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文档简介

肝糖原的提取和鉴定一、实验目的1.了解肝糖原的性质并掌握其提取的方法。2.熟悉肝糖原的鉴定方法。二、实验原理肝糖原是糖在体内的重要储存形式之一。其储存量虽然不多，但在代谢过程中，它是动物体内糖的重要的来源之一。肝糖原的合成或分解对血糖浓度的调节起着重要的作用。糖原属于高分子糖类化合物，微溶于水，无还原性，与碘作用变成红棕色。提取肝糖原是利用三氯醋酸破坏肝组织中的酶，且肝组织中的蛋白质也被三氯醋酸所沉淀，而糖原仍留在溶液中。过滤除去沉淀，滤液中的肝糖原可借加入的乙醇而沉淀。将沉淀的糖原溶于水，即可得到糖原溶液。糖原与碘作用呈红棕色。糖原被酸水解为葡萄糖，可用班氏试剂检验。利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定组织中糖原的存在。三、实验材料、仪器和试剂1. 材料：小白鼠等动物新鲜肝脏组织2. 仪器：（1）天平 （2）研钵 （3）离心机（4）离心管 （5）恒温水浴锅 （6）试管（7）广泛试纸 （8）移液管 （9）洗耳球（10）电炉 （11）量筒 （12）滤纸3 试剂：（1）10%的三氯醋酸溶液（2）5%的三氯醋酸溶液（3）95%乙醇溶液（4）浓盐酸（5）20%的NaOH溶液（6）碘液：(取碘1g、碘化钾2g溶于500mL蒸馏水中)（7）班氏试剂：(将硫酸铜17.3g溶于100mL温蒸馏水中；取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g溶于700mL温蒸馏水中，待冷却后，将硫酸铜溶液缓缓加入柠檬酸钠和碳酸钠混合液中，最后用蒸馏水稀释至1000mL)四、操作步骤(一)肝糖原的提取（1）肝匀浆的制备：迅速处死小白鼠，立即取出肝脏，用滤纸吸取附着的血液。称取约1g肝脏置研钵中，加入少许石英砂及10%的三氯醋酸溶液1mL，研磨至呈乳状后再加入5%的三氯醋酸2mL，继续研磨，直至肝脏组织已充分磨成均匀糜浆。（2）提取糖原：将制备好的肝匀浆以3000r/min的转速离心10min。取上清液于另一离心管并量取体积，加入等体积的95%乙醇溶液，混匀后静置10min，使糖原呈絮状析出。将沉淀溶液以3000r/min的转速离心10min，弃去上清液，将离心管倒置于滤纸上12min，向沉淀中加入蒸馏水1mL，用细玻璃棒搅拌至溶解，即成糖原溶液。(二)肝糖原的鉴定（1）与碘的呈色反应：取小试管2支，一支加入糖原溶液10滴，另一支加入蒸馏水10滴，然后两管各加入碘液2滴，混匀。观察两试管中溶液的颜色变化，并解释现象。（2）糖原水解液中葡萄糖的鉴定：在剩余的糖原溶液中加入浓盐酸3滴，放入沸水浴中加热10min，取出冷却，用20%的NaOH溶液中和至中性(用pH试纸检测)。然后加入班氏试剂2mL，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。观察管中沉淀的生成，并解释现象。五、注意事项（1）实验用小白鼠在实验前必须饱食，因为空腹时肝糖原易分解而使其含量减少。（2）肝脏离体后，肝糖原会迅速分解，所以在杀死动物后，所得刚脏必须迅速用三氯醋酸溶液
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