水质大肠菌群检验作业指导书.doc

水质大肠菌群检验作业指导书 水质大肠菌群检验作业指导书1目的规定原水、砂滤后水、碳滤后水、精滤后水、工艺水、溶糖车间工艺水、调配车间工艺水的总大肠菌群的检验方法，保证按标准化操作。 2适用范围水质的总大肠菌群检测。 3术语无4职责微生物检测员负责按作业指导书进行检验。 5工作流程图见附件6内容及要求6.1设备和材料6.1.1生化培养箱3616.1.2电热恒温培养箱44.50.56.1.3冰箱046.1.4净化工作台6.1.5显微镜101006.1.6电子秤6.1.7无菌三角瓶250mL和500mL6.1.8无菌试管18200mm6.1.9无菌刻度吸管1mL(具0.01mL刻度)和10mL(具0.1mL刻度)6.1.10酒精灯6.1.11紫外线杀菌灯6.2培养基和试剂6.2.1乳糖胆盐发酵培养基（或乳糖蛋白胨培养基）6.2.2乳糖发酵培养基6.2.3伊红美蓝琼脂（EMB）6.2.4EC培养基6.2.5EC-MUG培养基6.2.6革兰氏染色液6.2.7生理盐水（0.85%）6.2.8乙醇溶液（75%）6.3操作步骤6.3.1总大肠菌群的检测（按5管法操作）6.3.1.1初发酵试验取待检样品10mL，接种于含10mL双料的乳糖胆盐发酵管内，共接种5管；对于可能存在污染的水源，取待检样品10mL、1mL、1mL(取样品1mL于9mL生理盐水中稀释)，分别接种于含10mL双料、单料和单料乳糖胆盐发酵管内，各接种5管。 置361生化培养箱内培养24h2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。 6.3.1.2分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置361生化培养箱内，培养18h-24h，取出。 6.3.1.3证实试验用接种环挑取疑似总大肠菌群菌落（菌落呈黑紫色，表面有金属光泽），接种于乳糖发酵管内，置361生化培养箱内培养24h2h，同时对上述可疑菌落进行革兰氏染色、镜检。 凡乳糖发酵管产气、革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，报告为总大肠菌群阳性。 6.3.1.4报告根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL样品中总大肠菌群的最可能数（MPN）值。 15管法结果见表1；5管法见表2。 总大肠菌群MPN检索表（表1）（总接种量55.5mL，其中5份10mL水样，5份1mL水样，5份0.1mL水样）接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）105150.15105150.150002100xx210140024102600351038004710410接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）105150.15105150.1500591051xx21104011411160126112801371131001491141xx11115140204120602161218022712210023912312024111241502513125170306130803171311003291321203311133150341313417035151351904081401104191411304211142150431314317接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）105150.15105150.150441514419045171452205091501305111151150521315217053151531905417154220551915524xx3008xx30111202930213203123031620414304202051630523210731011211931114212123121721314313202141731423215193152722093xx22112321172221432220223173232422419324272252232531接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）105150.15105150.1523012330172311433121232173322423320333282342233432235253353624015340212411734124242203422824323343322442534436245283454025017350252512035129252233523225326353372542935441255323554540013500234011750131402215024340325503584043050476405365059541017510334112151146总大肠菌群MPN检索表（表2）（总接种量50mL,为5份10mL水样）5管10mL管中阳性管数总大肠菌群/（MPN/100mL）接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）接种量（mL）总大肠菌群/（MPN/100mL）105150.15105150.15412265126341331513844143651411041542515130420225204942126521704223252294423385231204244452415042550525180430275307943133531110432395321404334553318043417534314352153543440255405844130541764423654295443175433344421544464452654563450315508402.212.225.139.2416.0516注“表1”采用3个稀释度（10mL、1mL、0.1mL）,每稀释度5管；表内所列检样各增加10倍时，则表内数字相应降低10倍；表内所列检样各降低10倍时，则表内数字相应增加10倍；以此类推。 6.3.2耐热大肠菌群检测6.3.2.1接种与结果观察自总大肠菌群乳糖发酵实验中的阳性管（产酸产气）中取1滴转种于EC培养基中，置44.5恒温培养箱内，培养24h2h，如所有管均不产气，则可报告为耐热大肠菌群阴性，如有产气者，则转种于伊红美蓝琼脂平板上，置44.5恒温培养箱内培养18h-24h，凡平板上有典型菌落者，则证实为耐热大肠菌群阳性。 6.3.2.2结果报告根据证实为耐热大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100mL样品中大肠菌群的最可能数。 15管法结果见表1；5管法见表2。 6.3.3大肠埃希氏菌检测6.3.3.1接种将大肠菌群乳糖多管发酵法初发酵产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测。 用烧灼灭菌的金属接种环或无菌棉签将上述试管中液体接种到EC-MUG管中。 6.3.3.2培养将已接种的EC-MUG管置44.5恒温培养箱内，培养24h2h。 6.3.3.3结果观察与报告将培养后的EC-MUG管在暗处用波长为366nm功率为6W的紫外光灯照射，如果有蓝色荧光产生则表示水样中含有大肠埃希氏菌。 根据EC-MUG的阳性管数，查MPN检索表，报告每10