造血检验的基本方法

造血检验的基本方法,南昌大学医学院第一附属医院检验科 闻芳,造血检验的基本方法,1.正常血细胞的形态2.外周血细胞的形态检验3.骨髓细胞形态检验,血细胞发育成熟的一般规律 原始幼稚成熟,细胞体积： 由大小 但早幼粒原粒 巨核细胞由小大核大小 由大小核形态 圆凹陷 分叶 有的不分叶核染色质 细致粗糙 疏松致密核染色 浅紫色深紫色核膜 不明显明显核仁 有无胞质量 少多 （小淋巴细胞较少）胞质颜色 蓝（嗜碱） 红（嗜酸） 或天蓝浅蓝胞质颗粒 无少多（淋巴细胞无颗粒）核质比例 由大小,（一）粒细胞系统 Neutrophils system共分六个阶段:原始粒早幼粒中幼粒晚幼粒杆状核分叶核四种颗粒：1. 非特异性颗粒（又称A颗粒、嗜天青颗粒、 嗜苯胺蓝颗粒）2.特异性颗粒（又称S颗粒）：中性颗粒、 嗜酸性颗粒 、 嗜碱性颗粒。,形态变化规律：1.胞体： 圆或类圆。2.胞质颗粒： 无颗粒出现非特异性颗粒出现非特异性颗粒非特异性颗粒，特异性颗粒 仅有特异性颗粒。3.胞核： 圆形或椭圆形 一边扁平肾形 杆状分叶。,各阶段粒细胞,原粒型,原粒型,早幼粒,早幼粒,小体,小体,小体,中幼粒,中幼粒,非特异性颗粒,晚幼粒,杆状粒,杆状,中幼粒,退化的分叶,嗜酸分叶,嗜算中幼,分叶,嗜酸晚,晚幼粒,杆状,中幼,退化,嗜酸晚,嗜酸分叶,嗜碱,嗜碱,嗜酸,嗜碱颗粒,退化的嗜碱,（二）红细胞系统 RBC system 分五个阶段：原始红早幼红中幼红晚幼红 成熟红。,形态变化规律：,1.胞体：圆或类圆。2.胞核：圆形居中 。3.胞质颜色：深蓝色蓝灰色灰红色淡红色。4.胞质颗粒：无。,原红,早红,中红,成熟红细胞,三.淋巴细胞系统 Lymphocytesystem 共分三个阶段：原始淋巴幼稚淋巴成熟淋巴,形态变化规律：1.胞体：圆或类圆。2.胞质：少，呈蓝色或淡蓝色， 大淋巴细胞有少许颗粒。,空泡变性,大淋巴,（四）单核细胞系统Mononuclear cells system 共分三个阶段：原始单核 幼稚单核成熟单核,形态变化规律：1.胞体：大，有尾足。2.胞核：较大，不规则，常扭曲、折叠， 核染色质疏松。3.胞质：较多，呈灰蓝色，常有空泡，颗 粒细小呈粉尘样。,（五）巨核细胞系Megakaryocytes system 共分六个阶段：原始巨核幼稚巨核颗粒巨核产板巨核裸核巨核血小板,形态变化规律：1.胞体：巨大，不规则。2.胞核：巨大，不规则，3.胞质（成熟巨）：丰富，有大量细小呈淡紫红色颗粒。,原巨,双核原巨,幼巨,幼巨,（六）浆细胞系统 Plasma cell system,共分三个阶段：原始浆幼稚浆成熟浆,形态变化规律：1.胞核:圆，偏位。2. 胞质：丰富，呈深蓝色，常有核旁淡染区和空泡。,原浆,原浆,幼浆,七. 其它细胞,破骨细胞,破骨细胞,成骨细胞,成骨细胞,成骨细胞,成骨细胞,吞噬细胞,吞噬细胞,吞噬细胞,吞噬细胞,组织细胞,组织细胞,组织嗜碱细胞,组织嗜碱细胞,纤维细胞,纤维细胞,脂肪细胞,脂肪细胞,内皮细胞,外周血细胞形态检验,造血系统的疾病会导致外周血中细胞形态，数量，功能等都会发生变化，因此外周血细胞形态的检验对疾病的诊断有很大帮助外周血涂片检查更为简单方便，对一些慢粒，传单，溶贫的患者诊断提供重要依据,血涂片检查的一般步骤,1.染色:瑞氏染色2.计数与分类:一般计数至少100个有核细胞,以及各种细胞的形态,包括红系和血小板,应注意血片的边缘部3.计算结果:计算各阶段细胞的百分比4.血涂片特征描述:一般有核细胞数量,以何种为主,形态如何,血小板的数量及形态,有无寄生虫及其他异常细胞,血涂片观察的内容,粒系：成熟阶段的数量形态,有无幼稚细胞,以及一些形态的改变红系：红细胞的大小,形态,内含物,注意有无有核红,以及各种红细胞(嗜多色,豪焦小体)等淋系：数量及形态，有无原始及幼稚，异性淋巴浆系,单核,巨核(观察血小板数量，大小，形态有无聚集）其他：有无寄生虫，异常细胞（疟原虫，恶组细胞）,小细胞低色素,嗜碱性点彩,H-J小体,卡波环,双核晚,小体,半岛,靶型,球型,球型,椭圆型,棘型,口型,镰型,泪滴,红细胞碎片,盔型,型泡沫型,幼稚,不规则,血涂片检查的重要性,1.骨髓象相似血象有区别2.骨髓象有区别血象相似3.骨髓象变化不显著血象变化显著异常4.骨髓象有显著变化血象变化不显著5.血象中细胞较骨髓中的成熟,较易辨认,结合骨髓象可辅助白血病细胞类型的判断,骨髓细胞形态检验,通过骨髓细胞学检查可以了解骨髓中各种细胞数量，细胞形态，有无异常细胞等，从而协助诊断疾病，观察疗效及判断预后，骨髓细胞形态学检验包括常规检查和骨髓特殊检查（细胞化学检查）临床应用主要包括两个方面：1,诊断疾病，对血液系统疾病的诊断。2，观察疗效及定期复查,骨髓常规细胞学检查的临床应用 适应症,（ 1）出现不明原因的外周血细胞数量及成分的异常：一系，二系，三系减少，出现幼稚细胞等（2）出现不明原因的发热，肝脾肿大，淋巴结肿大等（3）出现不明原因的骨痛骨质破坏，肾功能异常，黄疸，紫癜，血沉明显增加等（4）血液系统疾病的定期复查，化疗后的疗效观察（5）其他，骨髓活检（AA，骨髓纤维化等）骨髓移植，残留病灶的测定，微生物培养及寄生虫的检查等,骨髓常规细胞学检查的临床应用 禁忌症,骨穿的禁忌症极少，遇到下列几种情况要注意(1)有出血倾向或凝血时间明显延长者不宜做，但是为了明确诊断也可做，但是骨穿后必须局部压迫5-10分钟，严重血友病者禁忌（2）晚期妊娠的妇女做骨穿应慎重,骨髓穿刺,骨髓穿刺部位的选择一般应从以下几个方面考虑:1.骨髓腔中红髓应该丰富2.穿刺部位应浅表，易定位 3.应避开重要脏器(理想部位髂骨上棘)其他如胸骨(如AA)和胫骨,骨髓取材情况的判断,取材满意:1.抽吸骨髓时,病人有瞬间的酸痛感 2.抽出的骨髓中有较多的黄色小粒,多为骨髓小粒,有的为脂肪 3.显微镜观察涂片中有较多骨髓特有细胞:幼稚细胞,有核红,巨核,成骨,破骨等 4.中性杆状/分叶的比值大于外周血中的比值，有核细胞数大于外周血中有核细胞数,取材失败:部分稀释：抽取骨髓时混进血液，称为部分稀释，特征是，骨髓小粒，油滴少或不见，骨髓特有细胞少，有核细胞少，成熟幼稚细胞35完全稀释：抽出的骨髓液实际上就是血液，特征是与血涂片的成分完全一样,骨髓细胞学检查,选择骨髓小粒多，涂片制备良好的骨髓涂片进行瑞氏染色，然后选择染色好的涂片在显微镜下进行观察1.低倍镜下观察:(1)判断骨髓涂片质量，观察涂片的厚薄，骨髓小粒的多少，油滴，染色等，并选择满意的区域进行有核细胞分类，计数（2）判断骨髓增生程度，骨髓有核细胞的多少能反映出骨髓增生程度，分级没有统一的标准，有三级，五级，七级，八级等分类方法，但是一般采用五级分类方法,骨髓增生程度分级及标准,(3).巨核细胞计数并分类，低倍镜下计数，高倍镜下分类，一般在边缘部分，正常骨髓片中计数1.53的血膜上一般7-35个巨核（4）.全片观察有无体积较大的细胞或成堆分布的异常细胞，尤其血膜边缘，如骨髓转移癌细胞，恶组细胞，尼曼-皮克细胞等,2.油镜观察 在有核细胞计数分类前，应先观察各系增生程度，形态，大致比例等情况，得出初步的诊断意见，然后进行计数分类及形态观察，计数部位，顺序，计数的细胞，数目等的选择，观察的内容,3.结果的计算，计算各系统细胞百分比及格阶段细胞百分比，一般情况下的百分比是指有核细胞的百分比（ANC），在某些白血病中还要计算出非红系细胞百分比（NEC)是指除去有核红，淋巴细胞，浆细胞，肥大细胞，巨噬细胞外的有核细胞百分比(如一些急性髓系白血病)。计算粒红比（G/E），计算巨核细胞,4.填写骨髓细胞学检查报告单5.标本登记及保存6.骨髓象检查的注意事项,正常人骨髓象特点,骨髓象分析,1.骨髓有核细胞增生程度（1).增生极度活跃:反映骨髓造血功能亢进，常见于各种白血病，CML，淋巴瘤白血病（2）.增生明显活跃:反映骨髓造血功能旺盛,常见于各种贫血,ITP,MDS,CLL,类白血病,化疗后恢复期等（3）.增生活跃:反映骨髓造血功能基本正常,常见于正常骨髓象,不典型的AA,MM,骨髓造血功能较差的贫血,部分稀释骨髓象等（4）.增生减低:反映骨髓造血功能降低，常见于AA，PNH,低增生性白血病，骨髓部分稀释，化疗后骨髓象（5）.增生极度减低：反映造血功能衰竭，常见于AA，骨髓稀释，化疗后等,2.粒红比的改变（1）粒红比增加,粒细