中药制剂分析含量测定

中药制剂分析,（Analysis of Chinese Preparation）,中药学衔接班,第四章 中药制剂的含量测定,学习目的：,反映其制剂中有效成分或者毒性成分的含量衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的质量优劣,1 样品的处理,样品处理的主要作用释放被测组分，制成稳定试样除去杂质，纯化浓缩试样形式符合测定的要求样品处理的主要步骤1. 样品的粉碎2. 样品的提取3. 样品的分离纯化,1 样品的处理,样品的粉碎目的1. 取样均匀 2. 提取完全粉碎设备粉碎机、研钵、匀浆机 粒度大小合适 样品粉末的分级（过筛） 防止污染或损失 仪器设备洁净 粉尘和较大颗粒的损失。,1 样品的处理,样品的提取 关键提取完全溶剂的选择水、酸水、碱水亲水性的有机溶剂：乙醇（酒精）、甲醇（木精）、丙酮亲脂性的有机溶剂：石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷,1 样品的处理,样品的提取 冷浸法 ：部分测定法（溶剂易挥发） 全部测定法（残渣需洗涤完全）优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少缺点：费时（12-24 h） 费溶剂（10-50倍）,1 样品的处理,样品的提取 回流提取法连续回流提取法,万应胶囊（黄连等）中盐酸小檗碱测定+HCl-70%乙醇溶液，加热回流1h,保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定+甲醇，加热回流至提取液无色为止,1 样品的处理,样品的提取 超声提取法原理：超声波的助溶作用优点：操作简便，提取速度快 需对超声频率、提取时间、提取溶媒等进行考察 超声波可能引起供试品成分的改变,1 样品的处理,样品的提取 超临界流体提取法 （Supercritical-fluid extraction，SFE）超临界流体特殊的物质状态密度-d液体 溶解能力强粘度-气体 传质快，有利于待测组分的扩散表面张力几乎为 0 浸润性能好,1 样品的处理,样品的提取 超临界流体提取法密度受压力、温度的影响大 改变对溶质的溶解能力加入甲醇、氯仿、苯等改变极性 提取不同极性的成分优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择性较高、节省溶剂、易于自动化，而且可避免使用易燃，有毒的有机溶剂，能与色谱和光谱等分析仪器直接联用。,1 样品的处理,样品的分离纯化 沉淀法,复方益母草口服液中水苏碱的含量测定利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。,蛇胆糖浆口服液含有大量糖，可用无水乙醇回流样品，冷后过滤，除糖以消除其干扰。,1 样品的处理,样品的分离纯化 蒸馏法适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子的生物碱、丹皮酚等最常用水蒸气蒸馏法共水蒸馏法通水蒸气蒸馏法水上蒸馏法利用盐析作用，提高蒸馏效果,1 样品的处理,样品的分离纯化 液-液萃取法直接萃取法萃取剂的选择 亲脂性有机溶剂：如苯、氯仿或乙醚弱亲脂性的溶剂：如乙酸乙酯、正丁醇等多次萃取（3-4次）调整水相酸度，提取有机酸、有机碱利用盐析作用，提高提取率,1 样品的处理,样品的分离纯化 液-液萃取法离子对萃取法BH+（水相）+ In-(水相) BH+In-（水相） BH+In-（有机相） 适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取 水相酸度的控制 离子对试剂的选择,1 样品的处理,样品的分离纯化 色谱法（层析法）分离的原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱按操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱装柱方法：湿法装柱、干法装柱微柱色谱（固相萃取）,1 样品的处理,样品的分离纯化 色谱法（层析法）硅胶：酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分的层析，强烈保留碱性化合物。洗脱顺序：极性小大氧化铝：带有碱性，分离一些碱性中草药成分，不宜用于醛、酮、醋、内酯等类型的化合物分离 中性氧化铝、酸性氧化铝：适用于酸性成分的分离,1 样品的处理,样品的分离纯化 色谱法（层析法）键合相硅胶（C18或ODS）：分开脂溶性和水溶性成分操作程序：柱的活化；上样；清洗；洗脱。洗脱顺序：极性大小,1 样品的处理,样品的分离纯化 色谱法（层析法）大孔树脂分为极性（丙烯酰胺聚合物 ）和非极性（苯乙烯和二乙烯苯的共聚物）型非极性型（XAD-2等）：分开脂溶性和水溶性成分 使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗,1 样品的处理,样品的分离纯化 色谱法（层析法）聚酰胺：与溶质形成氢键而产生吸附作用，常用于含酚、酸、醌类药物样品液的净化分离。硅藻土、纤维素：以水基质液作为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相的分配色谱洗脱顺序：极性小大,1 样品的处理,样品的分离纯化 色谱法（层析法）离子交换树脂：用于除去样品中的离子及萃取可离解化合物(弱酸、弱碱药物)活性炭：非极性吸附剂使用前需要先用稀盐酸洗涤，其次用乙醇洗，再以水洗净，于80干燥分开水溶性芳香族物质与脂肪族物质，单糖与多糖，氨基酸与多肽,1 样品的处理,样品的分离纯化 固相微萃取 （SPME） 集萃取、浓缩、进样于一体的样品前处理新方法,1 样品的处理,样品的分离纯化 消化法测定中药制剂中的无机元素湿法消化硝酸高氯酸法：适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制剂的破坏 对含氮杂环类有机物破坏不够完全。 硝酸硫酸法 与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采有此法。 硫酸硫酸盐法：常用于含砷或锑的有机样品的破坏，破坏后得到三价砷或锑。,1 样品的处理,样品的分离纯化 消化法测定中药制剂中的无机元素湿法消化硫酸硫酸盐法：常用于含砷或锑的有机样品的破坏，破坏后得到三价砷或锑。,干法消化 供试品 灰分 控制温度在420以下不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等，）有机样品的破坏。,灼烧灰化,(+NaCO3/MgO),2 含量测定方法的验证,2 含量测定方法的验证,定量分析方法验证,准确度、精密度,线性与范围,专属性、检测限、定量限,耐用性,2 含量测定方法的验证,准确度 准确度的高低用误差大小表示。 是指以测得结果与真实值之间的接近程度。 常用回收率试验来表示。（加样回收率） A为供试品所含被测成分量 B 加入对照品量 C为实际测得值,2 含量测定方法的验证,准确度准确度的要求 线性范围内进行操作 回收率要求 中药制剂 95%-105% 回收率的RSD 3% 对于制剂过程复杂回收率不得小于90% 生物样品分析85%-115 回收率的RSD 5%,2 含量测定方法的验证,精密度 表示在相同条件下,同一试样的重复测定值间的符合程 度。 精密度高低常用S或RSD表示。 标准偏差相对标准偏差,2 含量测定方法的验证,精密度重复性 同一浓度样品6次，进行评价。 不同浓度 3个 ，每个样品3次，进行评价。2. 中间精密度 考察随机变动因素的影响。 变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。（同一实验室）,2 含量测定方法的验证,精密度3. 重现性 不同实验室不同分析人员测定结果的精密度采用法定标准分析方法时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时重现性结果均应记载在起草说明中。4. 数据要求 报告S、RSD。,2 含量测定方法的验证,专属性 是指在样品中存在干扰成分的情况下，分析方法能够准确，专一地测定分析物的能力。线性范围耐用性,3 常用定量分析方法,重量分析法：挥发法、萃取法和沉淀法 酸碱滴定法 滴定分析法 沉淀滴定法 配位滴定法 氧化还原滴定法,化学分析法适用于含量较高的成分及无机成分的测定,3 常用定量分析方法,化学分析法重量分析挥发法：如水分测定萃取法：如冰片散中冰片的含量测定沉淀法：如苦参片中苦参总碱的含量测定,3 常用定量分析方法,化学分析法滴定分析酸碱滴定法： 测定生物碱、有机酸、内酯类 沉淀滴定法银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物四苯硼钠法：+生物碱白色沉淀亚铁氰化钾法,3 常用定量分析方法,化学分析法滴定分析配位滴定法（EDTA法和硫氰酸铵法）： 测定鞣质、生物碱及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等矿物类制剂的含量氧化还原滴定法：酚类、糖类及矿物药中Fe、As等,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法吸收系数法A=ECL对照品比照法对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（10010）计算分光光度法等吸收点法，系数倍率法，三波长法，导数光谱法,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法吸收系数法 根据Beer定律A=cl，若l和吸光系数或已知，即可根据测得的A求出被测物的浓度。例:小檗碱溶液在345nm处的 为728，现测的某小檗碱溶液在345nm出的吸收度为0.5824，计算该小檗碱溶液的浓度。,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法工作曲线法 从标准品吸光度-浓度曲线求得样品溶液的浓度。,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法工作曲线法标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分别置10mL量瓶中，各加50%甲醇至5mL，加5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4mL，再加50%甲醇至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法（附录V A），在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法对照品对照法 对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（10010） 在一定线性范围内根据Lambert-Beer 定律溶液的浓度和吸光度存在以下关系,对照品对照法例1：某种药制剂中有效成分的 365nm=766，在相同条件下分析某厂生产的该制剂的 365 nm=759，试计算其含量。例2：水苏碱在510nm处有最大吸收，现用标准品制的0.002%的水苏碱标准溶液,A510nm=0.502，某水苏碱供试品溶液在相同条件下测的A510nm= 0.626，试计算该供试品溶液中水苏碱的含量。,3 常用定量分析方法,对照品对照法例:急支糖浆中麻黄碱的含量测定标准液的配制：精密量取麻黄碱对照液（0.1mg/ml）2.5mL置分液漏斗中，精密加入缓冲液25ml，再精密加入氯仿25mL和溴麝香草酚蓝染料2.5mL，摇匀，分层。取氯仿层，即得。样品液的制备：精密量取急支糖浆2.5mL置分液漏斗中，精密加入缓冲液25ml，再精密加入氯仿25mL和溴麝香草酚蓝染料2.5mL，摇匀，分层。取氯仿层，即得。在410nm处测定六次取平均值，得A样=0.428，A标=0.385，试计算本品中麻黄碱的含量。,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法计算分光光度法双波长分光光度法（等吸收点法、系数倍率发）三波长法导数光谱法 一般应用于供试品溶液中含有2中或2种以上的组分的含量测定。差示光谱法 利用比样品浓度稍低的标准品作为空白,进行测定及计算的方法.,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法计算分光光度法应用实例：银黄口服液由金银花和黄芩的提取物组成，其主要成分绿原酸和黄芩苷在紫外区均有吸收，且吸收峰相互重叠干扰，经测定绿原酸在278nm和322nm处有等吸收点，且黄芩苷在278nm处有最大吸收。现测的某银黄口服液A278nm=0.621，A322nm=0.315，黄芩苷 278nm =631.20， 322nm=368.40。试计算该银黄口服液的黄芩苷的含量。,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法应用实例：差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红素的含量 1.胆红素具有高度共轭体系结构，在波长453nm处为最大吸收，在可见光照射下胆红素易氧化成蓝色产物，在453nm处吸收度显著降低。 2.选用日光下照射30分钟或在红外灯下照射4小时测A值。,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法应用实例：差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红素的含量3.精密称取胆红素2mg于50ml棕色量瓶中，加入适量冷(10以下)的酸性氯仿(150ml氯仿中含0.05ml浓盐酸)，于冰水浴中超声振荡20分钟，稀释至刻度，制成储备液。准确吸取0，4、08、1，2、1.6、2.0ml储备液于10ml量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，测其光照前后在453nm处的吸收度。回归方程为A=0.0804C + 0.00570 (r=0.9995)。 注释：除光照反应外，其余操作均需避光,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法应用实例：差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红素的含量4.分别制得六应丸、六神丸、牛黄消炎丸的空白样品对照液，在453nm处测得各自光照前后的A值，计算A。实验表明三种成药A值为零或几乎为零。说明其他干扰组分在以上光照条件下不干扰胆红素的测定。,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法应用实例：差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红素的含量5. 精密称取六应丸、六神丸各60mg，牛黄消炎丸120mg置10ml带塞的试管中，准确加入冷酸性氯仿10ml，冰水浴中振荡20分钟，过滤，弃去初滤液，测续滤液光照前后的A值，算出A值。由回归方程算得样品的含量。 本法加样回收率：六应丸为98.8，RSD=1.8；六神丸为100.7，RSD=2.2；牛黄消炎丸为93.0，RSD1.1。,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法紫外光谱法中对仪器和试剂的要求（1）仪器的校正和检定：包括波长精度、吸收度 的准确性、 杂散光等。 （2）对溶剂的要求：用1 cm石英池盛装溶剂，以 空气为空白，测定其吸光度，溶剂和吸收池 的吸光度在220nm 240nm范围内不得超过 0.40；在241nm 250nm 范围内不得超过 0.20；在251nm 300nm 的范围内不得超过 0.10；300nm以上不得超过0.05。,3 常用定量分析方法,紫外可见分光光度法紫外分光光度计基本构造,3 常用定量分析方法,薄层扫描法（TLCS）,薄层扫描法是指薄层色谱斑点的色谱扫描，薄层色谱扫描是指固定波长，斑点移动，测定A-l或F-l曲线。根据薄层扫描的测定方式分为薄层吸收扫描法和薄层荧光扫描法二种方法。,3 常用定量分析方法,薄层扫描法（TLCS）薄层吸收扫描法 光源：钨灯和氘灯； 灵敏度：在200-800nm波长范围内选择合适波长进行测定，其灵敏度可达ng级； 适用范围：适用于在可见、紫外区有吸收的物质，及通过色谱前或色谱后衍生成上述化合物的样品组分。,3 常用定量分析方法,薄层扫描法（TLCS） 1. 薄层吸收扫描法 光源：钨灯和氘灯； 灵敏度：在200-800nm波长范围内选择合适波长进行测定，其灵敏度可达ng级； 适用范围：适用于在可见、紫外区有吸收的物质，及通过色谱前或色谱后衍生成上述化合物的样品组分。,3 常用定量分析方法,薄层扫描法（TLCS） 2.薄层荧光扫描法 光源：氙灯或汞灯。 灵敏度：最低可测到10-50pg。适用范围：适合于本身具有荧光或经过适当处理后可产生荧光的物质的测定。,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC） 基本原理 气相色谱法（GC）是将汽化后的试样由载气（流动相）带入色谱柱，根据各组分在流动相和固定相间作用的不同而分离，并随载气依次流出气谱柱，经检测器检测，利用保留值进行定性，色谱峰面积或峰高进行定量的分析方法。,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC） 基本原理,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC） 基本概念 色谱峰：由电信号强度对时间作图所绘制的曲线。（正态分布曲线） 不正常的色谱峰：前延峰、拖尾峰 常用定量参数：峰高、峰面积 常用定性参数：峰位 用于衡量柱效：峰宽,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC） 基本概念 基线：在操作条件下，没有组分流出时的流出曲线。横轴直线。 保留值（保留时间tR和保留体积VR） 保留时间tR 保留体积VR 死时间t0 死体积V0 调整保留时间tR 调整保留体积VR,3 常用定量分析方法,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC） 塔板理论 塔板理论将色谱柱看作一个分馏塔，待分离组分在分馏塔的塔板间移动，在每一个塔板内组分分子在固定相和流动相之间形成平衡，随着流动相的流动，组分分子不断从一个塔板移动到下一个塔板，并不断形成新的平衡。一个色谱柱的塔板数越多，则其分离效果就越好,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC） 柱效指标理论塔板数n及理论塔板高度H 衡量色谱柱分离效果的参数理论塔板数n。105-106 在一定高度内，组分可以在两项中达到分配平衡，次高度为理论塔板高度。,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC） 柱效指标理论塔板数n及理论塔板高度H,实例： 在柱长为2m的5%的阿皮松柱、柱温为1000C，记录纸速度为2.0cm/min的色谱条件下，测定苯的保留时间为1.5min，半峰宽为0.20cm，求理论塔板数和理论塔板高度。,3 常用定量分析方法,解：,3 常用定量分析方法,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC） 柱效指标分离度的计算R=0.8：两峰的分离程度可达89%；R=1.0：分离程度98%；R=1.5：达99.7%（相邻两峰完全分离的标准）,3 常用定量分析方法,例：已知物质A和B在一根30.0cm长的柱上的保留时间分别为16.40和17.63min，不被保留组分通过该柱的时间为1.30min，峰底宽为1.11和1.21min，试计算 （1）柱的分离度（2）柱的平均塔板数（3）塔板高度（4）达1.5分离所需柱长,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）系统适应性试验1.n 不得低于各种品种的最小理论塔板数，柱长，柱填充、载体性能等有影响。2. R R1.5（两峰完全分离）3.重复性 RSD2.0 (n=5)4.拖尾因子 T=W0.05h/2d1 (d1峰极大至峰前沿之间的距离) 1.05T0.95,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择适用于测定 挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等。 中药制剂含水量、含醇量,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择适用范围 挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等。 中药制剂含水量、含醇量,3 常用定量分析方法,色谱柱组成,一、气液分配色谱柱二、气固吸附色谱柱,气相色谱法（GC）实验条件的选择,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择一、固定相的选择气-液分配色谱柱（1）载体的选择比表面积大（多涂渍固定液）无吸附性（不吸附被测组分）化学惰性（不与固定液发生化学反应）热稳定性好 一定的机械强度一般采用具有一定粒度的多孔性固体微粒,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择一、固定相的选择气-液分配色谱柱（2）固定液的选择操作柱温下固定液呈液态（易于形成均匀液膜）操作条件下固定液热稳定性和化学稳定性好固定液的蒸气压要低（柱寿命长，检测本底低）固定液对样品应有较好的溶解度及选择性,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择一、固定相的选择气-液分配色谱柱（3）固定液的分类化学分类法（官能团分类，烃类、硅氧烷类、脂类、醇类、有机皂土、液晶等）极性分类法（极性、非极性）,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择一、固定相的选择气-液分配色谱柱（3）固定液的选择按相似相溶原则选择按组分性质的主要差别选择,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）按相似相溶原则选择 固定液与被测组分极性“相似相溶”，K大，选择性好。 非极性组分选非极性固定液， 按沸点顺序出柱，低沸点的先出柱 中等极性组分选中等极性固定液， 基本按沸点顺序出柱 强极性组分选极性固定液 按极性顺序出柱，极性强的后出柱,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）按组分性质的主要差别选择组分以沸点差别为主 选非极性固定液 按沸点顺序出柱、沸点低的先出柱组分的极性差别为主 选极性固定液 按极性强弱出柱、极性弱的先出柱例：苯（80.10C），环己烷（80.70C）选非极性柱 分不开；选中强极性柱 较好分离，环己烷先出柱,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择一、固定相的选择气-固分配色谱柱（1）固定相的选择吸附剂：活性炭（非极性） 硅胶，AL2O3（极性，吸附力强） 分子筛：吸附+分子筛高分子多孔微球：GDX有机合成高分子聚合物、吸附+分配机制,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择二、柱温的选择根据样品的沸点选择,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择三、载气的选择柱效、柱压、灵敏度 20-80mL/min低流速 氮气*高流速 氢气 氦气热导检测器 氢气 氦气氢焰检测器、电子捕获检测器 氮气,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择四、其他条件气化室（进样口）温度： 不超过沸点50 高于柱温30-50 检测室温度： 高于柱温30左右进样量： 气体0.1-1mL 液体 0.1-1L,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实验条件的选择五、检测器热导检测器（TCD）氢焰离子化检测器（FID）氮磷检测器（NPD）电子捕获检测器（ECD）,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法峰面积的测量正常峰不对称峰自动求和（自动积分仪或色谱工作站）：直接给出A，h，W1/2,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法定量校正因子,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法定量校正因子绝对校正因子,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法定量校正因子相对校正因子,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法归一化法外标法 校正因子内标法 标准溶液加入法,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法归一化法前提：试样中所有组分都产生信号并能检出色谱峰依据：组分含量与峰面积成正比,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法外标法 以待测组分纯品为对照物，与试样中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法a 工作曲线法b 外标一点法c 外标两点法,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法外标法 b 外标一点法 一种浓度对照物对比样品中待测组分含量前提：截距为0，对照品浓度与待测组分浓度接近,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法外标法 c 外标两点法 前提：选 取两点对照品的浓度，需涵盖待测浓度,外标法特点： 1）不需要校正因子，不需要所有组分出峰 2）结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大每次进样量应一致，否则产生误差,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实例麝香祛痛搽剂中樟脑的含量测定 色谱条件与系统适用性试验 以聚乙二醇(PEG200为固定相，涂布浓度为10；柱温为程序升温80160；初温保持4min后，每分钟升高4，终温保持16min。理论塔板数按樟脑峰计算应不低于13 000。,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）1对照品溶液的制备 精密称取樟脑对照品适量，加稀乙醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。2供试品溶液的制备 精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，即得。3测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5l，注入气相色谱仪，测得对照品峰面积为1200，供试品峰面积为1600。试计算本品中樟脑的含量。,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法常用的定量分析方法校正因子内标法 校正因子的计算取内标物和待测组分的对照液进样测定A取含有内标物的供试品溶液进样测定A,3 常用定量分析方法,气相色谱法川贝枇杷糖浆中薄荷脑的含量测定 含量测定 照气相色谱（附录VI E）测定。 色谱条件与系统适用性试验 改良聚乙二醇毛细管柱（柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25um），柱温110；进样口温度为250；检测器温度为250；分流比为25:1。理论板数按萘峰计算应不低于5000。,3 常用定量分析方法,气相色谱法 校正因子测定 精密称取萘适量，加环已烷制成每1ml含15mg的溶液，作为内标溶液。另取薄荷脑对照品75mg，精密称定，置5ml量瓶中，加环已烷稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1ul，注入气相色谱仪，计算校正因子。,3 常用定量分析方法,气相色谱法 测定法 精密量取本品50ml，照挥发油测定法（附录X D）试验，(加环已烷回流提取），合并环已烷液，置20ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1ul，注入气相色谱仪，测定，即得。 本品每1ml含薄荷脑（C10H20O）应不得少于0.20mg。,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实例十滴水软胶囊中樟脑含量的测定1色谱条件与系统适用性试验 以聚乙二醇(PEG)一20M为固定相涂布含量为10，柱温150。理论塔板数按樟脑峰计算应不低于2000樟脑峰与内标物质峰的分离度应大于2。,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实例十滴水软胶囊中樟脑含量的测定2.校正因子测定 精密称取樟脑对照品50mg置10ml量瓶中。精密加入薄荷脑内标物质50mg，加无水乙醇至刻度，摇匀精密量取121注入气相色谱仪，计算校正因子。 测得樟脑的峰面积为1800，薄荷脑峰面积为1500.,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实例 3测定法 取装量差异项下的内容物，混匀，取O.8g，精密称定，置具塞试管中，用无水乙醇提取5次，每次4ml，分取乙醇提取液，合并，转移至25ml量瓶中，精密加入薄荷脑125mg，使溶解，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取121，注入气相色谱仪，测定，得薄荷脑峰面积为2400,樟脑峰面积为1800。试计算本品中樟脑的含量。,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）定量分析方法标准溶液加入法精密称量被测组分的对照品，配置成适当浓度的对照品溶液，取一定量，精密加入到供试品溶液中，依据内标法或外标法测定含量，再扣除加入对照品的含量，即得。,3 常用定量分析方法,气相色谱法（GC）实例十滴水软胶囊中樟脑含量的测定 十滴水软胶囊由樟脑、干姜、大黄、小茴香、肉桂、辣椒、桉油等七味中药制成，樟脑是其主成分之一，能升华，故可采用气相色谱法，以樟脑为对照品，薄荷脑为内标物，用内标校正因子法测定其含量。,3 常用定量分析方法,高效液相色谱法（HPLC） 特点：高柱效、高灵敏度、高选择性、分析速度快及应用范围广 适用于测定 挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物及离子型化合物，如蛋白质、氨基酸、生物碱、甾体、类脂、核酸、维生素及无机盐类。,3 常用定量分析方法,高效液相色谱法（HPLC） 基本原理 以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法。,3 常用定量分析方法,3 常用定量分析方法,3 常用定量分析方法,高效液相色谱法（HPLC） 实验条件