动物细胞融合与单克隆抗体课件.ppt

动物组织块 细胞悬液 原代培养 传代培养 胰蛋白酶处理分散成单个细胞 幼龄动物的器官组织 动物胚胎 细胞贴壁接触抑制 原代培养传代培养 加入培养液 用胰蛋白酶等处理贴壁细胞 适宜条件 不死性细胞 课前复习 1 代孕母牛 胚胎移植 体细胞核移植过程 体细胞克隆动物 存在的问题 1 成功率非常低 2 克隆动物表现出遗传和生理缺陷等健康问题 3 对克隆动物食品的安全性问题也存在争议 2 专题2细胞工程 2 2 2动物细胞融合与单克隆抗体 主备人 姚雪丰议课时间 第15周上课时间 第17周 环节 学习目标 1 掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系 2 简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程 3 了解单克隆抗体在医学实践中的应用 并说出其应用实例 3 医药交流PPT 阅读教材52 54页 回答下列问题 环节 问题导学 1 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同 2 常规血清抗体与单克隆抗体有何区别 3 单克隆抗体怎么制备 4 单克隆抗体主要有哪几方面的用途 4 一 动物细胞融合 9 45 环节 点拨精讲 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 5 1 概念 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 2 结果 形成单核的杂交细胞 3 原理 细胞膜的流动性 4 诱导方式 物理法 离心 振动 电激 化学法 聚乙二醇 PEG 生物法 灭活的病毒 一 动物细胞融合 6 动物细胞融合过程示意图 不同DNA的两个细胞 灭活的病毒 有丝分裂 两个完整的杂交细胞 技巧归纳灭活的病毒能作为诱导剂 不灭活的病毒不能作为诱导剂1 灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布 细胞膜打开 细胞发生融合 2 不灭活的病毒会感染细胞 而不能诱导细胞融合 7 5 过程 动物细胞A动物细胞B 诱导 融合 1个完整的杂交细胞AB 膜融合 质融合 核融合 细胞融合完成的标志 细胞核融合成一个核 6 意义 突破了有性杂交方法的局限 使远缘杂交 种间 属间 科间 动植物之间 成为可能 7 应用 成为研究细胞遗传 细胞免疫 肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 最有价值的应用 制备单克隆抗体 8 动物细胞融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 植物体细胞杂交 去壁 原生质体融合 植物组织培养 物理法 化学法 生物法 灭活的病毒 常用方法 8 植物体细胞杂交 动物细胞融合的比较 9 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理 化学方法 同左 灭活的病毒 物理 离心 振荡 电刺激 化学 聚乙二醇 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 8 植物体细胞杂交 动物细胞融合的比较 10 例1下图表示细胞融合技术的一些过程 请据图回答 1 若A B细胞为动物细胞 从A和B细胞到C细胞的过程中 常用作为来诱导融合 A B融合为C的过程说明细胞膜具有特性 其融合完成的标志是 得到的C细胞可称为 灭活的病毒 诱导剂 流动性 细胞核融合 杂交细胞 2 若A B细胞为植物细胞 那么这样的细胞已经用酶降解去掉了 这种酶可能是酶 由此生成的A和B细胞称为 A B到C细胞的过程中 常用的物理方法是 融合完成的标志是 形成的D细胞还要应用技术把D培养成植株 3 若A为人细胞 B为鼠细胞 并分别用红 绿荧光染料标记细胞膜上的蛋白质 在形成C细胞时 细胞一半发红色荧光 一半发绿色荧光 到D细胞阶段 两种颜色的荧光均匀分布 原因是 细胞壁 纤维素酶和果胶 原生质体 离心 振动 电激 形成新的细胞壁 植物组织培养 细胞膜上的蛋白质是可以运动的 11 二 单克隆抗体 什么是抗体 由何种细胞产生 主要分布在哪里 起何作用 效应B细胞 血清 特异性免疫作用 抗体 机体受抗原刺激后产生的 并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白 12 读下面一段文字资料 思考以下问题 长期以来 为了获得抗体 采用的是把某种抗原反复注射到动物体内 然后从动物血清中分离出所需抗体的方法 用这种方法获得的抗体 不仅产量低 而且抗体的特异性差 纯度低 反应不够灵敏 人们发现 在动物发生免疫反应的过程中 体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体 但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一 特异性强的抗体 要想获得大量的单一抗体 必须用单个B细胞进行无性繁殖 即克隆 1 请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念 2 怎样才能获得单克隆抗体 提示1 仅用细胞培养技术可行吗 提示2 我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的 提示3 有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢 用单个B细胞进行无性繁殖 克隆 得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一 特异性强的抗体 这种抗体就叫做单克隆抗体 13 接受抗原刺激后 能分泌针对该抗原的特异性抗体 在体液免疫中具有重要功能 B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞 通常不再进行细胞分裂 存活一段时间后便会死亡 短命细胞 B淋巴细胞 所以B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖 而癌细胞是可以无限增殖的 骨髓瘤细胞 恶性增殖的转化细胞 只要营养条件适合可永远分裂和存活 长命细胞 经筛选与驯化 现已建立多种骨髓瘤细胞株 没有抗体分泌物 因此可以利用小鼠骨髓瘤细胞与之融合 就可获得既能无限增殖又能产生单一抗体的细胞 14 特点 产量低 特异性差 纯度低 反应不够灵敏 常规抗体制备 一个B淋巴细胞 只分泌一种特异性抗体 单克隆抗体 杂交瘤细胞 小鼠骨髓瘤细胞 能无限增殖 融合 向动物体内反复注射抗原 使动物产生抗体 然后从血清中分离所需抗体 优点 特异性强 灵敏度高 15 二 单克隆抗体的制备 1 单克隆抗体的制备过程 16 3 为何要进行两次筛选 4 如何进行第2次筛选 培养在多孔培养板上 每孔只有一个杂交瘤细胞 第1次筛选得到杂交瘤细胞 多种 第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群 1 本过程利用了哪些原理 免疫原理 细胞融合原理和动物细胞培养原理 2 为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合 这样融合成的杂交瘤细胞 继承了双亲细胞的遗传物质 不仅具有B细胞分泌抗体的能力 而且还有无限增殖的本领 因而可以获得大量单克隆抗体 思考 17 2 单克隆抗体的优点 3 单克隆抗体的应用 特异性强 灵敏度高 可大量制备 1 作为诊断试剂 最广泛应用具有准确 高效 简易 快速 2 用于治疗疾病和运载药物 生物导弹 单克隆抗体 药物单抗导向 药物为弹头 主要用于治疗癌症治疗 单克隆抗体作为载体 运载抗癌药物 形成 生物导弹 准确杀伤癌变细胞 18 例2下图是单克隆抗体的制备过程 请据图回答问题 1 抗体的化学本质是 主要分布于中 也分布于组织液及外分泌液中 2 若想通过 过程获得所需的B淋巴细胞 应先对小鼠进行的处理是 该处理的实质是在小鼠体内发生的过程 制备单克隆抗体的B淋巴细胞一般从中采集 球蛋白 血清 注射 相应的 抗原 体液免疫 脾 3 过程除了采用诱导植物细胞原生质体融合的方法外 还可以用作为诱导剂 细胞两两融合后 可出现种融合细胞 4 过程中杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖 氨基酸的方式是 5 过程要挑选出能产生的细胞群继续培养 特定抗体 灭活的病毒 3 主动运输 19 两个 过程 动物细胞融合过程 单克隆抗体制备过程 三个 一 一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒 一个新细胞 杂交瘤细胞 一个优势 单克隆抗体特异性强 灵敏度高的优势 重点 环节 课堂总结 20 1 在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中 正确的是 A 结果是相同的B 杂种细胞的形成过程基本相同C 操作过程中酶的作用相同D 诱导融合的手段相同 环节 当堂检测 2 能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 A 离心B 灭活的病毒C 电刺激D 振动 B 3 科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合 得到杂交细胞 经培养可产生大量的单克隆抗体 与骨髓疤细胞融合的是 A 经过免疫的B淋巴细胞B 没经过免疫的T淋巴细胞C 经过免疫的T淋巴细胞D 没经过免疫的 淋巴细胞 A 21 4 要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B淋巴细胞进行无性繁殖 形成细胞群 其原因是 A 在体外培养条件下 B淋巴细胞可以无限增殖B 在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体C 每一个B淋巴细胞都参与特异性免疫反应D 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 D 5 某同学在学习 细胞工程 时 列表比较动植物细胞工程的有关内容 你认为错误的是 B 22 6 单克隆抗体制备过程中 骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后 要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D C 23 7 下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图 1 技术是单克隆抗体技术的基础 2 根据培养基的用途分类 图中HAT培养基属于 培养基 3 单克隆抗体与常规