艾滋病检测点培训PPT课件.ppt

HIV实验室检测培训 2011 5 23 1 艾滋病基础知识 定义艾滋病 AIDS 由人类免疫缺陷病毒 HIV 所引起的一种以辅助性T淋巴细胞 CD4 T淋巴细胞 数量减少导致免疫功能减退为主要特征的严重传染性疾病 来源20世纪40 50年代的非洲 HIV病毒可能由猴子体内的猿免疫缺陷病毒演变而来 2 流行最早在美国发现欧洲非洲20世纪80年代中后期传播到亚洲 感染的自然发展过程窗口期受到HIV感染到可以检测出艾滋病抗体的这一段时间特点 轻微的一过性感冒症状在窗口期内检测不出抗体感染 HIV 1 2 3周可检出P24抗原感染者的血液 精液 阴道分泌物等体液中 含有大量HIV 3 无症状潜伏期8 10年特点 HIV抗体 临床症状出现平均10年的潜伏期后出现艾滋病病人临床症状出现后1年发展为病人死亡无抗病毒治疗情况下 半年到2年的时间 病人死于艾滋病HIV抗体 HIV抗体 无症状HIV抗体 有症状艾滋病4 8周8 10年1年0 5 2年左右个体感染艾滋病病毒后的自然发展过程 4 HIV检测是艾滋病防治的一项重要保证措施 明确HIV感染者 诊断 及早医学干预合宜的治疗指标和效果评估疫苗效果考评发现HIV阴性者做好减少危险 不安全性行为和药瘾者 的咨询开展VCT的基础流行病学监测和专题研究公共卫生规划 政策形成 保险 控制等 职业保护 5 达到保证措施的必要条件 贯彻有关HIV检测的法规 实验室网络 人员 仪器设备 房屋等条件 有效的检测方法和检测试剂常规质量控制和质量保证 6 艾滋病检测工作管理文献 1990 全国HIV检测管理规范 试行 1997 9 全国艾滋病检测工作规范2004 8 全国艾滋病检测技术规范 试行 规范 2003 全国艾滋病检测工作管理办法 办法 2004 12全国艾滋病检测技术规范 正式 2009全国艾滋病检测技术规范 修订版 7 HIV感染的实验诊断 检测方法HIV培养 核酸测定 P24抗原检测 血清抗体测定金标准血清抗体测定 HIV感染后平均25天检出 待12周时几乎全检出HIV抗体检测两个阶段 筛查和确认 三个程序 初筛 复检 确认 2 3标本 血清 全血 唾液 尿液 滤纸干血 8 HIV筛查试剂要求和种类 要求SFDA注册批准中检所批批检合格CDC临床评估质量优良使用有效期内采供血机构必须使用HIV 1 2 种类酶联免疫试剂 EIA 颗粒凝集试剂 PA 其它快速试剂 RT 9 检测注意事项 HIV抗体检测工作应该按照 全国艾滋病检测技术规范 在合格的艾滋病检测实验室进行 为了减少检测的错误和误差 应采取严格的质量保证 质量控制和质量评价措施 注意实验室生物安全防护和职业暴露预防 严格遵守实验室标准操作程序 SOP 按照试剂盒说明书操作 注意防止样品间交叉污染 10 检测程序 筛查试验 重复检测 确认试验 11 HIV抗体筛查 职责经省卫生行政部门指定验收专家组 验收合格的HIV筛查实验室 方法 试剂酶联免疫实验 第三代双抗原夹心法试剂 ELISA 快速检测明胶颗粒凝聚实验斑点ELISA斑点免疫胶体金艾滋病唾液检测卡 12 采集标本 血液标本一般采集肘正中静脉血液3 5ml婴幼儿可选择颈外静脉 13 采集标本 以肘静脉取血为例 选择适宜静脉 在上臂扎上压脉带 先用25g L碘酊棉签于欲穿刺处皮肤从内向外做环形消毒 待干后再用0 75L L乙醇棉签以同样方式擦去碘迹 14 采集标本 取无菌注射器 按牢针头 使针头斜面与针筒刻度平行 并查看有无阻塞和漏气 采用一次性注射器还应注意包装是否密封 有无过期 否则不得使用 15 采集标本 嘱病人紧握拳头 使静脉显露 左手拇指固定穿刺部位下端 右手持注射器 使针筒刻度向上 先以约30 角度沿静脉正面进针 快速穿过皮肤刺入静脉中央 见回血后 右手固定注射器 用左手缓缓抽出注射器针栓 至所需血量后 解除压脉带 放松拳头 以消毒棉签压住穿刺孔 拔出针头 16 采集标本 取下针头 将血液沿管 瓶 壁缓慢注入容器内 待血液自行凝固 血块收缩后 即可分离出血清 如需全血或血浆 则将血液注入事先准备的抗凝管 瓶 中 轻轻混匀 防止凝固 即为抗凝血 经适当离心可分离出血浆 血清和血浆的主要差别是 血清中无纤维蛋白原 采样完毕后应同时填写采样登记表 17 标本处理 将采集好的血液标本放入离心机3000转 分离心5分钟取出标本 用移液器 或一次性滴管 将血清移入血清储存管中 1 5ml 检测完毕后将血清储存管盖紧 放入冰箱冷冻室保存至少2个月 18 胶体金快速检测技术 19 一 原理 本品采用胶体金免疫层析技术 在玻璃纤维膜上预包被金标记HIVgp160和gp36抗原 在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被HIVgp41 gp36混合抗原和抗HIVgp41抗体 当检测进行时 样品中HIV抗体可与金标记的HIV抗原结合形成复合物 由于层析作用 使复合物沿试纸条向前移动 若样品中含有可被检测的HIV抗体 则与检测线预包被的HIV抗原结合形成 金标记HIV抗原 HIV抗体一HIV包被抗原 复合物凝聚显色 若样品中没有HIV抗体或HIV抗体的含量低于检测限时 则不形成复合物而不显色 20 二 试剂盒组成 1 HIV 1 2 抗体胶体金试纸条 板50人份 盒 5条 lO袋 2 说明书1份 3 稀释液l份 4ml 瓶 21 三 操作步骤 根据试剂盒说明书进行操作 一般操作步骤 1 将密封袋打开 取出所需试纸条 板 2 样本检测 取4Oul待检样本加在试纸条 板的加样区 再在近加样区上方加1滴稀释液 3 30分钟内观察并记录试验结果 22 四 结果判断 阳性结果 在试纸条 板的检测窗和质控窗位置上各出现一条紫红色条带 阴性结果 仅在试纸条 板的质控窗位置上出现一条紫红色条带 无效结果 在试纸条 板的检测窗和质控窗位置上均未出现紫红色条带为试验无效 23 五 实验结果判断示意图 24 六 注意事项 1 被检样品 试剂应在室温2O 左右平衡30分钟后检测 被检品应为新鲜样品 如发现试纸条 板密封袋破损则需废弃 2 高血脂和高胆红素样品对检测结果无显著性影响 但溶血样品 尤其是大量溶血样品对检测结果有显著影响 3 当质控窗与检测窗上均不出现紫红色条带时 应重新测试 如果问题仍然存在 应立即停止使用此批号产品并与当地供货商联系 25 七 胶体金快速试剂实物 26 HIV检测中的保密的认识 HIV检测前后咨询中获得的隐私HIV检测结果与专业人员的讨论在各种场合中对受检者的讨论 包括会议 档案记录与保存受检者 家属 朋友和单位传报医院匿名检测系统能确保保密 但不利于医学管理 27 初筛结果处理 初筛 出具 HIV抗体阴性 报告初筛 可出具 HIV抗体待复检 的报告 但不能出具阳性报告 28 29 重复检测 职责HIV筛查实验室或HIV确认实验室 筛查实验室拟作复检 加强自我质量控制 试剂选择 两种不同原理或厂家品种 酶联免疫试剂快速检测试剂 30 重复检测结果处理 复检 出具 HIV抗体阴性 报告复检 可出具 HIV抗体待复查 的报告 但不能出具阳性报告 送确认填写复查送样单 两人签字原样或新样连同送样单送确认实验室 31 确认实验 职责确认实验室 检测方法免疫印迹实验 WB 线性免疫实验 LIA 免疫荧光实验 IFA 32 确认结果解释 1 确认阴性 进行阴性咨询2 确认阳性 进行阳性咨询3 不确定结果按照 全国艾滋病检测技术规范 的规定进行随访 33 4 当样品中抗体含量极高时 质控窗条带有所减弱 但此结果仍视为有效结果 若需进一步确认 可用HIV抗体阴性血适量稀释后再作测试 5 本品检测阳性结果须进行确证试验确证 6 测试过程中所接触血液样品 一律视为HIV阳性操作 7 30分钟后观察的结果无效 34 实验室生物安全 35 生物危险 感染性的致病因子 无论是直接感染 还是间接地散播到环境中去 对人类 动物或植物都是一个现实的或潜在的危险 Animals Humans Plants 36 实验室生物安全 操作者 操作对象 环境 37 实验室的生物安全规范 实验室的运行规范仪器设备的使用规范针对感染性材料的操作规范个人防护用品的使用规范 38 病原微生物实验室的生物危险 39 实验室主要生物危害 微生物气溶胶吸入刺伤 割伤皮肤 黏膜污染食入感染的实验动物咬伤 还有许多不明原因的实验室相关感染 40 Pike等对3921例实验室相关感染统计分析结果发现 已知原因的实验室感染只占全部感染的18 不明原因的实验室感染却高达82 对不明原因的实验室感染的研究表明 大多数可能是病原微生物形成的感染性气溶胶在空气扩散 实验室内工作人员吸入了污染的空气感染发病的 41 实验室微生物气溶胶的种类 飞沫核气溶胶粉尘气溶胶 两类微生物气溶胶对实验室工作人员都具有严重的危害性 其程度取决于微生物本身的毒力 气溶胶的浓度 气溶胶粒子大小 以及当时实验室内的微小气候条件 研究发现 粒径 100 m的飞沫沉降很快 而粒径5 m的飞沫核能够被呼吸道的粘膜捕获 42 产生微生物气溶胶的其它因素 另外 一些在自然环境中可以繁殖的微生物 一旦进入实验室的空调或通风系统 污染了空调的冷却水 则可以形成更广泛的微生物气溶胶污染 如军团菌污染导致的肺炎 除了实验室操作可以产生微生物气溶胶外 患有呼吸道传染病或皮毛上染有病原微生物的实验动物也可以产生微生物气溶胶 微生物气溶胶在一个实验室内产生后 还可以通过气流转移到同一建筑物的其他地方 甚至污染整个建筑物的空气 43 生物安全实验室的运行规范 44 一 实验室的进入 未经批准 非实验室工作人员不得进入实验室工作区域 儿童不得进入实验室工作区域 实验室的门应保持关闭 与实验室工作无关的动物不得带入实验室 45 二 防护要求 在实验室工作时 必须穿着合适的工作服或防护服 在进行可能接触到血液 体液以及其他具有潜在感染性的材料的操作时 应戴上合适的手套 操作完毕摘除手套后必须洗手 在处理完感染性实验材料以及在离开实验室工作区域前 都必须洗手 为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染 碰撞或人工紫外线辐射的伤害 必须戴合适的安全眼镜 面罩 面具 或其他防护设备 46 二 防护要求 严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域 不得在实验室内穿露脚趾的鞋 禁止在实验室工作区域进食 饮水 吸烟 化妆和处理隐形眼镜 禁止在实验室工作区域储存食品和饮料 在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内 47 48 49 办公室 50 51 三 有关操作的指导原则 严禁用口吸移液管 严禁将实验材料置于口内 严禁舔标签 所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行 应限制使用注射针头和注射器 注射针头和注射器不能用于移液或用作其他用途 52 三 有关操作的指导原则 实验室应制订并执行处理溢出物的标准操作程序 出现溢出 事故以及明显或可能暴露于感染性物质时 必须向实验室负责人报告 实验室应如实记录有关暴露和处理的情况 保存相关记录 污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染 采用化学或物理学方法 根据所处理的微生物因子的危险度评估结果准备专门的污水处理系统 只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室 53 四 实验室工作区的管理原则 实验室应保持清洁整齐 严禁摆放和实验无关的物品 每天工作结束后应清除工作台面的污染 若发生具有潜在危害性的材料溢出应立即清除污染 所有受到污染的材料 标本和培养物在废弃或清洁再利用之前 必须先清除污染 感染性材料的包装和运输应遵循国家和 或国际的相关规定 如果窗户可以打开 则应安装防止节肢动物进入的纱窗 54 55 56 五 生物安全管理的指导原则 实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或 和操作手册 实验室应能提供常规的实验室安全培训 并建立制度 57 五 生物安全管理的指导原则 实验