医院感染微生物学

医院感染微生物学监测,泾源县人民医检验科段小娟,医院感染监测的定义,医院感染监测是指长期地、系统地、有计划地、主动地观察一定人群中医院感染发生和分布以及影响医院感染的各种因素，对监测资料进行定期的整理分析，确定其分布动态和变化趋势，向有关人员和单位发送、反馈，并及时采取防治对策和措施，同时对其防治效果和经济效益作出评价，不断改进，以期达到控制和降低医院感染的目的。,医院感染监测的内涵,要有一个长期的监测计划，连续系统地收集资料定期汇总并经分析和解释所收集的资料，使之成为有意义的材料，向有关人员或单位反馈或报送准确地确定医院感染的各种问题，以便有针对性地采取控制措施对各种监测方法和手段要进行评价要确定诊断标准,医院感染监测的目的,医院感染监测是医院感染控制的先行，医院感染控制水平是反映医疗技术水平的重要评价指标之一。目的是为了控制医院感染的各种危险因素，降低医院感染的各种危险因素、降低医院感染的发生率，保证和提高医疗质量和医疗安全,医院感染监测简史,医院感染监测源于19世纪中叶，产褥热发生原因的调查研究医院感染监测的系统发展始于20世纪50年代欧美MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)感染的流行美国在60年代开始成立医院感染控制委员会，在医院中开展空气和环境的细菌学监测,医院感染监测的组织系统,院长领导下的医院感染管理委员会医院感染科科室医院感染管理小组组成三级医院感染监测管理网络,监测内容,医院空气微生物学监测医务人员手的微生物学监测物体表面微生物学监测使用中的消毒剂的微生物学监测压力蒸汽和干热灭菌效果的微生物学监测医疗器械消毒效果的微生物学监测,监测的时机,定期常规监测 次个月针对性监测 医院感染暴发流行时环境变动时监测 新环境,基本原则,严格执行国家统一标准方法2012医疗机构消毒技术规范,监测前准备,检验科的准备 营养琼脂培养皿，一次性使用采样棉试子，一次性无菌规格板，无菌生理盐水，压力蒸汽消毒锅，生物培养箱等临床科室的准备 申请单的填写，无菌采样包（棉试子，剪刀，镊子）医务人员六步法洗手，记录笔，标签。,申请单的填写,环境类别；采样时间；科室；采样人员；平皿规格；监测项目；监测目地；房号。医务人员；采样面积；样本号。品名；批号；商标。,培养皿,倒置拿培养皿，在底部标记1：防止凝结在皿盖上的水蒸气流到培养基表面导致染菌！2：有利于菌种利用培养基营养，加快生长速度,空气微生物学监测,（采用洁净技术，未采用洁净技术）采集频率采样时间沉降法或浮游菌法采集（参照GB50333要求进行监测）,洁净手术室及其他洁净室,沉降法或浮游菌法采集静态：室内设施及功能齐备，空调净化系统正常运行，但无人员的状态。洁净系统自净后与从事医疗活动前或怀疑与医院感染暴发有关时地面上或不高于地面0.8m的任意高度30min,放置培养皿,手术洁净度级别不同，放置个数不同,洁净手术室静态空气监测方法,局部百级周围千级,洁净手术室静态空气监测方法,局部千级周围万级,洁净手术室静态空气监测方法,局部万级周围十万级,洁净手术室静态空气监测方法,局部十万级,洁净手术室静态空气监测方法,洁净度三十万级设置个点面积30m2布放4点,面积100cm2时,取100cm2。采样方法：用55cm2的标准灭菌规格板，放在被检物体表面。用浸有含相应中和剂的无菌采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样14个规格板面积，剪去或折去手接触部份，棉拭子放入装有10ml采样液的试管中送检，门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样,物体表面的监测,检测方法：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振摇80次，用无菌吸管吸取1.0ml接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45480C的营养琼脂1518ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固后置361温箱培养48小时，计数菌落数。,物体表面的监测,结果报告（菌落总数）计算公式：物体表面细菌菌落总数(cfu/cm2)=其中小件物品以cfu/件报告结果,平皿上菌落的平均数x稀释倍数,采样面积(cm2 ),洁净手术部、其他洁净场所，非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等；物体表面细菌菌落总数5cfu/ cm2。 儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房等；物体表面细菌菌落总数10cfu/ cm2。,使用中消毒液细菌总数监测,采样方法： 用无菌吸管吸取1.0ml待检样品，在无菌条件下加入9.0ml含相应中和剂的采样液中混合后送实验室检验（采样液可以用N.S代）。,：将样品管充分混合后，用无菌吸管吸取1.0ml待检样品接种于灭菌培养皿中（共接种2只平皿，做平行样），加入熔化的40-45 灭菌营养琼脂15ml混合后，待其凝固，翻转平板置37 培养48-72h作菌落计数。,醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含0.1%硫代硫酸钠中和剂，洗必泰、季铵盐类消毒剂用含0.3%吐温80和0.3%卵磷脂中和剂，醛类消毒剂用含0.3%甘氨酸中和剂，含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加入吐温80至3%；也可使用该消毒剂消毒效果检测的中和剂鉴定试验确定的中和剂,结果计算,细菌总数(cfu/ml)=N10N平均菌落数10换算成10ml，即1ml采样量，结果按每ml报告。消毒液染菌量（cfu/ml）=平均每皿菌落数10稀释倍数,结果判断,使用中灭菌用消毒液：无菌生长；使用中皮肤黏膜消毒液染菌量：10cfu/ml，其他使用中消毒液染菌量100cfu/ml。,压力蒸汽灭菌效果的监测,方法:物理监测法、化学监测法、生物监测法和BD测试,标准生物测试包的制作方法,标准指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽孢，菌片含菌及抗力符合国家有关标准； 标准测试包的制作：由16条41cm66cm的全棉手术巾制成。制作方法：将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层，然后叠放，制成23cm23cm15cm的测试包 标准生物测试包或生物PCD的制作方法：将至少一个标准指示菌片装入灭菌小纸袋内或至少一个自含式生物指示剂，置于标准试验包的中心部位即完成标准生物测试包或生物PCD的制作,培养方法：,经一个灭菌周期后，在无菌条件下取出标准试验包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，经561培养7d（自含式生物指示物按产品说明书执行），观察培养结果；,结果判定,阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致。自含式生物批示物不需要做阴性对照,干热灭菌的效果监测,方法:物理监测法、化学监测法、生物监测法,标准生物测试管的制作方法,标准指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢，菌片含菌及抗力符合国家有关标准 标准生物测试管的制作方法：将标准指示菌片分别装入灭菌中试管内（1片/管）监测方法：将标准生物测试管，置于灭菌器最难灭菌的部位，即灭菌器与每层门把手对角线内、外角处放置2个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至80时，加盖试管帽后取出试管。并设阳性对照和阴性对照,培养方法,在无菌条件下，加入普通营养肉汤培养基（5mL/管），361培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7d,结果判定：,阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，若每个指示菌片接种的肉汤管均澄清，判为灭菌合格；若阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，而指示菌片之一接种的肉汤管混浊，判为不合格；对难以判定的肉汤管，取0.1mL接种于营养琼脂平板,用灭菌L棒或接种环涂匀,置于361培养48h,观察菌落形态,并做涂片染色镜检,判断是否指示菌生长,若有指示菌生长，判为灭菌不合格；若无指示菌生长,判为灭菌合格,医疗器械采样及检查方法,无菌检验的定义：指检查经灭菌的敷料、缝线、一次性使用的医疗用品、无菌器械以及适用于无菌室的其他品种是否无菌的一种方法。无菌检验应在洁净度为100级单向流空气区域内进行应严格遵守无菌操作，避免微生物污染对单向流空气区域及工作台面，必须进行洁净度验证,医疗器械采样及检查方法,采样时间在灭菌处理后，存放有效期内采样,医疗器械采样及检查方法,采样方法缝合针、针头、刀片等小件医疗器械： 取5件直接浸入6管需-厌氧培养管（其中一管作阳性对照）与4管霉菌培养管。培养基用量为15ml/管,医疗器械采样及检查方法,注射器： 取5付注射器，在5ml洗脱液中反复抽吸5次，洗下管内细菌，混和后接种需厌氧菌培养管（共6管，其中1管作阳性对照）与霉菌培养管（共4管）接种量为1ml注射器0.5ml, 2ml注射器1ml, 510ml注射器2ml ,2050ml注射器5ml。培养基用量为接种量2ml以下15ml/管,接种量5ml为40ml/管。,医疗器械采样及检查方法,手样钳、镊子等大件医疗器械： 取2件用蘸有无菌洗脱液的棉拭子反复涂抹采样，将棉拭子投入5ml无菌洗脱液中，将采样液混匀，接种于需氧-厌氧培养管（共6管，其中1管作阳性对照）与霉菌培养基（共4管）。接种量为1ml/管，培养基用量为15ml/管。,医疗器械采样及检查方法,检测方法：需设阳性及阴性对照管待检样品的需氧-厌氧培养管及阳性与阴性对照管30 35 培养5天，霉菌培养管与阴性对照管20 25 培养7