五丰液相培训小结PPT课件.pptx

五丰液相培训小结 上海彩迩文生化科技有限公司 2020 3 25 1 目录 1 液相使用注意事项2 泵故障及处理3 泵的维护4 检测器故障及处理5 流通池的清洗维护6 过滤头的清洗7 小结 2020 3 25 2 安全注意事项 1 有机溶剂易挥发 务必使环境保持通风 适时打开排风系统 谨防高浓度有机相气体聚集对人体产生危害 2 处理溶剂时戴防护眼镜 以防溶剂溅到眼睛里 如溶剂飞溅到皮肤上 应立即用大量清水冲洗 严重的情况应立即就医 2020 3 25 3 仪器注意事项 3 管路中有使用PEEK树脂材料处 尽量不要使用下列流动相 二氯甲烷 三氯甲烷 四氢呋喃 丙酮 二氯乙酸 二甲基亚砜等 此类流动相可以使树脂部件变脆 引起管路断裂和流动相泄露 如果采用丙酮含量低于0 5 的水溶液作为流动相 则影响不大 4 卤离子可以腐蚀不锈钢管路材料 因此应尽量避免诸如HCL KCL NaCL NH4CL等 如必须使用 则分析结束后立即用去离子水冲洗整个管路不小于1小时 冲洗时不要连接色谱柱 2020 3 25 4 5 流动相使用前需要脱气 否则在溶剂混合或改变温度 压力时易产生气泡 从而使输液泵产生脉动 检测器产生噪音 2020 3 25 5 进样针不要弄错 6 液相进样针为平头进样针 外径0 75mm 切记不能错拿尖头进样针 否则会损坏进样阀定子密封 造成不必要的成本 2020 3 25 6 含缓冲盐流动相的问题 7 使用含缓冲盐溶液的流动相分析前 先用10 甲醇水溶液 或乙腈水溶液 1ml min的流速 将保存在甲醇 或者乙腈 中的反相色谱柱冲洗30分钟 使反相色谱柱充满10 的甲醇水溶液 或者乙腈水溶液 再更换含有缓冲盐溶液的流动相 稳定后 做样品 做完样品后 用10 甲醇水溶液 或者乙腈水溶液 泵的流速 1ml min冲洗色谱柱30分钟 再用甲醇 或者乙腈 冲洗系统 并将反相色谱柱和系统保存在甲醇 或者乙腈 中 清洗时间至少为30分钟 2020 3 25 7 高压恒流泵故障的简易诊断与处理方法 仪器开机无反应 显示屏不亮 检查电路 电线 接头 保险丝 更换显示屏或返修 2020 3 25 8 泵易出问题的地方 带柱后清洗装置 2020 3 25 9 泵无压力 1 无液体出来 是否走空 观察泵头管路是否有大气泡 若有则针筒抽液 入口单向阀红宝石小球与球座之间有异物 使得小球无法正常回落球座或无法与球座严合 导致液体全部回流 此时清洗单向阀即可 吸滤头或泵头管路堵 可以断开管路 储液瓶高放 看液体是否畅快流出 若堵 则纯水超声清洗或换 2 泵头漏液 接头漏液 排空阀未关 拧紧至不漏或更换接头 管路 关排空阀 检查泵密封圈是否损坏 2020 3 25 10 泵头 吸入阀宝石球与球坐粘连 吸入阀不能导通 活塞向后运动 泵座 排出阀关闭 液流方向 泵吸液过程有故障情况 吸入阀宝石球粘连 泵腔体内没有液体流入 宝石活塞杆 密封圈 2020 3 25 11 排出阀导通 泵座 宝石活塞杆 密封圈 吸入阀宝石球与球座之间有杂质 液体反向泄漏 液流方向 泵排液过程有故障情况 宝石球与球座之间有杂质 反向泄漏液流方向 反向漏液方向 活塞向前运动 2020 3 25 12 泵压力低 压力偏低 小漏 找出漏点 拧紧 密封圈或柱塞杆磨损 更换密封圈 柱塞杆 无操作经验的可考虑返修 双泵的情况下可考虑是否某个泵无压力 A调100 看压力情况 再换B调100 看压力情况 压力低且不稳 流速不准 泵头或管路内有气泡 逐段排查 排气泡 单向阀密封不严 清洗单向阀 密封圈或柱塞杆磨损 更换密封圈 柱塞杆或返修 可用量筒和计时器测量实际流速 2020 3 25 13 泵头 吸入阀关闭 泵座 宝石活塞杆 密封圈 排出阀导通 液流方向 压力下降 密封圈泄漏产生的故障现象 密封圈与宝石杆之间存在间隙 导致漏液和压力下降 泵腔体 活塞向前运动 2020 3 25 14 泵压力高 不接柱子压力高 管路堵塞 逐段排查堵塞点在哪里 冲洗疏通或更换 接柱子压力高 流速是否偏高 柱温是否过低 是否在走梯度 色谱柱柱头筛板堵塞 色谱柱若堵得实在没法用了 可考虑拆下柱头筛板超声清洗 拆柱子时手不要直接接触柱子 谨防柱内填充受热而爆出 反相柱 填充粒径大于1 8um 也可考虑低流速反冲色谱柱 注意 无论是拆筛板还是反冲都有可能对柱子产生重大影响 必须先阅读说明书或咨询色谱柱厂家后再酌情考虑是否操作 其他 压力传感器失灵 返修 2020 3 25 15 压力不稳 梯度压力变化为正常现象 泵头 单向阀或系统内有气泡 排气泡 流动相脱气 单向阀损坏 更换 泵密封损坏 更换 压力在一定范围内上升下降 排除其他原因后 考虑阻尼器失灵 联系厂家确认后 返修 2020 3 25 16 泵的日常维护 在使用有缓冲盐溶液的流动相后 需要对柱塞杆 密封圈等部件及时清洗 因为在柱塞杆来回运动过程中不可避免地会渗透出部分缓冲溶液 液体挥发干后或遇到有机相会析出 导致柱塞杆和密封圈磨损 所以配有自动柱后清洗功能的仪器则通过电磁阀调节清洗流量 用10 异丙醇水溶液 0 45um滤膜过滤过 进行清洗 若是手动清洗 则分析结束后 用注射器吸取30ml的10 异丙醇水溶液注射清洗两次 以延长元件使用寿命 如果一定需要拆下泵清洗 则需要将泵头内的柱塞杆缩进去再拆泵 以保护柱塞杆 拆时 手指按着泵头 左右螺丝对称拧松 轻轻拿下 清洗完成后 原样装回 再同样操作拆另外一个泵 超声清洗单向阀时 请竖直超声 否则有超散单向阀的风险 柱塞杆密封圈是高压恒流泵易损件之一 在使用中发现实测流量低于设定值 差值逐渐增大 压力波动大而难于达到高压 密封圈泄漏传感器报警等 检查没有其他外部原因适 须及时更换受损的密封圈 清洗泵头时用清洁绸布或棉球沾蒸馏水或溶剂轻轻擦去泵头 泵座的表面 孔上脏物 请勿用硬物划伤柱塞杆 孔周围表面而破坏密封性 2020 3 25 17 两种柱后清洗模式 手动柱后清洗 自动柱后清洗 2020 3 25 18 输入单向阀的拆卸 从输入单向阀上拧下不锈钢输液管手拧接头 用8mm的扳手旋松并取下输入单向阀 2020 3 25 19 输出单向阀的拆卸 用5 16 的扳手将不锈钢单向阀输出管接头从单向阀上拧下 另一头从排空阀上拧下 单向阀输出管有左右之分 建议分开拆卸 并做好相应标记 用8mm的扳手逆时针方向旋松并取下单向阀 2020 3 25 20 泵头的拆卸 分别拆下单向阀输入 输出管和输入 输出单向阀 用配套的内六角扳手均匀地旋松泵头上二个螺钉 对左侧螺钉旋松约1 4圈 换到右侧螺钉旋松约1 4圈 左右交替均衡旋下二个螺钉 注意 请勿单独旋下一侧螺钉 使泵头倾斜折断柱塞杆 拆之前请将柱塞杆缩至最里面 2020 3 25 21 用手托住泵头缓慢旋下二个螺钉 平稳地取下泵头放在瓷盘内滤纸上 防止零件丢失 2020 3 25 22 输入单向阀 输入单向阀 输出单向阀 宝石球座 宝石球 球阀 2020 3 25 23 恒流泵中气泡的排除 1 首先 检查流动相储液瓶中的溶剂过滤头是否阻塞 具体做法 将输入三通器上的溶剂塑料连接管的卸下 将流动相储液瓶置于高位 利用压差使溶液流出 如果溶剂流的很顺畅 说明溶剂过滤头是好的 如果是一滴一滴的流出 则说明过滤头阻塞 需要超声清洗 复原 2 将仪器所配的注射器及塑料连接管插到放空阀的导管上 逆时针旋放开空阀旋钮1 2圈 抽液5 10mL 将泵的流速设定在每分钟一毫升的流速 启动泵 观察塑料连接管的流动溶液是否还有气泡 如没有气泡说明从过滤头到放空阀这一段已将气泡排除 3 将泵关闭 关闭放空阀旋钮 放空泵输出口 将泵的流速设定在3 5mL每分钟 将泵内的阻尼器和压力传感器的气泡赶出 流出溶液10 15mL后将泵关闭 连接上色谱柱 将流速设定在每分钟一毫升 启动泵 观察压力及压力脉动 4 应用快速降压法赶出气泡 用小堵头将泵的流动相输出口堵上 将流速设定在1毫升 分 将柱前压力升至20Mpa左右 将排空阀快速打开 重复2 3即可 2020 3 25 24 紫外检测器故障的简易诊断与处理方法 1 吸光度与样品池光强度值出现脉冲式波动 原因 有气泡通过或附着在流通池 流动相过滤脱气 冲洗流通池 若波动小且无规则 则可能是氘灯突然闪一下导致 2 基线噪声 原因 流通池中有气泡或污染 可不接柱子大流速冲洗 压力不超过3MPa 环境温度或气流不稳 需保持环境稳定 氘灯年限已到 接地线是否正常 3 基线漂移 原因 池窗污染 冲洗去污或更换新 池体有小气泡 冲洗除气泡 检测器温度变化 控制温度稳定 池内原先流动相未置换完全 等待置换完全 4 光强度下降 噪声大 原因 氘灯发光能力下降 需更换 若只是样品池光强度下降 则样品池污染 需冲洗去污 5 出现负峰 检测器输出信号的极性相反 样品的吸收小于流动相 流动相不纯 样品溶剂干扰 示差折光检测器中样品的折射率较低 进样中带入气泡 2020 3 25 25 检测器清洗 流通池内有气泡或污染物会影响吸光度测量 出现噪声增大 基线漂移严重的现象 需要冲洗流通池 去除气泡或污染物 1 用纯甲醇作流动相 流速1 0 波长 254nm 记录样品池和参比池光强度值 供冲洗后进行比较 2 关闭泵和检测器 将注射器连接件连接到流通池输入口 在注射器中吸入异丙醇 将异丙醇注入流通池 清洗流通池 可反复数次 3 在注射器中吸入流动相 注入流通池中 进一步清洗流通池 可反复数次 4 打开检测器 观察光强度值变化和冲洗效果 若光强明显改善 则可将管路重新连接好 5 若上述处理仍无法清除污染 则需送厂处理或更换新的流通池 注 流通池更换需整体拆下 整体安装 非专业人员严禁拆开流通池部件 2020 3 25 26 检测器维护注意事项 1 每天分析完后要冲洗整个管路 保持流通池干净 定期用强溶剂反相冲洗检测器 断开柱子 以清洗流通池 2 流动相要脱气 防止气泡滞留在流通池内 影响分析结果 3 注意氘灯的保养 不分析时请关氘灯 以延长氘灯使用寿命 最好在需关灯时间超过4小时才关灯 因为频繁地开关等同样缩短使用寿命 2020 3 25 27 滤头问题 流动相过滤头在日常使用过程中可能会被大家所遗忘 平时流动相都会用0 45um滤膜过滤 所以仪器有问题时也不太可能会第一时间想到它 其实 滤头作为液相系统的第一道大门是很重要的一部分 滤头在使用过一段时间后可能会变脏 尤其是在水相或含有缓冲盐溶液的流动相里 从而导致泵吸不上液 泵压力高 吸入泵内的液体含有气泡等 2020 3 25 28 滤头清洗 判断滤头是否脏或堵 先目视是否有异物 再断开与泵连接的管路 储液瓶高放 看液体是否畅快流出 如果过滤头已经堵塞 则没有溶剂或只有很少的溶剂滴出 此时需要清洗滤头了 不锈钢过滤头 五丰 岛津 waters 清洗时可以用甲醇 异丙醇或纯水超声清洗 而安捷伦的滤头由于是玻璃或陶瓷材料制成 超声可能损坏玻璃过滤头的过滤板 推荐用稀硝酸 35 左右 浸泡 浸泡大约一个小时后 再用水洗净过滤头 洗干净的滤头先用针筒往里打满流动相 再接到管路上 防止残留空气在里面 2020 3 25 29 注意事项 1 流动相一定要0 45um滤膜过滤 超声后使用 水要使用超纯水或二次蒸馏水 有机相尽量选择高品质色谱级试剂 2 当使用水或缓冲盐做流动相时 一定要经常更换流动相 水最好每天更换 至少两天换一次 缓冲盐最好现配现用 如果不及时更换容易变质的流动相 很容易滋生微生