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文档简介

BIOXL 猪口蹄疫亚 O 型一步法荧光 RT-PCR 诊断试剂盒说明书包括48 个扩增反应所需的试剂请在使用前通读操作说明书1. 试剂盒组成 25 管 扩增反应试剂球 (Reagent Sphere; 4oC 保存) 2 x 520 l FMDVA-1 扩增反应试剂球溶液 (Sphere Diluent; -20oC 保存) 2 x 25 l 阳性对照 (Positive control; -20oC 保存) 1 x 10l Taq 酶(Taq Polymerase; -20oC 保存)保存条件试剂球需置干燥剂中保存在4oC，已融解的试剂球则需保存在零下20oC。其他试剂需保存在零下20oC。使用前在冰上溶解各试剂并充分混合，不要旋涡振荡含酶的扩增反应试剂。2. 操作程序扩增反应试剂的准备1. 计算所需的反应数量 (n)2. 需要溶解的试剂球 = 0.5 x n3. 每个试剂球需要 40 l 试剂球溶液及0.4l Taq 酶。4. 在冰上溶解试剂，并轻轻扣击充分混合 (不要旋涡振荡含酶的试剂)反应的准备1. 实验中除从样本中获得的 RNA 模板外，我们还建议设置阳性和阴性（水）对照2. 按照下表准备扩增反应试剂：反应组分 每个反应体积扩增反应试剂 20 l样品 RNA 5 l总体积 25 l注意: 实验时 RNA 应放在冰上 阳性对照建议加5 l 试剂盒提供的阳性对照。 建议 PCR 过程中检测样本设置重复，以便得到可靠的实验结果 为了验证阴性实验结果不是由于样本中存有 PCR 抑制物而导致 PCR 呈阴性反应，我们建议在测试样本中加1 l 的阳性对照作为 spiking 对照 (spiking control)，同时进行PCR 反应。PCR 循环:数据收集位点（FAM 染料）ABI7700 ABI7300 其它仪器1 个循环 42oC 30 分钟 *95oC 10 分钟 *5 个循环 95oC 10 秒 *45oC 30 秒 *72oC 60 秒 *40 个循环 95oC 15 秒 *58oC 60 秒 * * *( * 表示位点收集 FAM 读数)3. 实验数据分析阴性的实验结果有几个可能性：1. 样本中不存在目的片段；2. 样本中目的片段的量低于检测值；3. 样本中存有 PCR 抑制物。试剂盒中设计 spiking 对照 (spiking control) 是为了确定没有发生 PCR 抑制。如果样本中加了阳性对照以后扩增结果的 Ct 值接近 40（或者接近阴性对照的 Ct 值） ，说明样本
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