支气管哮喘动物模型的复制3-4

机能实验学实验设计大纲实验名称：支气管哮喘动物模型的复制课题来源：自选设计班级：2004级临床本科乙班设计人员：闵鑫 温勇 黄兵 冯进设计日期：2006年10月7日指导老师：张晓 荣成成都医学院实验技术教研室2006年制一、实验设计的目的与意义，国内外现状，存在的问题，解决问题的思路。目的与意义:通过观察支气管哮喘症状以及其支气管平滑肌、肺部、心脏的变化，进一步了解哮喘的病因，并观察平喘药对哮喘的解痉作用及全身的变化，让人们更清楚支气管哮喘。国内外现状：支气管哮喘的一种常见病、多发病，已成为全球性的社会卫生问题，对人类的健康构成了严重威胁。目前推测全世界共有1亿多人患哮喘病。目前我国在哮喘病方面的研究有一定的进展，例如：a、流行病学检查 b、有关免疫制剂防治哮喘病的研究 c、银杏叶防治哮喘的基础与临床研究 d、在“急则治其标，缓则治其本”原则下采用温阳补肾等同治疗的方法来预防或减少哮喘发作的研究 e、动物实验表明某些单味中药或方剂对参与哮喘病发病机制下各种细胞因子、炎性细胞或炎性介质有调节作用。目前关于哮喘病的学说有很多种，20世纪80年代建立的气道炎症学说现已被广泛接受，但是该学说仍然不能完全解释各种类型哮喘的发病机制。因此，哮喘病可能的由多种机制引起的一种共同反应。存在的问题：哮喘病的发病机制非常复杂，迄今仍然没有完全明了，以至于在临床出现滥用抗生素、糖皮质激素和平喘药造成治疗效果不佳且带来经济负担。这些都是人们对支气管哮喘病的病因没有具体完全的明白所导致的。解决的思路：取30只兔，分成2组，分别使它们致病 ，饲养一段时间后，诱导其急性发作，再通过药物治疗缓解其症状后，观察各项指标的变化方法：比较对照组与实验组的支气管平滑肌、肺部组织和心脏的变化，进一步弄清其至发病机制（给药解救组为实验组，不给药急性发作死亡组为对照组）。参考文献：1张晓，荣成.机能实验学.成都医学院.20062杨宝峰，苏定冯.药理学.人民卫生出版社.第6版。20033厚明华，殷凯生.哮喘病学.人民卫生出版社.第2版.。20054K.法里等.医学生理学.科学出版社.20055辛志伟等.药理学实验指导.成都医学院.2006二、实验设计目标与拟解决的主要问题，实验统计设计。实验动物设计，实验技术路线和方法，可行性分析，实验设计工作目标安排，预期结果。（一）实验设计目标和拟解决的主要问题：实验设计目标：通过对比病理状态下治疗与不治疗的组织学特点和各项生理指标，从而得出哮喘病的主要诊断指标和临床用药拟解决的主要问题：复制支气管哮喘模型，对支气管哮喘模型进行分组与实验结果分析。（二）实验设计：1 实验动物设计我们选用家兔作为实验动物，有以下几点理由：（1）家兔易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。（2）动物的支气管哮喘与人类相似，因而可用于作此实验模型。（3）动物模型中，锯齿类实验动物较为合适，这类动物生命周期短，易于人为控制各种条件，且来源方便。2 实验专业设计 选用家兔作为实验动物，复制支气管哮喘模型后观察各项生理指标的变化。 3 实验统计设计：实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。（1）随机：取20只生长正常的家兔，顺序编号再分为二组。20只兔子以给药与不给药的观察指标作为对照，而不同的指标的内容作为对照比较，在大量正常家兔中随机抽取，随机编号： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20随机数字： 68 13 09 20 73 07 92 99 93 18 24 22 07 29 57 33 49 65 92 98 除以2余数：0 1 1 0 1 1 0 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0所属组数： 甲 乙 乙 甲 乙 乙 甲 乙 乙 甲 甲 甲 乙 乙乙 乙 乙 乙 甲 甲随机数字： 68 27除以12余数：8 3组别调整： 甲 甲 1 3 4 7 8 10 11 12 19 20 为甲组，2 5 6 9 13 14 15 16 17 18为乙组。（2）对照：本组实验采用自身对照， 在前面的专业设计里已经提及。（3）重复：本实验采用的是每实验小组有 10只家兔，具有一定的重复性。（4）统计数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较分为组内和组间比较，分别采用均数和方差分析。表1家兔支气管哮喘模型复制（心电和呼吸频率的变化值）动物（N）对照组 实验组心电 呼吸频率 心电 呼吸频率 123.,10 表2 组织切片的观察动物(n)对照组 实验组平滑肌 平滑肌 A B A B123.10注：上表已所测皆为细胞数目，次数即从不同视野观察。（A代表嗜酸性粒细胞，B代表中性粒细胞）（5）统计数据分析本实验采用计量资料来测定各种指标的数值，所有数据均采用平均数标准差（s）表示，二组间实验数据比较行完全随机单因素方差分析， 实验组和对照组内均数两样本比较采用t检验，均以0.05作为显著性检验水准。二组间实验数据比较行完全随机单因素方差分析，如呼吸，心电总体均值的比较，其方法如下：(1)、建立检验假：H0：=（各组呼吸，心电总体均值相等）。H1：、不等或不全相等，0.05。（2）计算统计量 X=(X1+X2+X3+Xn)/n =(Xi-X)2/(n-1) t=（x-u）/Sx (3) 查F值表，确定P值，如果P0.05, 就具有统计学意义。4、实验方法设计实验操作技术路线：当外在或内在的过敏原或非过敏原等原因引起这些支气管平滑肌痉挛，黏水肿及分泌物增加，造成呼吸时空气流通不畅，病人就会有气急、呼吸困难、咳嗽及咳痰等症状。检查肺部时可听到哮鸣音，尤其是呼气时特别明显，这种反复发作性病症就叫做支气管哮喘，即一般常说的哮喘：实验技术方法（1）随机抽样：随机20只正常的家兔，并分别编号，再随机平分成二组，并称重 （2）实验分组：如统计设计所述。（3）实验手术：取兔，称重（婴儿秤）后固定于兔台上，剪去颈部长毛（换药碗装水）。用1%普鲁卡因局麻（大约三公分长，不同点局麻），切开颈部皮肤（轻点，不要损伤气管和血管），呈钝形分离出气管（分离干净），做倒T形切口，插入气管插管并结扎固定。（4）模型复制：（1）实验前1天，取家兔，置于喷雾箱中，以2%氯化乙酰甲胆碱和1%磷酸组胺混合液（2：1）恒压喷雾30秒钟，选用出现明显症状的家兔。（2）实验时，将选好的家兔置于喷雾箱中，连接装置，以2%乙酰甲胆碱和1%磷酸组胺混合液喷雾30秒钟，出现明显症状后，随机分为甲组（对照组）和乙组（实验组），将实验组静脉注射安茶碱，分别在5min,10min,20min,30min时，记录心电图，呼吸频率值，待实验组症状明显缓解后即停止实验。（若未有明显缓解。则继续观察，记录数据，待其明显缓解后停止。）（三）可行性分析：动物的来源及选用：动物的支气管哮喘与人类相似，因而可用于作此实验模型，动物模型中，锯齿类实验动物较为合适，这类动物生命周期短，易于人为控制各种条件，且来源方便。本实验选用其中之一。现在临床上痰液病理组织切片已成为哮喘病的诊断，鉴别和预后判断的主要指标，具有很大的应用价值。此实验并不复杂，组织切片，痰液涂片易于制作，该法简单易行。该实验需要的家兔来源广泛，实验操作并不复杂，所需药品试剂实验室都能提供，故可行性高。（四）预期结果通过对比，甲组（对照组）和乙组（实验组）的支气管平滑肌有异常，心电，呼吸频率也发生明显改变。（五）实验设计工作时间安排: 1、共计1天 完成药物准备。2、共计 1天完成实验动物模型制备和取材 3、共计0.5天完成统计数据分析4、总共实验在2.5天完成。三、完成实验的条件1、仪器设备情况：本实验采用机能实验室常用设备，具体如下：BL-410生物信号采集系统，兔台、 婴儿磅秤、Y字型气管插管、手术器械、注射器，压力换能器，喷雾机，喷雾箱，光学显微镜。2、实验动物情况: ：正常家兔，体重1.5-2.0kg。3、药品试