病毒感染的检查方法与防治原则

,医 学 微 生 物 学(Medical Microbiology),第二篇 病毒学,第二十四章 病毒感染的检查方法与防治原则,教学目标,熟悉：人工主动免疫和人工被动免疫的常用生物制品。了解：病毒感染的实验室诊断方法。有效抗病毒药物的抗病毒机制及应用价值。,思考：,病毒如此之小和活细胞内寄生，我们如何分离培养及检查？血清学诊断和分子生物学检查的理论基础是什么？可通过什么方式预防病毒的感染？,对抗病毒有招-巴斯德在1889年发明了狂犬病疫苗 病毒的面貌清晰地呈现在人们的眼前仅仅百余年的历史，但明确的病毒致病的记载早在四百多年前就有了。早在1566年，疯狗咬人致病的案例已经被记录下来，但直到1885年，人们还不知道狂犬病到底由什么引起。,在细菌学说占统治地位的年代，巴斯德的试验为狂犬病的防治开辟了新的路径。巴斯德发现，将狂犬病延髓提取液多次注射兔子后，再将这些毒性已递减的液体注射狗，狗就能抵抗狂犬病毒的侵染。 1885年的一天，人们把一个被疯狗咬过的9岁男孩迈斯特尔送来求救，巴斯德给这个孩子注射了毒性减到很低的提取液，然后再逐渐用毒性较强的提取液注射。巴斯德的方法拯救了男孩的生命。,第一节 病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察光镜检查包含体分离培养,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清,二、病毒的分离与鉴定,（一）病毒分离培养方法类型 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation）,标本,无菌处理,细胞培养鸡胚培养动物接种,指标阳性指标阴性,病毒鉴定,盲传23代,指标阴性,病毒阴性,一般程序,1.动物接种 最原始 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒,2.鸡胚接种 孵化914天的鸡胚,3.细胞培养 在一定条件下用离体的活组织或活细胞培养病毒的方法,证实病毒存在的方法： CPE 红细胞吸附及凝集 干扰现象 pH值改变,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 如腺病毒等多数病毒,腮腺炎病毒感染细胞,红细胞吸附（hemadsorption）,HA红细胞表面HA受体细胞吸附,病毒胞膜表面血凝素(HA) 相应抗体红细胞吸附抑制,红细胞吸附抑制试验,干扰现象（interference）,风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),人胚肾细胞,风疹病毒埃可病毒,CPE(-)风疹病毒(+) 埃可病毒(-)CPE(+)风疹病毒(-) 埃可病毒(+),（二）病毒的鉴定,1.形态学鉴定 电子显微镜2.病毒的血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 血凝抑制试验、免疫标记3.病毒分子生物学鉴定,三、病毒感染的诊断（一）病毒形态学鉴定,电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）或包涵体，对一般病毒检测意义不大,（二）免疫学检查法检查病毒抗原 ELISA血凝抑制试验、中和试验检查病毒特异性IgM 风疹病毒、甲型肝炎病毒等（三）检查病毒核酸核酸杂交技术PCR技术,第二节 病毒感染的防治原则,一、人工主动免疫常用生物制品,灭活疫苗、活疫苗；基因工程疫苗；亚单位疫苗；核酸疫苗,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫血清血清丙种球蛋白细胞因子等,三、病毒感染的治疗,干扰素和干扰素诱生剂中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗,抗病毒化学制剂,反义寡核苷酸干扰RNA核酶（ribozyme）,核苷类药物 碘苷 阿昔洛韦非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂其他抗病毒药物,总结,病毒感染的检查方法与一般程序。病毒感染的特异预防病毒感染的治疗,思考题,1.分离病毒的标本和作血清学诊