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文档简介

HeLa细胞的传代培养 教学目标 1 理解细胞传代培养的概念和原理2 能按照操作规程进行细胞传代培养的操作 细胞传代培养的概念 概念 指细胞从一个培养瓶以1 2或其他比率转移 接种到另外的培养瓶中的培养 也叫做继代培养 HeLa细胞是一种贴壁生长的细胞 在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化 把细胞分散成单细胞再传代 培养细胞一代生长过程 实验前准备 1 材料 HeLa细胞2 试剂 0 25 胰蛋白酶 1640培养基 含10 小牛血清 PBS 实验前准备 超净工作台 CO2培养箱 倒置显微镜 3 仪器设备 离心机 恒温水浴锅 3 仪器设备 实验前准备 培养瓶 移液管 酒精灯 酒精棉球 试管架 记号笔等 3 仪器设备 实验前准备 1 细胞培养用的器材和试剂灭菌 2 超净工作台准备 75 酒精擦拭台面 紫外灯照射30min 3 试剂预热 37 水浴锅 4 操作人员准备 75 酒精擦拭双手等 4 实验前准备工作 实验前准备 细胞生存环境 无菌 无毒 细胞传代操作 1 倒去培养瓶中的旧培养液 加入2 3mL预热的PBS液 轻轻振荡漂洗细胞 以除去悬浮在细胞表面的碎片 吸除培养液 细胞传代操作 2 胰蛋白酶消化 加入适量0 25 胰蛋白酶消化液 37 消化 注意消化液的量以盖住细胞最好 加消化液 细胞传代操作 3 盖紧瓶盖 放在倒置镜下观察细胞 随着时间的推移 原贴壁的细胞逐渐趋于圆形 在还未漂起时将消化液弃去 加入适量预热后的培养液终止消化 一般消化时间约为2 3分钟 消化前细胞 消化后细胞 适度状态 吸除消化液 细胞传代操作 4 用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液 吹打成细胞悬液 分装 细胞传代操作 5 以1 2或1 3进行分装 补充新鲜培养基 并在培养瓶上做好标记 注明代号 日期 轻轻摇匀 置于37 CO2培养箱培养 如果瓶盖不带通气孔 则需将瓶盖旋开半圈 24h后即可对细胞的生长情况进行观察记录 当细胞长成单层后即可用于接种或冻存 实验操作注意事项 1 用电安全2 操作仪器安全3 及时规范记录 HeLa细胞传代培养实验原理 细胞在培养瓶长成致密单层后 已基本上饱和 为使细胞能继续生长 同时也将细胞数量扩大 就必须进行传代 再培养 传代培养也是一种将细胞种保存下
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