细菌感染的诊断和治疗

细菌感染的诊断和治疗,第一节 细菌感染的诊断,标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。根据不同疾病以及同一疾病不同时期采取不同标本。应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入药物拮抗剂。采集局部不得使用消毒剂。标本必须新鲜，采集后尽快送检。尽可能采集病变明显部位的材料。送检过程中要采取适当的保存方式。（冷藏、保温、保湿、甘油缓冲液等）标本做好标记，写明检验目的、标本种类等。,一 标本的采集和送检原则,二 病原菌的检验程序,（一）病原学诊断（二）病原菌成分检测（三）血清学诊断,1.细菌的形态结构观察2.分离培养3.生化试验4.血清学试验5.动物试验6.药物敏感试验,（一）病原学诊断,大小、形态、排列、染色、及其有无特殊结构程序：涂片 染色 镜检 (1)不染色标本的检查 (2)染色标本的检查,1.细菌的形态结构观察,(1)不染色标本的检查,不染色标本一般用于观察细菌动力及运动情况(因为不染色标本直接在普通光学显微镜下，无色透明,不能清楚看到细菌的形态与结构特征,主要靠细菌的折射率与周围环境不同进行观察)。有鞭毛的细菌在镜下呈活泼有方向的运动，无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。 (不停地做无规则运动的现象),(2)染色标本的检查,无色透明,直接不易观察其形态结构;染料带电荷;细菌的等电点在pH2-5之间,通常带负电;常用的染色,单染法,复染法,特殊染色法,a.单染法,简单染色通常只用一种染色剂，使细菌整个细胞染上颜色。常用染料:美蓝、结晶紫或石碳酸复红等碱性染料 因为看不清结构。所以只便于检查细菌的形态、大小和排列方式等。不能观察其特殊构造和属性鉴定.,b.复染色法,用两种或两种以上的染料染色的方法，称为复染色法或鉴别染色法 革兰氏染色法:最经典的方法抗酸染色：是检查结核分枝杆菌和麻风杆菌的重要方法。,细菌的革兰氏染色法,革兰氏染色是细菌鉴定上一个最重要和广泛应用的方法。染色步骤: 初染-媒染-脱色-复染理论和实际意义 分为G+和G-细菌 了解细菌的致病性 指导临床用药,抗酸染色,抗酸染色原理:分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。步骤:苯酚复红染色,加温促使菌体着色;3%盐酸乙醇脱色;吕氏美蓝复染,未脱色细菌呈红色为抗酸性细菌,脱色经复染呈蓝色的细菌为非抗酸性细菌。 只要用于结核杆菌和麻风杆菌,c.特殊染色,芽孢鞭毛荚膜等特殊结构的观察大多需特殊染色荧光染色法,2.分离培养,分离培养：所有标本均应作分离培养获得纯培养后进一步鉴定. 培养后根据菌落的大小、形态、颜色、表面性状、透明度和溶血性做出初步判断。,3.生化试验：各种细菌所具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力亦不一致，因而其代谢产物有别，藉此可对不同致病菌进行鉴别（如肠道杆菌） 4.血清学试验：含特异抗体的免疫血清未知纯种细菌进行血清学实验，可确定致病菌的种和型。常见有凝集试验、沉淀反应等。5.动物试验：主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等。 常用动物：小鼠、豚鼠、家兔 接种途径：皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉等6.药物敏感试验：测定标本中致病菌对药物的敏感程度。对指导临床用药及控制感染有重要意义。常用纸碟法和试管稀释法。,1.抗原检测：免疫学技术2.核酸检测 (1)核酸杂交技术： 分为固相和液相。有原位杂交、检测DNA的Southern印迹，检测RNA的 Northern印迹 (2)PCR技术：快速、灵敏、特异性强。 (3)DNA指纹：染色体和质粒指纹或图谱分析 (4)其它成分的检测：利用气液相色谱法检测细菌的代谢产物等。,（二）病原菌成分检测,（三)血清学诊断,用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。主要适用于抗原性较强的致病菌和病程较长的感染性疾病。常用有：直接凝集实验、沉淀实验、补体结合实验、中和试验、ELISA等。,第三节 细菌感染的特异性防治,获得性免疫的产生方式,一、人工主动免疫 概念：人工主动免疫是人为地将疫苗或类毒素接种于人体，使机体主动产生特异性免疫力的过程。是一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。常用的人工自动免疫制剂有以下2种： (一) 疫苗 (二)类毒素,（一）疫苗 1 死疫苗： 用理化方法将免疫原性强的细菌杀死制成的。如百日咳、伤寒、霍乱、斑疹伤寒、流行性脑膜炎、钩端螺旋体病等 2 活疫苗： 用减度或无毒的病原体制成,如BCG、鼠疫和炭疽等的疫苗,活疫苗与死疫苗的比较 活疫苗 灭活疫苗 接种次数 1次 2-3次 接种量 小 较大 接种反应 轻 重 免疫效果 较好,维持1-5年 差,维持0.5-1年 毒力回升 有可能 不可能 安全性 有潜在危险性 安全性好 疫苗稳定性 相对不稳定 相对稳定 保存 不易保存 易保存,3 基因工程疫苗 将编码有效抗原组分的目的基因插入适当载体,形成重组DNA, 再导入宿主细胞, 目的基因随重组DNA复制而复制, 随宿主细胞分裂而扩增, 使目的基因表达大量有效抗原成分, 由此制备的疫苗称为基因工程疫苗 如把HBsAg基因插入酵母细胞中，成功表达并制备HBsAg疫苗,4 亚单位疫苗 利用带有细菌保护性免疫原的组分制成的疫苗。如肺炎链球菌荚膜多糖疫苗、钩端螺旋体外膜蛋白疫苗等。 5 核酸疫苗或称DNA疫苗、基因疫苗 是将能编码引起保护性免疫应答的病原体免疫原基因片段和质粒载体直接注射入宿主体以表达目的免疫原，进而产生特异性体液免疫和细胞免疫的新型疫苗,6 治疗疫苗 慢性复发性感染患者可注射病原体疫苗以增强其免疫应答，显示不同程度的疗效。疫苗与药物起协同作用，促进康复，目前这一新领域正处于研究中。,（二）类毒素（toxoid）,类毒素是外毒素经0.3-0.4%甲醛处理后，失去毒性仍保持抗原性的生物制品加入适量的磷酸铝或氢氧化铝等制成精制的类毒素在体内吸收缓慢免疫效果较好。如白喉类毒素、破伤风类毒素等,二、人工被动免疫 人工被动免疫：输入含有特异性抗体免疫血清或制备好的免疫细胞，使机体立即获得免疫力的过程，称人工被动免疫 可用于某些急性传染病的应急预防和治疗，但维持时间短。常用的人工被动免疫制剂有： （一） 抗毒素 （二）抗菌血清 （三）胎盘丙种球蛋白和血清丙种球蛋白,三 其他免疫制剂 目前临床常用的有以下几种： 干扰素 主要为INF-通过产生炎症反应和活化M增强机体对胞内寄生抗染的能力 IL-2 能刺激T细胞增殖 增强细胞免疫功能 集落刺激因子LAK细胞等 这些细胞免疫制剂在抗菌免疫中应用不多。主要试用于一些病毒性疾病和肿瘤,人工自动免疫和人工被动免疫的比较 区别要点 人工主动免疫 人工被动免疫 免疫物质 抗原 抗体或细胞因子 接种次数 1-3次 1次 免疫出现时间 慢 2-4周 快 立即 免疫持续时间 长 数月-数年 短 2-3周 主要用途 预防 治疗或紧急预防,四 生物制剂的使用及注意事项 （一）接种对象： 根据发病的年龄、职业、流行地区确立接种对象 （二）接种途径： 死疫苗、类毒素接种量大，常用皮下注射； 活疫苗接种量小，常用皮肤划痕、皮内注射、 口服及喷雾等； 丙种球蛋白、动物血清和抗毒素采用肌肉注射,（三）接种剂量、次数及间隔时间 死疫苗接种剂量大，常分2-3次注射，间隔时间随免疫力建立情况而定，伤寒疫苗产生免疫力快，间隔7-10天，类毒素吸收较慢，间隔