实验室生物安全与个人防护.ppt

实验室生物安全与个人防护 胡晓倩 主要内容 一 实验室生物安全二 实验室工作中面临的生物危害及防护 定义 实验室生物安全 为避免生物危险因子造成实验室人员暴露 向实验室外扩散并导致危害 保护实验室人员及其周围环境 人员安全的综合措施 实验室生物危害 指在微生物和生物医学实验室研究过程中对人 环境 生态和社会造成的危害和对环境造成的污染 实验室感染 在从事生物危害因子操作时 当实验室硬件条件缺失 管理制度不完善以及不规范的操作程序 会导致实验室人员暴露并出现感染 生物危害因子 病毒 细菌 真菌 毒素和寄生虫等 组织细胞的培养和某些类型的核酸转染 来自感染的人和动物的血液 体液和各种组织等 病原微生物分类 我国在 病原微生物实验室生物安全管理条例 中 按危害程度将病原微生物分为四类 第一类危害程度最高 第一 二类病院微生物统称为高致病性病原微生物 那些 我国尚未发现或已经宣布消灭的微生物 被列为一类病原微生物 第四类危害程度最低 即由第一类至第四类微生物的危害程度是递减的 病原微生物分类 第一类病原微生物 能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物 以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物 如天花病毒 黄热病毒等 第二类病原微生物 能够引起人类或者动物严重疾病 比较容易直接或者间接在人与人 动物与人 动物与动物间传播的微生物 如结核分枝杆菌 斑疹伤寒立克次体 布氏杆菌等 第三类病原微生物 能够引起人类或者动物疾病 但一般情况下对人 动物或者环境不构成严重危害 传播风险有限 实验室感染后很少引起严重疾病 并且具备有效治疗和预防措施的微生物 如链球菌 脑膜炎奈瑟菌 致病性大肠埃希菌等 第四类病原微生物 在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物 生物安全实验室 生物安全实验室 biosafetylaboratory BSL 是指通过规范的实验室设计 实验设备的配置 个人防护装备的使用等建设的实验室 按生物安全防护水平将生物安全实验室分为四级 biosafetylevel1 4 BSL1 4 一级为最低 四级为最高 一级 二级实验室不得从事高致病性病原微生物的实验活动 三级 四级实验室从事高致病性病原微生物的实验活动 安全设备是生物安全实验室的一级防护屏障 主要包括生物安全柜 高压灭菌器 离心机安全罩等 实验室设施是生物安全实验室的二级防护屏障 生物安全柜 生物安全柜 biosafetycabinet BSC 是直接操作危险性微生物时所用的负压过滤排风柜 其防护原理是 从安全柜排除的空气经过高效过滤器 HEPA过滤器 过滤释放 以保护外环境 安全柜内形成的负压和气幕可以防止气溶胶外泄 以保护操作者 送入安全柜工作区的空气经过HEPA过滤器过滤 在安全柜内形成百级清洁度的环境 以保护操作对象 生物安全柜的使用 参考国家标准和相关文献 对所有可能的使用者介绍生物安全柜的使用方法和局限性 发给工作人员书面的规章 安全手册或操作手册 特别需要明确的是 当出现溢出 破损或不良操作时 安全柜就不再能保护操作者 生物安全柜运行正常时才能使用 生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板 生物安全柜的使用 安全柜内应尽量少放置器材或标本 不能影响后部压力排风系统的气流循环 安全柜内不能使用本生灯 否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器 允许使用微型电加热器 但最好使用一次性无菌接种环 所有工作必须在工作台面的中后部进行 并能够通过玻璃观察挡板看到 尽量减少操作者身后的人员活动 操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流 生物安全柜的使用 不要使实验记录本 移液管以及其他物品阻挡空气格栅 因为这将干扰气体流动 引起物品的潜在污染和操作者的暴露 工作完成后以及每天下班前 使用消毒液对生物安全柜的表面进行擦拭 在安全柜内的工作开始前和结束后 安全柜的风机应至少运行5min 在生物安全柜内操作时 不能进行文字工作 离心机的使用 在使用实验室离心机时 仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件 按照操作手册来操作离心机 离心机必须放置在地面上 使小个子工作人员也能够看到离心机内部 以正确放置十字轴和离心桶 用于离心的试管和标本容器应当始终牢固盖紧 最好使用螺旋盖 离心桶的装载 平衡 密封和打开必须在生物安全柜内进行 离心桶和十字轴应按重量配对 并在装载离心管后正确平衡 离心机的使用 空离心桶用蒸馏水或乙醇 异丙醇 70 来平衡 盐溶液或次氯酸盐溶液对金属具有腐蚀作用 因此不能使用 当使用固定角离心转子时 必须小心不能将离心管装得过满 否则会导致漏液 每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被污染或弄脏 如污染明显 应重新评估离心操作规范 每天检查离心转子和离心桶是否有腐蚀或细微裂痕 每次使用后 要清除离心桶 转子和离心机腔的污染 使用后将离心桶倒置存放使平衡液流干 BSL 1实验室的设施和设备要求 BSL 1实验室的适应操作对象是具有明确生物学特征的 已知在健康成人中不引起疾病的 对实验室工作人员和环境危害性最小的生物因子 对应我国第四类危害的微生物 如大肠埃希菌 BSL 1实验室的安全设备个人防护 对高压灭菌器 离心机安全罩没有要求 必要时可配备生物安全柜 实验室工作人员应穿着工作服 戴防护眼镜 皮肤有破损或皮疹时应戴手套 BSL 1实验室的设施和设备要求 BSL 1实验室设计建造特殊要求 应该设有洗手池 实验室墙壁 天花板和地板易于清洁 地面防滑 不得铺地毯 实验室台面不透水 耐腐蚀 耐热 实验室的橱柜和实验台面应牢固 实验室如有可开启的窗户 应设置纱窗 实验室应保证工作照明 避免不必要的反光和强光 应有适当的消毒设备 BSL 2实验室的设备和设施要求 BSL 2实验室安全设备和设施适用于操作我国危害程度第三类 少量二类 的致病性生物 适用于未知病原的血液 体液和组织检验 在BSL 2实验室的工作人员可能暴露于感染性物质的主要途径是皮肤或黏膜破损 污染的利器或针头的伤害 呼吸道或粘膜暴露于感染性气溶胶或飞溅物等 BSL 2实验室的设备和设施要求 BSL 2实验室的安全设备个人防护 需 级生物安全柜 应设洗眼设施 必要时应有应急喷淋装置 洗眼设施应安装在BSL 2实验室出口处的洗手池附近 个人防护设备包括 工作服外穿防护服 戴帽子 口罩 当操作的感染性材料不可能在生物安全柜内进行而必须在生物安全柜外操作时 为防止材料溅出或雾化产生气溶胶的危害 必须使用面部防护装置 如护目镜 面罩 个体呼吸防护品 BSL 2实验室的设备和设施要求 BSL 2实验室设计建造特殊要求 在BSL 1实验室的基础上增加以下内容 实验室门应带锁并可自动关闭 实验室的门应有可视窗 应有足够的存储空间摆放物品 门上具有符合要求的BSL 2实验室生物危险警示标志 应通风 如果使用窗户自然通风 应有防虫纱窗 有可靠的电力供应和应急照明 二 实验室人员工作中所面临的生物危害及个人防护 实验室人员的防护装备检验人员职业危害与防护注意事项 生物安全实验室个人防护装备 所涉及的防护部位 1 眼睛2 头面部 呼吸道3 躯体4 手5 足6 耳 听力 装备包括 1 眼镜 安全镜 护目镜 2 帽子 口罩 面罩 防毒面具3 防护衣 实验服 隔离衣 连体衣及围裙 4 手套5 鞋套6 听力保护器等 手部防护装备 手套 1 在实验室整个工作过程中都应使用手套进行操作 2 在接触感染性物质 血液 体液 分泌液 渗出液以及接触粘膜和非完整皮肤时 必须使用合适的手套以保护工作人员避免受到污染物溅出或生物污染的事故所造成的损害 3 手套被污染 应该尽可能早的脱下 消毒后丢弃 4 手套应按所从事操作的性质 符合舒适 灵活 握牢 耐磨 耐扎和耐撕的要求 并应对所涉及的危险提供足够的防护 5 对实验室工作人员进行手套选择 使用前的配戴及使用后的摘除等培训 6 一次性手套不得重复使用 使用后必须先消毒后丢弃 手部防护装备 手套 规范使用手套的几个要点 1 手套的选择 生物安全实验室一般使用乳胶橡胶或聚腈类或聚氯乙烯手套用于对强酸 强碱 有机溶剂和生物危害物质的防护 2 手套的检查 在使用手套前应该检查手套是否褪色 穿孔 漏损 或有裂缝 可以通过充气试验 将其进入水中观察是否有气泡来检查手套的质量 手部防护装备 手套 手套的使用 一般情况下 佩戴一副手套即可 BSL 1和BSL 2实验室 若在生物安全柜中操作感染性物质 BSL 3实验室 应佩戴两幅手套 在操作过程中 外层手套被污染 立即用消毒剂喷洒手套并脱下后丢弃在生物安全柜中的高压灭菌袋中并立即戴上新手套继续试验 戴好手套后应完全遮住手及腕部 如必要可覆盖实验服衣袖 手部防护装备 手套 手套的清洗和更换 使用一次性手套 不可重复使用 用后立即进行高压灭菌消毒然后丢弃 不得戴着手套离开实验室区域 工作人员在完成感染性物质试验 离开生物安全柜之前 应该脱去外层手套丢入生物安全柜内的高压灭菌袋中 然后用消毒液喷洗内层手套 以避免污染门捏收 电灯开关 电话等 BSL 2和BSL 3实验室 手部防护装备 手套 避免手套 触摸污染 戴手套的手避免触摸鼻子 面部和避免触摸或调整其他个人防护装备 如眼镜等 避免触摸不必要的物体表面 如灯开关 门捏手等 如果手套被撕破应该脱去 在换戴新手套前应清洗手部 注意尽量不去触摸工作台面和其他物品 手部防护装备 手套 戴手套注意要点 在实验室工作中要一直保持戴手套状态并选择正确类型和尺寸的手套 手插入手套后 将手套遮盖实验服袖口 戴手套的手要远离面部 手部防护装备 手套 脱手套过程及注意要点 用一手捏起另一手近手腕部处的手套外缘 将手套从手上脱下来并将手套外表面翻转入内 用戴着手套的手拿住该手套 用脱去手套的手指插入另一手套腕部处内面 脱下该手套使其内面向外形成一个由两个手套组成的袋状 丢弃在高压消毒袋中并进行消毒处理 洗手 应该安装洗手装置 该装置可以是脚控或红外控制的洗手池 或者配置一个酒精擦手器 洗手是一种减少有害物质暴露的有效措施 要经常洗手 在处理活体病原材料或动物等生物危害物质后 在脱去手套之后和离开实验室之前 在脱卸个人防护装备时 若发生手部可见的污染 应洗手后再继续脱卸其他个人防护设备之前 洗手一般用肥皂和水或使用酒精擦手器 口罩和防护眼镜 当处理血液 体液 分泌物 排泄物等 有可能溅出时应戴口罩和防护眼镜 护目镜安全镜 防护服 实验服 隔离衣 连体衣 围裙以及正压防护服 1 在实验室中工作人员应该一直或持续穿上防护服2 清洁的防护服应放置在专用存放处3 污染的防护服应放置在有标志的防漏消毒袋中4 每隔适当的时间应更换防护服以确保清洁5 当防护服被危险材料污染应立即更换6 离开实验室区域之前应脱去防护服 鞋套 在实验室中存在物理 化学和生物危险因子的情况下 穿合适的鞋子和鞋套或靴套 可以避免实验人员足部 鞋袜 受到损伤 BSL 2和BSL 3实验室要坚持穿鞋套或靴套 禁止在生物安全实验室穿凉鞋 拖鞋 露趾鞋和机织鞋面的鞋 足部防护装置不得离开实验室 BSL 1实验室个人防护要求 工作人员在实验室应穿工作服 戴手套必要时佩戴防护眼镜完成实验 工作服必须脱下留在实验室并定期消毒洗涤 BSL 2实验室个人防护要求 除符合BSL 1实验室的要求外 还应该符合系列条件 在工作服外加罩衫或穿防护服 戴帽子和口罩 如可能发生感染性材料的溢出或溅出 宜戴两幅手套 工作完全结束后方可除去手套 当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行 而必须采取外部操作时 为防止感染性材料溅出或雾化危害 必须使用面部保护装置 护目镜 面罩 个体呼吸用品或其他防溅出保护设备 个人防护装备的安全脱卸 生物安全实验室个人防护装备不得带离实验室 脱卸顺序是 外层手套 面罩或护目镜 隔离衣 口罩或防毒面具或防护罩 鞋套 内层手套 如在脱卸个人防护装备时发现装备可能受到潜在的污染或已经受到明显污染 必须先戴一副洁净的手套后再卸去其余的装备 个人防护装备的消毒 凡在生物安全实验室中使用过的个人防护装备均应被视为污染物 应消毒处理 一次性个人防护用品 如手套 鞋套等 使用后放入医疗废物袋 高压蒸汽灭菌后 归入医疗废物统一处理 可重复利用的棉织制品 如工作服 帽子 口罩等 可用121 15min压力蒸汽灭菌后使用 检验人员职业危害与防护注意事项 血源性传播疾病危害 目前已确定的20多种可经血液传播的疾病 被污染的器械等刺伤 割伤是医院检验人员感染血源性乙型肝炎 HBV 丙型肝炎 HCV 艾滋病 AIDS 的主要途径 检验人员被针刺伤占第二位 血源性传播疾病危害 乙型肝炎 HBV 我国是HBV高发地区 HBV表面抗原的携带率为8 20 约有1 3亿人 HBV是检验人员面临传播危险性最大的血源性疾病 丙型肝炎 HCV 检验人员在工作中有被HCV感染的可能 据统计 护士和检验人员HCV感染率较高 抗 HCV阳性率分别为5 3 17 318 和4 9 3 61 而且有76 7 的HCV感染者为经常接触病人血液标本的护士和检验人员 血源性传播疾病危害 艾滋病 AIDS AIDS的流行对检验人员造成了职业性感染的威胁 HIV在血液中的浓度通常在100 104拷贝 ml 被HIV污染的锐器刺伤而感染的比率为0 3 美国疾病控制中心最新资料显示 截止到2000年底美国医护人员中已有57人被确诊感染了艾滋病毒 其中实验室技术人员19人 有报道说 广东去年一年医护人员在治疗护理艾滋病人的过程中就发生了15起职业暴露 根据美国疾病控制中心1988年对HIV职业暴露的建议 以下几个方面将增加暴露后感染的危险性 器械上有明显血迹 器械直接接触患者的静脉或动脉血管 伤口较深 无保护接触患者血液时间较长 晚期患者或患者病毒载量较高 血源性传播疾病的防护措施 血源性传播疾病是检验人员的主要职业危害 我国有学者报道 皮肤损伤是检验人员职业接触HBV HCV HIV等疾病的主要途径 在调查北医大一院和三院28名医护人员发生意外损伤的种类构成中 针刺损伤占首位 占调查人数的71 6 与国外调查结果一致 综合不同国家或地区的研究资料 检验人员因针刺或损伤接触受污染的血 感染HBV的危险性为2 40 感染HCV为3 10 感染HIV为0 2 0 5 血源性HBV HCV HIV感染在检验人员中占绝大多数 血源性传播疾病的防护措施 无论病人是否已被诊断有传染病 都应视为传染病人 1987年6月 美国医院联合咨询委员会对于医院的传染性疾病发布了 工作人员对血液传染疾病保护声明 建议医院把所有病人的血液和体液都视为具有危险性 所有标本 试剂 使用中能造成伤害的所有锐器 接触过标本的仪器设备 都应视为传染源 在实验时或是在维护时都要十分小心 应彻底消毒处理 避免对人造成感染 血源性传播疾病的防护措施 严格物品分类 检验后的废弃物分别装入不同污染袋中 检验人员接触污物时 必须戴手套 戴口罩和洗手 减少皮肤粘膜接触 严格消毒隔离程序 避免意外损伤 必要时戴防护眼镜 血源性传播疾病的防护措施 洗手是控制感染的重要步骤 也是预防感染最简单 最有效 最重要的措施 检验人员应特别重视 并认真坚持 在高危区域 如ICU 隔离间 以及做侵入性操作之前 需用酒精或0 5 洗必泰进行手消毒 临床实验室标准化协会 NCCLS 建议在下列情况下必须洗手 1 当手上沾有肉眼可见的血迹时 2 工作完成后及离开实验室前 3 脱手套后 4 在饮食 吸烟 化妆 换隐形眼镜及上厕所前 5 在任何需要手与粘膜 眼睛或破损皮肤接触前 血源性传播疾病的防护措施 戴手套 戴医用乳胶手套可以为检验人员提供很好的保护 乳胶手套尽管不能避免针头造成的机械损伤 但是可以在很大程度上减少皮肤与血液的接触 而且 当针头造成意外损伤后 乳胶手套还可以起到一种阻挡 封闭作用 减少进入伤口的血量 从而降低感染可能 乳胶手套应为一次性医用产品 不可反复使用 应从质量过关的厂商购买 使用前后应检查是否有肉眼可见的破损 使用中如手套沾上血或因理化因素出现破损时 应及时更换 因为HBV可以通过间接接触传染 使用实验室中的电话或电脑时 应摘手套 血源性传播疾病的防护措施 如不慎皮肤损伤 应让血尽量流出 再用肥皂 水冲洗 3 碘酒及75 酒精消毒 并尽快注射疫苗 对一些经免疫注射可降低传染的疾病 应推行预防接种 检验人员被带有艾滋病病毒的针头刺伤后 应由专门医生进行检查 尽量在接触后几小时内开始预防工作 并注意监测受伤人员的血清学变化和应用抗病毒药物 血源性传播疾病的防护措施 检验人员必须懂得常见血源性传播疾病知识 了解其危害因素 传播方式与途径 消除恐惧心理 如HIV对理化因素的抵抗力很弱 常用的消毒剂都可以将其灭活 血源性传播疾病的防护措施 实验室的常规管理 实验室应宽敞 整洁 实验室内应禁止饮食 吸烟等活动 外人未经许可 不得进入实验室 实验室负责人应对本室人员进行实验室安全教育 制定书面安全规定 并监督实施 严格按照医院有关规定弃置实验室废物 化学试剂的危害 酸 碱气体 如盐酸 硝酸 硫化氢 二氧化硫 氰氢酸 氨等气体 对人的呼吸系统和眼有强烈的刺激性 大量吸入会引起呼吸麻痹 化学消毒剂 大多数化学消毒剂对皮肤有刺激作用 长期接触或吸入含有较高浓度的戊二醛 84消毒液或含氯的空气 二甲苯 可引起结膜炎 皮炎 头晕 头痛 胸闷 咽喉干痒 中毒 皮肤色素沉着等症状 化学试剂的危害 有毒的化学物质 苯类能刺激眼睛 皮肤和呼吸系统 破坏皮肤自然油脂 引起粘膜红肿 干燥 影响中枢神经系统和红细胞的生成 长期接触会引起癌症 高浓度或反复接触能引起肝 肾损害和血液病 还可扩散到实验室空气中 牢固粘附在物体的表面 对实验人员增大了接触的危害性 反复接触甲醛 可能引起过敏和癌症 能使过敏个体引起哮喘 接触性皮炎 不过敏的人 长期吸入低浓度甲醛可能引起慢性肺损伤 人类接触甲醛 将导致白血病 肾 口腔 喉 肺 脑肿瘤的危害性增加 化学试剂的防护 化学试剂对实验室