《临床免疫测定技术》PPT课件.ppt

临床免疫测定技术 各论 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 凝集试验 WidalreactionWeil felixreactionWrighttest 布鲁菌病交叉配血试验 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 相关帮助 需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库 其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司 该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成 以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能 全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备 生物试剂 医疗器械 制药设备 医药原料 体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的 可以访问探生网biomean进行咨询 期待您的加入 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 Widalreaction 试管内凝集反应 取 1 10 待检血清3 0ml生理盐水3 0ml 管 释度1 201 401 801 1601 3201 640 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 待测血清的抗体效价 滴度 即出现 凝集的最终血清稀释度 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 血型鉴定 玻片凝集反应 直接 抗A标准血清 抗B标准血清 待测RBC 待测RBC A型 B型 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 乳胶凝集试验 间接 带现象Zonephenomenon前带prezone后带postzone 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 1 正向间接凝集试验 用抗原致敏载体 检测Ab 2 反向间接凝集试验间接凝集 用抗体致敏载体 检测Ag 3 间接凝集抑制试验4 协同凝集试验 SPA抗体致敏 测抗原 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 反向间接血凝试验 测Ag 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 抗球蛋白抗体试验 commbs 抗RBC不完全抗体 A 间接法 游离 B 直接法 结合 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 Influidphase 絮状沉淀试验 Ag Ab 环状沉淀试验 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 Ingelphase singlegeldiffusiontest 抗原浓度的标准曲线 操作 抗体混于凝胶中抗原加入孔内抗原自由扩散测定沉淀环直径在标准曲线上查找相应抗原浓度 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 影响因素 1 抗原分子量 与扩散速度 沉淀环反相关2 抗体种类 兔抗血清优于马 羊3 抗体稀释度 抗体浓度大沉淀环小4 扩散时间 抗原含量高 扩散时间长5 扩散温度 4 37 内温度与扩散速度正相关6 琼脂板厚度 与沉淀环反相关 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 doublegeldiffusiontest 原理 将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中 两者各自在凝胶中向四周自由扩散 当抗原与抗体相遇 在比例合适时形成沉淀线 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 琼脂双向扩散试验的应用 1 检测未知抗原或抗体2 抗原性质分析3 抗体效价滴定4 抗原或抗体纯度鉴定 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 1 检测未知抗原或抗体 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 A 浓度Ag Ab及扩散率近似 B 浓度Ag Ab近似 扩散率Ag Ab C 浓度Ag Ab近似 扩散率Ag AbD 浓度Ag Ab 扩散率近似 E 浓度Ag Ab 扩散率Ag Ab F 浓度Ag Ab 扩散率Ag Ab 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 2 抗原性质分析 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 3 抗体效价滴定 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 4 抗原或抗体纯度鉴定 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 免疫浊度试验 略 免疫球蛋白的检测 简 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 健康人血清Ig含量 g L 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 免疫固定电泳 测M蛋白 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 CH50 complementhemolysis50 原理 组分和功能完整的补体系统能使抗体致敏的羊红细胞 SRBC 发生溶血反应 在一定范围内 SRBC溶血程度与补体总活性成正相关 以溶血百分率作纵坐标 相应的血清量为横坐标绘图 在一个适当的 稳定的反应体系中 溶血程度与补体剂量依赖呈一个S形曲线 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 Enzymelinkedimmunosorbentassay ELISA 原理 Principle 将抗原或抗体结合到某固相载体表面 保持其免疫活性 测定时 把被测sample和conjugate按不同的步骤与固相载体上的immunosorbent反应 用洗涤的方法使与固相载体上形成的immunocomplex与其他物质分开 再加入酶反应substrate 经酶的催化作用后substrate变为有色产物 产物的量与标本中被检物的量直接相关 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 ELISA操作的基本步骤 标本的收集 运送和保存试剂准备加样温育洗板显色比色结果判断结果报告及解释 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 1 标本的收集 运送和保存 ELISA检测分析用标本 血清 浆 特殊项目用 唾液 脑脊液 尿液 粪便等ELISA检测分析的对象 病原体抗原 抗体Tumormark hormone cytokineetal采集 运送与保存的注意点 采集时间 运送条件 暂存点温度 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 可能影响测定结果的标本因素一 内源性 标本内 类风湿因子 rheumatoidfactor 补体 complement 异嗜性抗体 heterophilicantibody 治疗或诊断用鼠抗体 抗鼠抗体 自身抗体或溶菌酶等二 外源性 操作 溶血 反复冻融细菌污染储存时间过长标本凝固不全 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 对策 1 稀释标本2 改变选用的酶标抗体3 预封闭 变性IgG 4 加入某些还原剂5 血清标本的补体灭活 56 30min 6 选择包被或标记抗体 如F ab 2片段7 用理化方法解离自身抗体8 标本中添加Cu2 离子或卵白蛋白等等 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 2 试剂准备 1 实验开始前 将试剂盒从冰箱取出置室温放置20min以上启用 谓平衡 balance 目的 1 保证反应温度的一致性2 去湿化 保证试剂浓度2 稀释液的质量和特殊试剂配制的要求 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 3 加样 原则 量准操作规范量准 移液枪的状态与正确使用操作规范 正确使用加样器 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 3 加样 操作规范 掌握操作要领吸头与加样器上吸头套密闭吸头进入液体的深度要适宜放送液体注意角度 10 40 位置 下1 3 速度 不宜太快 关注加样器的状态 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 4 温育 incubation 温育是ELISA检测反应中可能影响其检测结果的最为关键的一个因素 液相的待测抗原 抗体与固相的抗体 抗原反应需要一定的温度与时间 以保证结合反应充分 温育所需要的时间与反应温度成反比 温育温度 37 室温 43 和2 8 避免 边缘效应 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 5 洗板 washing 通过洗涤将特异性结合与固相的抗原或抗体与反应温育过程中可能非特异吸附及游离的成分分离 完成固相免疫检测程序保证测定的特异性 洗涤液 0 05 tween phosphate buffersalinepH7 4 吐温 20 山梨醇 20 一种非离子去垢剂含亲水 疏水基团 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 在洗涤中的作用是通过其疏水基团与被动吸附于固相载体上蛋白的疏水键相互作用以削弱之 同时通过其亲水基团结合液相中水分子的作用 促使非特异的蛋白质吸脱 吐温 20的浓度 2 洗涤用量与次数 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 例 选择4条8孔的已包被抗原 HBsAg ELISA板条每2条分别加同一份弱阳性和阴性样本然后按试剂盒的操作说明加conjugate 温育洗涤 1排4孔洗1次4排4孔洗4次2排4孔洗2次 3排4孔洗3次8排4孔洗8次加底物 显色 比色 评判原则 阳性 阴性值保持最大不变的次数 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 6 显色 Colorisappeared 添加酶特异性底物 HRP TMB OPD 保证底物溶液的有效性 无色 避光 显色 反应温度 37 室温 反应时间 25 30min 终止反应 酸溶液 2mol Lsulfateacid 及时比色 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 7 比色 Bytheplatereader 加酸终止显色反应后 比色测定前应振荡混匀测定时 要注意酶标仪的波长是否已调至合适比较好的酶标仪可选择单波长或双波长比色测定所谓双波长比色 即在敏感波长 此时对所显色具最大光吸收 如450nm和非敏感波长 所测得的光吸收为微孔板上的划痕 污迹以及指纹等所致 最后从仪器得到的读数为在敏感波长测得的吸光度与非敏感波长测得的吸光度之差 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 8 结果判断 临床ELISA检测的结果报告形式 定性 阴 阳 定量 量值 ELISA定性测定的 阴性 和 阳性 的判断依据是试剂盒所确定的阳性判断值 cut off ELISA定量测定的 量值 依据是试剂盒中所带标准品同时测定出的剂量反应曲线 标准曲线 cut off的建立 略 S CO 1时判为阳性S N或P N 2 1阳性为 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 灰区 例 HBsAg 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 9 结果报告及解释 结果报告根据测定性质 定性 阴性 阳性定量 具体数值结果解释结合所测项目的相关知识 临床意义 考虑各种可能影响的因素 关注测定操作中的各环节 尤其是加样 温育和洗涤 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 例举 临床可能出现的问题及原因 现象 1 相同的标本两次测定的结果不一致原因 加样 试剂量不准 板孔间有差异加样过快 孔间发生污染加错样本加样 试剂时 落在非包被区不同批号的试剂混用温育 洗涤及反应时间不一致孔内污染杂物酶标仪滤光片不正确血清分离不充分 纤维蛋白原或血细胞入孔 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 现象 2 弱阳性质控样本检测不出原因 温育时间或温度不够 显色反应时间过短 配置缓冲液 洗涤液 的蒸馏水有问题现象 3 阳性对照不显色原因 漏加酶结合物洗涤液配置 含有酶抑制物 NaN3 漏加显色剂 错加 将终止液误为显色液 现象 4 全部孔都有显色原因 洗涤不够显色液变质底物或洗涤液被酶污染 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 临床ELISA测定的常用模式 一 双抗体夹心检测抗原二 竞争法检测抗原三 间接法检测抗体四 竞争法检测抗体五 固相捕获法检测抗体六 双抗原夹心检测抗体七 ABS ELISA及其他 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 一 双抗体夹心检测抗原 例 ELISA双抗体夹心法定性检测乙型肝炎表面抗原原理 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 Ab Ag Ab Ab Ag Ab Ab Ag Ag Ab Ab Ag Ab abcd 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 Ab Ag Ab Ag b复合物 1 Ab Ag Ab Ab Ag Ab a复合物 2 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 HooK S效应 钩状效应 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 评价 被检测的抗原具有两个以上抗原决定族 全抗原 标本中RF会充当抗原分子 干扰 一步法简便 快捷 存潜在缺陷 hook seffect 其他 判断时OD值落在 灰色区 假阴性 hook seffect 变异 假阳性 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 二 竞争法检测抗原 例 T3 T4等激素或地高辛 茶碱等药物浓度检测 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 评价 结合于固相的酶标记抗原量与被测抗原量呈反比检测对象为小分子蛋白 半抗原 检测中需获得酶标记的小分子半抗原 制备难 运用于仪器的自动化检测 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 三 间接法检测抗体 例 ELISA间接法检测各类病原体特异性抗体 IgG 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 评价 通用性大 只要更换固相抗原 同一种酶标记体体 IgG IgA M 可用以各种与抗原相应的抗体检测 标本高浓度时易受非特异IgG的干扰 稀释 易受其他因素的影响 包被抗原的纯度 本文由探生科技技术人员提供 Fantibody全球抗体搜索引擎 您身边的抗体专家 四 竞争法检测抗体 抗体的检测一般不选用竞争法 当已知抗原难以纯化或抗原 抗体的结合特异性不稳定时 实例 ELISA竞争法检测乙型肝炎病毒核心抗体 基因工程表达的HBcAg 固相板 包被HBcAg 待测标本 酶标记抗 HBc 待测标本中抗 HBc 酶标记抗 HBc 竞争 固相板 包被HBcAg 酶标记抗 HBc与固相板 包被HBcA