《大肠杆菌》PPT课件.ppt

大肠菌群类检测方法介绍 大肠菌群 Coliform 粪大肠菌群 FecalColiform 大肠杆菌 E coli 肠杆菌科 Enterobactericeae 肠杆菌科四种指标菌的范围 隶属关系 食品中大肠菌群类及其检验 大肠菌群 coliforms 指一群在36 条件下培养48h能发酵乳糖 产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌 该菌群主要来源于人畜粪便 故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量 推断食品中有否污染肠道致病菌的可能 粪大肠菌群 Faecalcoliform 系指一群在44 5 培养24h 48h能发酵乳糖 产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌 大肠杆菌 Escherichiacoli 大肠杆菌广泛存在于是人和温血动物的肠道中 能够在44 5 发酵乳糖产酸产气 IMViC生化试验为 或 包括 产肠毒素 ETEC 肠致病性 EPEC 肠侵袭性 EIEC 肠出血性 EHEC 主要菌型 O157 H7 大肠菌群类检测方法 GB SN 日本方法 VRB固体平板法 Deso固体平板法 显色培养基法 3MPetrifilm测试片法 MPNTable 革兰氏染色 24 2h 44 5 0 5 粪大肠菌群检测的GB法 乳糖胆盐发酵管产气的培养物 EC肉汤 不产气 粪大肠菌群阴性 产气 EMB平板 18 24h 有典型菌落报告为阳性 36 1 back 44 5 0 5 IMVIC back 营养琼脂斜面18 24h back back back back 法国标准化协会 AFNOR 认证美国农业部 USDA 认证美国食品和药品管理局 USFDA 认证美国食品安全与检测机构 USDAFSIS 认证日本食品安全法规标准分析方法北美国家认证加拿大健康保护协会认证澳大利亚和新西兰食品安全认可方法波兰标准化委员会 PKN 认证智利农业部 SAG 认证中国的GB和SN即将发布实施 国际官方方法 3M测试片法检测食品中大肠菌群和大肠杆菌 3MPetrifilmTM大肠杆菌 大肠菌群测试片的检测原理 四唑翁指示剂 tetrazolium 半乳糖苷酶 大肠菌群及大肠杆菌3MPetrifilm检测法 接种1ml样品匀液到每张PetrifilmTM大肠菌群测试片 计数红色带气泡的菌落 报告大肠菌群数 36 C 1 C 检样25g mL 样品 225mL稀释液 只检测大肠菌群 大肠杆菌和大肠菌群同时检测 24h 2h 10倍系列稀释 接种1ml样品匀液到每张PetrifilmTM大肠杆菌 大肠菌群测试片 计数蓝色带气泡的菌落 报告大肠杆菌数 36 C 1 C 24h 2h或48h 2h 计数蓝色带气泡和红色带气泡的菌落 报告大肠菌群数 含有改良的VRB培养基目标菌落为红点带气泡36 1 C 24 2h培养时叠放片数小于20计数范围15 150AOAC官方方法 3MPetrifilmTM大肠菌群测试片 24h得出大肠菌群数肉 家禽和海鲜 24h得出大肠杆菌数其它食品 48h得出大肠杆菌数E coliO157表现为大肠菌群 3MTMPetrifilmTM大肠杆菌 大肠菌群测试片 谢谢大家 将涂片在火焰上固定 滴加结晶紫染液 染1min 水洗 滴加革兰氏碘液 作用1min 水洗 滴加95 乙醇脱色约15 30s 直至颜色液被洗掉 不要过分脱色 水洗 滴加复染液 复染1min 水洗 待干 镜检 结果 革兰氏阳性菌呈紫色革兰氏阴性菌呈红色 革兰氏染色法 back IMVIC 色氨酸肉汤 在36 1 培养24 2h后 加Kovacs氏试剂0 2 0 3ml 上层出现红色为靛基质阳性反应 MR VP培养基 在36 1 培养48 2h 以无菌操作移取1ml至13 100mm试管中 加5 萘酚乙醇溶液0 6ml 40 氢氧化钾溶液0 2ml 和少许肌酸结晶 振摇试管后静置2h 出现伊红色为VP试验阳性 将MR VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5滴甲基红溶液 培养物变红则为甲基红试验阳性 变黄为阴性 Kovacs氏枸橼酸盐肉汤 36 1 培养96h后记录有无生长 LST肉汤 于36 1 培养48 2h 观察试管是否产气 back 生