TCID50与PFU到底是啥关系.doc

TCID50与PFU到底是啥关系PFU:plaque forming unit，空斑形成单位。感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差，因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。MOI :multiplicity of infection，感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI）。其公式为：P = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP（0）。其中：P 为被感染细胞的百分率P(0)为未被感染细胞的百分率m为MOI值例如，如果要感染培养皿中99%的培养细胞，则：P(0) = 1% = 0.01m = -In(0.01)= 4.6 pfu/cell。 TCID50 Protocol：1：制备96孔板单层细胞2：将病毒做系列稀释，横向接种单层细胞板，每稀释度重复3孔3：每日观察细胞病变，记录高于50和低于50病变孔的病毒稀释度，4：计算比距，获得TCID50计算比距：（高于50的病变率50）/（高于50病变率小于50病变率）比距；比距与接近50%病变率的病毒的稀释度的指数相加，就获得了指数。比如：比色计算或者显微镜观察病毒的TCID50在10的负7和8次方之间，那么，指数8与比距相加，获得的新的指数，就是TCID50的指数，TCID50=10的-7.几次方病毒感染力的滴定（TCID50的测定）一、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50( 50% lethal dose)半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）PFU/mL = TCID50/mL0.69二、TCID50的操作步骤1、在离心管中用维持液将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1到10-10,每一次稀释后都需要更换枪头进行下一步稀释。2、将稀释好的病毒接种到已经铺好单层细胞的96孔培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl；设正常细胞对照(两纵排),只加维持液100µl。4、逐日观察并记录结果,按Reed-Muench两氏法计算TCID50病毒感染力的滴定（TCID50的测定）一、测定病毒感染力的方法半数致死量LD50( 50% lethal dose)半数鸡胚感染量EID50(egg 50% infective dose)半数细胞培养物感染量TCID50（50% tissue culture infective dose)蚀斑形成单位（plaque forming unit，PFU）PFU/mL = TCID50/mL0.69二、TCID50的操作步骤1、在离心管中用维持液将病毒液作连续10倍的稀释，从10-1到10-10,每一次稀释后都需要更换枪头进行下一步稀释。2、将稀释好的病毒接种到已经铺好单层细胞的96孔培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100µl；设正常细胞对照(两纵排),只加维持液100µl。4、逐日观察并记录结果,按Reed-Muench两氏法计算TCID50 TCID50与 PFU换算: PFUs0.7TCID50的滴度为什么病毒载体的感染单位有不同的表示方法？不同的病毒载体，其表示感染单位的方式有所不同。早期的逆转录病毒载体一般用CFU，是“clone forming unit”的简称，叫做“克隆形成单位”。感染性滴度的单位一般表示为CFU/ml。这是因为最早的逆转录病毒系统是Dr. Dusty Miller建立的LN系列（包括LN，LXSN，LNSX，LXCN，LNCX等），包装细胞株是PA317, psi2，G&P86等。在这套载体中N代表了neo基因，X代表外源基因，S代表SV40启动子，C代表CMV启动子，L代表逆转录病毒的LTR，具有启动子功能。因此，早期的LN系列载体是双表达载体，重组病毒中有neo基因的表达单位，滴度测定时用病毒感染NIH3T3细胞，用G418选择培养，根据形成neo基因抗性克隆的多少来计算病毒滴度，因此滴度的单位就用cfu/ml来表示了。这种表示方法至今还很常用。腺病毒载体的感染单位一般用PFU表示，是“plaque forming unit”的简称，叫做“空斑形成单位”。感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差，因此近些年许多研究又开始采用古老的TCID50方法来计算腺病毒的感染单位。什么是MOI？MOI 是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。 然而，由于病毒的数量单位有不同的表示方式，从而使MOI产生了不同的含义。能产生细胞裂解效应的病毒例如腺病毒、单纯疱疹病毒等习惯上仍用pfu表示病毒数量，因此其MOI的含义与传统的概念相同。而对于某些病毒如AAV病毒，无法用pfu表示病毒的数量，而是采用TU、IU、病毒颗粒（viral particles, v.p）或基因组数量（vector genome,v.g.）来表示病毒数量，因此其MOI就有了不同含义。采用TU或IU，MOI的含义便是TU number/cell 或IU number/cell。采用v.p.，MOI的含义便是v.p. number/cell 。采用v.g，MOI的含义便是v.g. number/cell。 可以将上述不同的MOI 表示方式分为2种： 1） 以活性单位表示病毒数量，如pfu, TU, IU。这时MOI的含义是指平均每个细胞感染病毒的活性单位数。 2） 以病毒颗粒或基因组数表示病毒数量，如v.p. 或v.g. 。这时MOI的含义是指平均每个细胞感染病毒的病毒颗粒或基因组数。 值得一提的是，上述2种不同的MOI 表示方式在含义和数值上都有所不同。前一种是传统意义上的MOI，后一种MOI表示方式的含义更为简化和直观，也逐步被一些研究者采用。 传统意义上的MOI的测定，其原理是基于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，可计算出感染一定比例的培养细胞所需的感染复数（MOI）。其公式为： P(k) = 1- P(0) ,P(0) = e-m 或m = -InP（0）。 其中： P(k) 为被感染细胞的百分率 P(0)为未被感染细胞的百分