大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色步骤如下：（一）固定与修块取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。（二）脱水与透明175%乙醇 50分钟285%乙醇 50分钟395%乙醇 （I） 30分钟495%乙醇 （II） 30分钟5100%乙醇（I） 30分钟6100%乙醇（II） 30分钟7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积） 20分钟8二甲苯（I） 20分钟9二甲苯（II） 10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。（三）浸蜡、包埋与修蜡块1浸蜡：将60恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60恒温箱120分钟。 2包埋：将60的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。3修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。（四）切片在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8m，将切片在55左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。（五）脱蜡、染色与脱水倾斜玻片架， 将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干， 减轻对其他试剂浓度的影响。全过程约需要60分钟。1脱蜡（1）二甲苯（I） 15分钟（2）二甲苯（II） 15分钟（3）100%乙醇 2分钟（4）95%乙醇（I） 1分钟（5）95%乙醇（II） 1分钟（6）蒸馏水浸洗 1分钟2染色（7）苏木精 30秒钟（8）自来水冲洗60秒。（显微镜下观察效果）（9）伊红（着色即可） 10秒钟（10）蒸馏水浸洗 1分钟3脱水（10）95%乙醇（I） 1分钟（11）95%乙醇（II） 1分钟（12）100%乙醇 2分钟（13）二甲苯（I） 2分钟（14）二甲苯（II） 3-5分钟（六）封片将载玻片取下，滴加12滴中性树胶，用镊子夹住盖玻片的一角，盖上盖玻片，之后倾斜载玻片，多余的中性树胶用筒纸吸干，室温下保存。2简要版：肝组织HE染色切片制作过程(1)取材与固定：取大鼠肝右叶固定部位组织块，立即投入10甲醛中，固定48h。(2)脱水透明：组织修片，梯度酒精脱水，后二甲苯中透明。动物组织切成02-05cm的薄片，依次经过70酒精2h-*80酒精2h一95酒精(I、II各2h)和无水酒精(I、II各1h)脱水，二甲苯透明(I、II各lh)，以置换组织内的酒精溶液。(3)浸蜡包埋：将脱水透明好的组织块置入融化的石蜡内，使石蜡浸入组织并置换出其中的二甲苯。将浸蜡的组织置于包埋器内，并滴入液化蜡进行组织包埋，后置于冰面上待其凝固。(4)切片与贴片：将蜡块固定于切片机上，切成5 u m厚的切片，在45C的水面上展平后铺在涂有防脱剂的载玻片上，置于65烤箱烤3h。(5)脱蜡：切片置入二甲苯I、各15分钟，不同浓度酒精(1005min一955s一805s一705s)置换出其中的二甲苯，最后用PBS液洗净。(6)HE染色：将石蜡切片放入苏木精中染色5min一蒸馏水洗净一1稀盐酸分化一流水中充分冲洗返蓝，约20min；伊红染色5min，流水冲洗干净。(7)脱水、透明：染好的切片经梯度酒精脱水(70、80、95、100各5min)，二甲苯透明(I、II各5min)。(8)封固：在载玻片上加一滴中性树胶，然后覆盖一片清洁的盖玻片封片。光