TBSPOT

T-SPOT.TB T-SPOT.TB是以 特异性抗原 为刺激源，应用酶联免疫斑点技术 (enzyme-linked immunospot assay， ELISPOT)诊断结核感染的新方法。结核感染后机体的免疫应答 结核杆菌 巨噬细胞吞噬 -巨噬细胞凋亡 -释放特异性抗原- cD4- r干扰素 -激活巨噬细胞-CD8-r干扰素、 TNF等，释放颗粒酶和穿孔素溶解感染细胞，同时启动 Fas途径发挥其溶细胞作用 Behr等应用基因芯片技术将结核分枝杆菌标准株 H37Rv和 BCG的全基因组进行比较 129个只存在于结核分枝杆菌而在 BCG中缺失的开放读码框 这些在 BCG中缺失的部分被划分为 16个区域（ RDl一 RDl6） RDl包含 9个开放读码框，被证实在所有的卡介苗菌株中均不存在，因此最具有编码特异性抗原的潜质 Lalvani建立了以 RDl编码的结核特异性抗原6 kD早期分泌靶向抗原 (earlysecreting antigen target6， ESAT-6)和 10 kD培养滤过蛋白 (culture filtrate protein-10， CFP-10)肽段库为刺激原，检测外周血中结核特异性释放 Y干扰素的 T淋巴细胞 。 敏感性与特异性评价 活动性结核与潜伏性的鉴别 结核发病风险的预测敏感性 Pai等对近 3年的 13项研究进行 Meta分析，共纳入 726例受试者，大多为结核培养阳性、 HIV阴性的成年人，分析表明 T.SPOT.BT的综合敏感性为 90。 Chapman等研究显示 39例 HIV阳性的结核患者中 T.SPOT.TB的敏感性为 90，而PPD皮试的阳性率仅为 72。-细胞免疫低下不影响其敏感性敏感性Liebeschuetz等报道了对 293例怀疑结核的非洲儿童的随访结果，这些儿童的平均年龄为 3岁，约 46 HIV阳性，多数合并营养不良，对于确诊结核或高度怀疑结核的病例， T-SPOTTB的阳性率为 83， PPD皮试的阳性率为 63 .-年龄、 HIV感染状态和营养不良的严重程度对 T.SPOT-TB结果无影响，但均能导致PPD皮试结果的显著差异敏感性 Nieol等对 243例可疑结核的婴幼儿的研究，这些婴幼儿平均年龄为 18个月。在经痰或胃灌洗液结核菌培养阳性确诊的病例中，T.SPOT-TB的阳性率仅为 50，而年龄大于 12个月的幼儿与 12个月之内的婴儿相比，前者阳性率明显增高 .-婴儿中诊断结核感染会降低 T SPOTTB的敏感性。敏感性 Kim等随诊 72例怀疑肺外结核患者的前赡性研究显示，对于活动性肺外结核， T.SPOT-BT和 PPD的敏感性分别为 94和 47，二者比较差异具有显著性 (P0 001)。 47的随诊对象合并有导致免疫低下的情况 ,包括 HIV感染、肿瘤、移植、糖尿病以及自身免疫病等，可能是导致 PPD皮试的阳性率显著降低的原因。-肺外结核诊断的敏感性高特异性Pai等的 Meta分析中纳人了 6项研究 290名受试者，其中 5项中的受试者都常规地接受BCG免疫。 93为无结核接触史的健康成年人，其综合特异性为 93。活动性与潜伏性 每一个斑点代表一个与相应抗原反应的单个细胞活动性与潜伏性 hee等对 230例培养阳性活动性结核患者和183例结核接触者进行了 T.SPOT.TB检测 在 ESAT一 6肽段库中，活动性结核患者与结核接触者的 SFCs数分别为 108vs40 SFCs 106PBMCs(P0 001) 在 CFP.10肽段库中，分别为 148vs52 SFCs 106PBMCs(P0 001) 两者重叠区域较大。 T.SPOT.TB难以区分活动性结核和潜伏性结核感染。(1)潜伏性结核感染者的免疫功能良好，少量的抗原刺激就激发出活跃的保护性免疫；(2)活动性结核患者免疫功能低下，大量的抗原刺激也不足以激起有效的细胞免疫。结核发病风险的预测 Bakir等对 908名与涂阳肺结核患者接触过的儿童进行了为期 3年的前瞻性研究，在 381名 T.SPOT.TB结果为阳性的接触者中，最终 11名发展成为活动性结核，其发生风险是 T SPOT TB阴性接触者的 3 86倍(P=0 024)。