红曲中试及标准化

1,以洛伐他汀盐为主要活性成分的云南红曲的中试及标准化,2,项目的背景,心脑血管疾病是当今严重危害人类生命健康的疾病之一。该类疾病是因血脂异常、动脉粥样硬化所致，血脂的调节是防治心脑疾病的重要因素。目前临床上应用药物：他汀类、贝特类、胆汁酸螯合剂和烟酸类。其中他汀类药物因其效果好、耐受性好、安全可靠、副作用低、能长期服用等特点，应用最为广泛。 “云南红曲”的有效成份“红曲他汀（洛伐他汀盐）”，活性高于上市药物“洛伐他汀”。 （本公司专利）,3,我方独立开发的生产菌种与发酵和后处理工艺生产出的“云南红曲”，药理试验表明不但具有调节血脂功能，还有保护心脑血管、稳定动脉粥样斑块等作用。红曲法定标准较为滞后，以我方专利为基础的红曲标准化研究，将促进法定标准的完善，也有利于公司产品的竞争。,4,5,6,红曲的国内研究应用进展,红曲霉的应用在中国己有一千多年的历史，过去主要作为食品添加剂。医用记载：本草纲目“红曲气温味甘，无毒。主治消食活血、健脾燥胃，治赤白痢，下水谷。”以红曲为主要成分的药物已上市，如北大维信“血脂康胶囊”；成都地奥和云南永安制药的“脂必妥片”。年销售近6亿人民币。以红曲为原料的保健品有多家，年销售约2亿人民币。,7,红曲的国外研究应用进展,1979年，日本学者远藤章从红曲霉中分离出胆固醇生物合成过程中HMG-CoA还原酶的抑制剂洛伐他汀。1987年美国FDA批准洛伐他汀上市，因疗效好而获得广泛应用。之后，又有8种上市，形成400亿美元市场。据2007年美国春季医药、保健品原料会的统计，美国年需求红曲量大于1000吨。“血脂康胶囊”已在美国进行期临床试验，有可能成为我国第一个为国际认可的中药。,8,项目研究内容,强化次生代谢途径，利用对关键酶活性的控制、培养基优化、细胞调节因子的选择等技术，使发酵生产水平得到提高。运用过程工程“三传一反”原理，对发酵过程进行放大研究，达到年产20吨“云南红曲”。采用不同含量（总洛伐他汀量）及不同比例（两种洛伐他汀比例）的红曲，按照新药研究的指导原则进行动物试验,以初步确定红曲中两种分子构型洛伐他汀的比例与其疗效、安全性之间的关系。进行红曲标准化研究，完成红曲标准的研究修订，标准草案经省药检所复核后，向国家申报。,9,项目主要创新点,根据代谢工程原理，初步确定了红曲中有效成分他汀类化合物合成过程中的关键酶，通过培养基优化，细胞调节因子的选择，使红曲发酵水平大于35mg他汀/g红曲（为文献报道的最高值）,在技术上具有原创性。,10,对创新技术进行产业化开发，运用过程工程“三传一反”原理，对“云南红曲”发酵过程进行放大研究，初步确定了中试放大生产的工艺。通过后处理工艺可制备高含量他汀盐的红曲，进行标准化研究。促进红曲的中药现代化研究。,11,项目关键技术,本项目采用筛选出的特有红曲霉菌种。通过试验与代谢工程分析理论相结合，初步确定了红曲中有效成分他汀类化合物合成过程中的关键酶，并实现对关键酶的人工调控。运用过程工程“三传一反”原理，对小试工艺进行放大。通过改变后处理工艺条件获得酸式洛伐他汀盐含量比例不同的红曲；并进行进行药效学和急性毒性试验，确定红曲中两种分子构型洛伐他汀的比例与其疗效、安全性之间的关系。修订红曲中他汀类物质含量测定方法。,12,技术路线,云南红曲是采用菌种培养技术、固态发酵工艺及后处理工艺而制成的。生产工艺过程包括： 菌种制备：菌种冻干管-菌种活化-斜面培养-液体菌种 发酵培养：培养基配制-灭菌-接种-发酵培养 下游加工：真空微波干燥-两级粉碎-混合-真空包装,13,项目实施达到的技术与性能指标,发酵水平：小试试验以他汀类物质含量计算，发酵产物（干品）他汀类物质35mg/g以上，酸式洛伐他汀盐含量比例大于总他汀85%；中试生产：20吨/年规模稳定生产，他汀类物质22mg/g以上，酸式洛伐他汀盐含量比例大于总他汀85%；产品质量：云南省中药材标准（2005年版）：红曲（云YCBZ0020-2005）。标准化研究：完成红曲标准修订草案，标准草案经省药检验所复核合格，向国家有关部门提出申请。,14,色素红曲与功能红曲发酵工艺比较,传统色素红曲发酵工艺具有高温、高酸度、培养基成分简单、周期短的特点，使得发酵过程中其他杂菌难以大量繁殖，故色素红曲的发酵过程较易控制，产品质量相对稳定。功能红曲的发酵难度较大：物料接近中性，有效成分他汀类物质的累积发酵温度应较低（小于28），培养基成分复杂，营养成分丰富、发酵周期长，这些特点决定了功能红曲的生产必须严格执行无菌操作规程；在发酵过程中要严格控制温度及湿度的均匀度。,15,前期工作基础,合格的菌种特有发酵工艺及后处理工艺红曲的标准化（基于专利）市场定位,16,红曲菌种,权威机构鉴定（中国科学院微生物研究所国家菌种保藏中心）中国药典规定红曲药材及饮片制备菌种国家规定保健食品用红曲的制备菌种完成菌种毒力试验、菌种不含耐药因子试验（保健品原料新规定）经检验本菌种发酵产物不含桔霉素,17,特有发酵工艺及后处理工艺,发酵工艺 发酵水平高、易于放大。后处理工艺 可生产洛伐他汀盐为主要活性组分的红曲。,18,红曲原料的标准化,我方提出的云南省（红曲）药材标准为最完善的法定红曲药材标准。 （云 YCBZ 0020-2005）,19,“云南红曲”的知识产权保护,20,市场定位,云南红曲是中药、保健品的原料！,21,潜在市场,新研制的药品：2004年以来申报的血脂康、脂必妥系列药物制剂达100多个。新批准保健品：2004年以来批准的含红曲保健品为27个。北美年需求红曲量大于1000吨。,22,市场营销策略,大力推进基于自主知识产权红曲标准的建立，向国内用户大力宣传，争取更大市场份额。积极参与红曲终端产品的生产、销售，协助客户做好终端市场宣传工作。通过网络、专业学术会议、专业原料展会等形式对产品进行宣传，以争取新客户。加强对外联络，通过与外贸经销商共建销售网络，建立长期紧密利益共同体。,23,项目进度（三个阶段 ）,第一阶段：2007年8月2008年2月。（1）完善红曲菌种保存，进行培养基及操作参数的优化；（2）进行扩大规模试验（200公斤/月），确定放大方案。（3）制备用于药效、药理试验的的红曲样品，制定试验方案。（4）探索以洛伐他汀为内标的酸式洛伐他汀的测定方法。,24,第二阶段：2008年3月2008年8月。（1）确定菌种保存、活化标准工艺，实现发酵工艺动态调控；（2）实现扩大规模（10吨/年）稳定生产，确定中试生产线改造方案。（3）进行药效学初步试验。（4）确定含量及鉴别的方法，按中国药典规定进行研究。,25,第三阶段：2008年9月2009年7月。（1）完成20吨/年红曲生产线改造，实现稳定连续生产。（2）获得生产红曲的卫生许可证。（3）完成红曲标准修订