《抗血清的制备实验》PPT课件.ppt

免疫血清的制备 原理 抗原抗体 刺激机体 综合性实验 刺激机体 产生 选择合适的抗原 分离纯化抗原 选择免疫动物 确定免疫方案和程序 免疫动物 采血分离血清 抗血清的纯化与鉴定 抗血清制备的基本流程 设计实验方案的设计 1 设计本实验的理由 实验目的 2 实验方案设计 3 可行性 理论 人员 实验条件等 4 创新性 5 本实验要解决的主要问题 6 预期目标 每个组交一份实验方案 3 4个同学一组 论文式实验报告 一 题目的选择1 准确 具体 简洁 醒目 使人一目了然 引起重视2 作者与单位 班级 并注明所在班级和指导教师姓名 3 摘要和关键词摘要是对论文主要内容和观点的概括 论文式实验报告 二 关键词又称主题词或索引词 一篇论著 论文 一般选用2 5个关键词 论文式实验报告 三 引言 前言 引言是论文正文的开场白1 引起读者对本论文的兴趣 2 为读者提供理解本论文所需的背景资料 论文式实验报告 四 材料与方法材料1 实验对象2 实验材料3 实验分组4 实验过程和方法6 数据处理等内容 论文式实验报告 五 结果 结果是实验研究成果的结晶 论文式实验报告 六 讨论1 11 21 3 对实验结果解释和评价 论文式实验报告 七 参考文献 期刊 著者 文章名 刊物名称 卷或年 期 文章的起讫页码书籍 编著者 书名 版本 出版地 出版者 年份 一 颗粒性抗原的制备 2 5 RBC的制备 1 静脉采血2 3ml 注入抗凝管中 轻轻混匀 2 洗涤RBC将上述抗凝血移至10ml试管中 加入NS6 7ml 混匀 2500r min离心5min 去上清 重复上述操作三次 最后一次去上清后 将红细胞配制成2 5 的RBC悬液 2 取上述RBC悬液1ml免疫家兔 免疫部位 静脉 皮内 皮下等 每只兔子免疫8 10点 每点0 1ml左右 每隔2 4天免疫一次 1班免疫时间表 每隔2天免疫一次 2班免疫时间表 每隔3天免疫一次 3班免疫时间表 每隔4天免疫一次 3 心脏采血10ml 凝固后 分离血清 2000转 min 5分钟 4 取两支小试管并以A B标记之 将上述血清一半加入A管 另一半加入B管 将A管置于56 水浴箱30分钟 灭活补体 5 抗血清效价的鉴定 凝集试验和溶血反应 凝集反应 实验原理 指颗粒性抗原 RBC 与相应抗体特异结合 在适当电解质存在下 形成肉眼可见的凝集现象 试管凝集试验过程 1 取洁净小试管8支 排列于试管架上 依次编号 2 向各管中加入生理盐水200ul 3 向第一支试管中加入A管血清200ul 充分混匀 吸出200ul放入第二管 混匀后取出200ul加入第三管中 如此类推直至第七管 混匀后取出200ul弃去 第八管不加血清 为生理盐水对照管 至此 第1 7管的血清稀释度分别为 1 2 1 4 1 8 1 128 这种稀释方法称为连续倍比稀释法 为免疫试验中常用的稀释方法 4 向每管加入200ul2 RBC悬液 此时每管的液体总量为400ul 血清稀释度又增加1倍 5 摇匀 置37 30min 取出试管1500r s30秒 观察结果 试管凝集操作程序 倍比稀释法 弃去 单位 uL 结果判断 选择适当的光暗对比背景 先不要振摇 观察管底凝集物的范围和上清液的浊度 然后轻轻摇动试管 注意观察凝集颗粒的大小 均匀度等 每一试管的观察 都应与对照管进行比较 盐水对照管诮无凝集现象 轻轻摇动试管则RBC分散成均匀混浊 而凝集块则沉于管底 轻摇时不易散开 凝集程度通常以 表示 4 很强 全部RBC凝集 凝集块全部沉于管底 液体澄清 3 强 RBC大部分凝集并沉于管底 液体稍混浊 2 中等强度 RBC大约一半凝集 液体较混浊 弱 仅少量RBC凝集 液体明显混浊 不凝集 液体混浊与对照管相同 只要待测血清管出现 2 以上的凝集现象 即可判断为反应阳性 以出现 2 凝集的最大稀释度为待测血清的抗体效价 溶血试验 实验原理 溶血反应是指补体参与的抗体致红细胞的溶解反应 参与反应的成分有红细胞 抗红细胞抗体 也称溶血素 补体 溶血反应实验过程 1 取洁净小试管8支 排列于试管架上 依次编号 2 向各管中加入生理盐水200ul 3 向第一支试管中加入血清200ul 充分混匀 吸出200ul放入第二管 混匀后取出200ul加入第三管中 如此类推直至第七管 混匀后取出200ul弃去 第八管不加血清 为生理盐水对照管 至此 第1 7管的血清稀释度分别为 1 2 1 4 1 8 1 128 这种稀释方法称为连续倍比稀释法 为免疫试验中常用的稀释方法 4 向每管加入200ul2 RBC悬液 此时每管的液体总量为400ul 血清稀释度又增加1倍 5 摇匀 置37 30min 观察结果 溶血反应操作程