 6 甲氧嘧啶 sulfamonomethoxine 5 磺胺甲基嘧啶 sulfamerazine 6 磺胺间二甲氧嘧啶 sulfadimethoxine 7 磺胺甲噁唑 sulfamethoxazole 8 磺胺噻唑 sulfathiazole 9 磺胺吡啶 sulfapyridine 10 磺胺脒 sulfaguanidine 11 磺胺醋酰 sulfacetamide 12 磺胺氯哒嗪 sulfachloropyridazine 13 磺胺甲氧哒嗪 sulfamethoxypyridazine 14 磺胺二甲异噁唑 sulfisoxazole 15 磺胺甲噻二唑 sulfamethizole 16 磺胺对甲氧嘧啶 sulfameter 17 磺胺邻二甲氧嘧啶 sulfamethoxine AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 八 氯霉素类 chloramphenicols 1 氯霉素 chloramphenicol 九 喹诺酮类 quinolones 1 氧氟沙星 ofloxacin 2 环丙沙星 ciprofloxacin 3 诺氟沙星 norfloxacin 4 恩诺沙星 enrofloxacin AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ 母离子和碎片离子信息 AnimalPlantandFoodInspectionCenter JSCIQ