细胞培养实验室的设置及设备.doc

. 动物组织细胞培养实验室的设计姓名：梁洪 学号：11310010214（1） 环境要求 组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。要求工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘。（2） 面积与预算 实验室总面积96m3左右，大约耗资40万（不含特殊先进设备）。（三）细胞培养实验室的布局细胞培养实验室布局大致为：无菌操作区、孵育区、制备区、清洗区、消毒灭菌处理区、储藏区。1无菌操作区（1）无菌操作室：无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。无菌操作间的空气消毒：紫外线灯，空气过滤的恒温恒湿装置。（2）超净工作台：操作简单，安装方便，占用空间小且净化效果很好。超净工作台工作原理（大致相同）通常是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。2孵育区本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者费用高，一般实验室多采用孵箱进行工作。3制备区在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。4储藏区主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要清洁无尘。5清洗和消毒灭菌区清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开，主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。(四)细胞培养实验室的设备1. 常用的基本设备（1） 仪器：a）显微镜：倒置显微镜是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。 b） 培养箱：体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数情况下，最适温度是37，温差变化一般不应超过0.5。恒温培养箱应选隔水式或晶体管自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜。CO2培养箱目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2（常用浓度为5），易于使培养液的pH保持稳定，适用于开放或半开放培养。c）干燥箱：用于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，电热干燥箱升温较高，一般需达到160以上。通常使用鼓风式电热干燥箱。d）水纯化装置：细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。水纯化时可采用离子交换装置或蒸馏器。e）冰箱：细胞培养室必须配备a普通冰箱或冷藏柜储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品及短期保存组织标本。b低温冰箱（-20）、超低温冰箱用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清等。细胞培养室的冰箱应属专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。f）细胞冷冻储存器：储存器常用的是液氮容器。根据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小，取放使用方便及液氮挥发量（经济）三种因素。g）离心机：进行细胞培养时，常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用离心机。h）天平：常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。i）消毒器：直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。常用：高压蒸汽灭菌锅，手提式高压蒸汽消毒器j）滤器：常使用的滤器有Zeiss滤器、玻璃滤器和微孔滤器（2）培养用器皿：培养瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞，胶塞多用于密封培养。培养皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。多孔培养板：为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂，可同时测试大量样本，易于进行无菌操作。c）其他用品：尚有收集细胞用的离心管，放置试剂或临时插置吸管用的试管，装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器，用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽，套于吸管顶部的橡胶吸头，封闭各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的注射器、烧杯和量筒以及漏斗，超净工作台使用的酒精灯，供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。（3）器械：主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。常用的有：手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪（弯剪及直剪），用于解剖动物、分离及切剪组织，制备原代培养的材料；眼科虹膜小剪（弯剪或直剪），用于将组织材料剪成小块；血管钳及组织镊、眼科镊（弯、直），用于持取无菌物品（如小盖玻片）夹持组织等；口腔科探针或代用品，用以放置原代培养之组织小块。2、特殊设备细胞培养实验室除了应配备上述的常用基本设备以外，如有条件，可添置一些特殊或先进的设备仪器，以便更有效、更精确、更深入地进行实验室工作。例如：（1）酶联免疫检测仪可用于进行免疫学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。（2） 超低温冰箱（-85）便于储存某些试剂及标本。（3）旋转培养器用于某些特殊细胞或需要收获大量细胞的培养。（4） 荧光显微镜进行荧光染色样本的观察。（5） 流式细胞仪可更精确及快速检测细胞。（6）用于检测细胞培养条件的各种仪器，例如专门为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含量设计的多功能细胞培养分析仪、手提式CO2浓度测定仪等。（五）注意事项超净工作台应用注意： （1） 超净工作台应安装在隔离好的无菌间或清洁无尘的房间内，以免尘土过多易使过滤器阻塞，降低净化效果，缩短其使用寿命。 （2） 新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，然后再采用药物灭菌法或紫外线灭菌进行灭菌处理。 （3） 使用超净工作台前，应先用75酒精擦洗台面，并提前以紫外线灭菌灯照射3050min处理净化工作区内积存的微生物。关闭灭菌灯后应启动风机使之运转两分钟后再进行培养操作。 （4） 净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰。 （5）注意净化区内气流的变化，一旦感到气流变弱，如酒精灯火焰不动，加大电机电压仍未见情况改变则说明滤器已被阻塞，应及时更换。一般情况下，高效过滤器三年更换一次。更换高过滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。粗过滤器中的过滤布（无纺布）应定期清洗更换，时