HPLC常见故障及排除.doc

1.色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge 键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。高低流速交替冲洗。6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。 1.塔板数低 ：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响2.色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响3.色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH7）4.保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变5.出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性 选择波长要从以下几个方面考虑：1.检测波长要大于溶剂截止波长。如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。2.对各组分都要有适当的吸收。一般是不可能做到的。所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。3.外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。对饱和基团也有弱的吸收。而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。 1、开泵后压力即升高至最高限度，经过对色谱柱前，色谱柱，色谱柱后的分段测试，确定为检测池堵塞。2、换检测波长后，色谱峰面积比以前做的小很多，怀疑进样环或管路漏夜，经检查，排除，最后确定为，检测波长的显示值和实际值不符。 1.涡流扩散（Eddy diffusion）流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。2.分子扩散（Molecular diffusion）分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。要减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。同时在操作时，如果流速太慢，被分离物质停留时间长，则扩散严重。3.质量转移（Mass transfer）被分离物质要在流动相与固定相中平衡，这样才能形成较窄的区带。在液相色谱中，溶质分子要在两个液相之间进行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。当流速快时，转移速度慢，来不及达到平衡动相就向前移，这各物质的非平衡移动，使区带变宽。4.动相流速当流速太低时，分子扩散严重，特别是在气相色谱中尤为突出。如将理论塔板高度对流速作图，理论塔板高度随流速增加而急速下降，当达到最低值时，流速再加大则质量转移起主要作用，理论塔板高度又加大。在高效液相色谱中，流速稍快影响不大，但在凝胶过滤色谱中，因为物质要渗透到凝胶内部，所以质量转移影响大，流速咖大会降低柱效率。5.固定相颗粒大小定相颗粒越小柱效率越高，对流动相流动的阻力越大，需要加大压力才能使它流动 hope78: 进样阀可能发生的问题问题可原因解决 方 法A、手动进样阀，转动不灵1、转子密封损坏更换或调整转子密封2、转子太紧调整转子的松紧度B、手动进样阀，载样困难1、进样阀安装不当重新安装2、定量环阻塞清洗或更换定量环3、进样器污染清洗或更换进样器4、管路阻塞清洗或更换管路C、自动进样阀，不能转动1、无压力（或电源）提供恰当的压力（电源）2、转子太紧调整转子的松紧度3、进样阀安装不当重新安装D、自动进样阀，其它问题1、阻塞清洗或更换阻塞部件2、机械故障见随机维修手册3、控制器故障维修或更换控制器AHPLC 柱压过高：1.拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2.把色谱柱从仪器上取下来，如果压力仍然不降，则是管路堵塞，须清洗，如果压力下降了，将柱子的进出口反过来接再仪器上，用10 倍量柱体积的流动相冲洗柱子，如果柱压仍不降，再检查；3.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明溶剂获样品中含有固体颗粒，若柱压还高，可在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器。B基线不稳，上下波动或漂移：1流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30 分钟；2单向阀堵塞，取下超声去除堵塞物；3泵密封损坏，造成压力波动，更换泵密封；4系统存在漏液点，确定漏液位置并维修；5流通池内有赃物或者杂质，清洗杂物；6柱后