细胞DNA定量分析技术质量控制

细胞DNA定量分析技术质量控制,张培生,DNA倍体分析从标本取材到报告的发放有很多的步骤！ 只有做好每一个环节才能使最终的结果更加的可靠！,质量控制的环节,一、妇科标本： 1.取材部位 移行区 宫颈癌的高发部位 宫颈上皮和鳞柱交界 育龄期经产妇女 移行带 2.取材时去除明显的粘液同一个方向旋转3-5圈， 取到足够多的细胞！ 3.要避免用力拭擦引起出血 血性标杆并不能提高检出癌症的敏感性，红细胞干扰TBS阅片（不影响DNA倍体分析），血液中1%的白细胞某种程度上干扰DNA报告解读，底层细胞处于细胞周期中，也会干扰DNA报告解读，细胞数目少，影响诊断,标本的取材及保存,4宫颈取材的注意事项1.月经期、妊娠期妇女不宜使用宫颈刷，人流后月经未来潮前不做检查；2. 病人在受检前48小时不得使用避孕剂，不得作阴道冲洗及任何阴道治疗；3取材前阴道、宫颈不得使用任何润滑剂；4急性宫颈炎及各种阴道炎的急性感染期，经治疗后再作宫颈细胞学检查；,标本的取材及保存,二、胸腹水标本：1、取100-250ml胸腔积液腹腔积液收集于加有15ml 109mmol/L枸橼酸钠的标本采集瓶中立即送检！2、收到标本后立即离心 2000转/分钟 离心8分钟，缓缓倒掉上清液后振匀取5到10滴加入固定液中固定保存1小时以上！,标本的取材及保存,标本瓶瓶盖旋紧申请单于标本瓶对应两周内送检冰箱4度冷藏,标本保存,制片： 1.合适的细胞浓度 细胞分布均匀能减少分析仪扫描时候，也有利于细胞的观察。细胞少时制片不要太稀了! 2.离心后的沉渣松散或上粘液较多时 在倒上清液时缓慢，不要把沉渣一起倒掉了！可在加水在粘液较多的标本中混匀后在离心制片！ 3.干透后在染色，否则容易掉片！,制片及染色,染色： 1.所有染液的浓度要按比例配制！BS固定液和4N盐酸要提前配制！可以回收23次！最好不要次数太多！ 2. DNA染液不能重复使用！染液的的搅拌时间温度都有严格的要求！染色过程染色的时间、温度、水温的控制,这些条件都对染色的结果有很大的影响！在染色过程中必须严格按照DNA染色的程序要求来进行操作。 3.贵州冬天天气寒冷！要求所有染液及配制、洗涤用水必须放置到温箱中 温到染色温度！,制片及染色,4.固定 BS固定液中的甲醛会破坏硫堇染色！使染出的颜色偏绿色，产生沉淀，染出的颜色很浅使染色的IOD值偏低 影响报告的发放！因此 不要让Bhm-Sprenger固定液污染硫堇染色溶液 避免将固定液滴入染液中 染色之前把固定液漂洗干净,制片及染色,5.水解 使DNA为Feulgen反应做好准备 对温度的依赖性很大，所以需要控温 水解时间 35度 25分钟! 时间严格要求！,制片及染色,5.染色 染液的过滤在水解结束前510分钟过滤 ！不要超过10分钟！过滤后的染液如不及时染色要盖好盖子，不要过久暴露在空气中！染色时间 35度40分钟 严格要求！,制片及染色,5.漂洗 漂洗目的是去除过量的非特异染色的染料 为什么会有非特异染色的染料？ 硫堇是平面分子且带阳性电荷，可以跟DNA结合。但是这种染色不是永久性的，因此具有很高的可变性,制片及染色,请按标准规范操作批量IOD值低 同批次标本中少量病例IOD值低细胞数少掉片粘液IOD值过高,制片和染色中易发现象,制片染色步骤中的注意事项B.S固定液中甲醛不要污染了DNA染色液洗手液污染各步骤的时间和温度需要适当控制 各种配制用水，洗涤用水及各种试剂要恒温！每次染色放标准片染色过深或过浅影响结果IOD过浅影响机器的识别过深有非特异性染色,制片和染色,细胞DNA图像分析仪光路校准每天校准背景图像保存标准片-CV, 线性化情况，IOD,细胞DNA定量分析系统,细胞筛选：我们知道最后的结果是细胞筛选后的。因此如果细胞筛选出现问题，那么阳性可能非阳性，阴性的可能非阴性，出现假阳性或假阴性，后面的都变得没有意义。细胞筛选是需要经验判断的，因此遇到不好判断的情况可先显微镜下观察！如还不能确定可联系质控部。,细胞筛选注意事项,质控过程中发现过删的现象比较多，细胞核上面有点点不像就把它去掉或只留细胞看上去染色质均匀的细胞，这些做法是危险的，可能会漏检掉很多病例甚至漏检宫颈癌而引起医疗事故。不发不合要求的报告是对病人的负责也是对自己的保护。特殊情况可咨询质控部。,细胞筛选注意事项,满足以下条件的标本为满意的标本：1.标本片的IOD值在100140之间，且扫描达到细胞数目应不少于8000；2.标本片的IOD值在100140之间，细胞数目不足8000，但被判定为阳性的标本；3.标本片的IOD值在100140之间，且细胞数目为10008000，但扫描时间达到设定的上限60分钟；4.标本片的IOD值在100140之间，且细胞数目为10008000，但标本片完成全片扫描。满足上述标本满意条件之一，即可出具DNA倍体定量检测报告。,诊断质控指标,出现以下情况的标本为不满意标本：1.标本片的IOD值低于90（包括90）或高于140；2.标本片的细胞数目少于1000的阴