薄层色谱方法总结.ppt

薄层色谱方法总结 1 方法原理 A 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相 B 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 诱导 偶极相互作用 氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓 吸附 分散 离子交换和络合等分离机理 2 溶剂 使用的溶剂必须是 分析纯 或 色谱纯 溶剂组成采用体积量比 如正丁醇 冰乙酸 水 4 1 1 V V V 或者绝对量 如18ml甲苯 2ml甲醇 其总量应足以使TLC HPTLC板的浸入深度约为5mm 展开剂要求新鲜配制 不要多次反复使用 如需分层 则按要求放置分层后取需要的一相 上层或下层 备用 一 溶剂选择规则 二 展开剂的选择条件 1 对所需成分有良好的溶解性2 可使成分间分开3 待测组分的Rf在0 2 0 8之间 定量测定在0 3 0 5之间4 不与待测组分或吸附剂发生化学反应5 沸点适中 黏度较小6 展开后组分斑点圆且集中7 混合溶剂最好用新鲜配制 三 溶剂极性参数表 环已烷 0 2 石油醚 类 30 60 石油醚 类 60 90 正已烷 0 0 甲苯 2 4 二甲苯 2 5 苯 2 7 二氯甲烷 3 1 异丙醇 3 9 正丁醇 3 9 四氢呋喃 4 0 氯仿 4 1 乙醇 4 3 乙酸乙酯 4 4 甲醇 5 1 丙酮 5 1 乙腈 5 8 乙酸 6 0 水 10 2 1 一般说 弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成 再根据需要加入甲醇 乙醇 乙酸乙酯来调节系统的极性 以达到好的分离效果 适合于生物碱 黄酮和萜类等的分离 2 中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成 由甲醇 乙醇 乙酸乙酯等来调节 适合蒽醌 香豆素 以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离 3 强极性溶剂 由正丁醇和水组成 也靠甲醇 乙醇 乙酸乙酯等来调节 适合于极性很大的生物碱类化合物的分离 四 展开剂的选择 物质分子化学结构中 通常由较极性部分和非极性部分两部分 例如下面以苯丙烷为极性小部分 随着极性基团部分的增加 总体的极性就增加 展开剂极性也增加了 1 类极性较小的挥发性物质 冰片 石油醚 30 60 醋酸乙酯 17 3 厚朴酚 苯 醋酸乙酯 9 1 5 丹皮酚 环己烷 醋酸乙酯 3 1 香附酮 苯 醋酯乙酯 冰醋酸 92 5 5 结论 以石油醚 正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂 通常起溶解和分离化合物的作用 而用醋酸乙酯为调节Rf 比移值 的溶剂 为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响 适当加入添加剂 如有机酸或者有机碱 2 类极性较小的不挥发性物质 谷甾醇 环己烷 醋酸乙酯 甲醇 6 2 5 1 或者环己烷 丙酮 5 2 熊果酸 甲苯 醋酸乙酯 冰醋酸 12 4 0 5 齐墩果酸 氯仿 甲醇 40 1 猪去氧胆酸 氯仿 乙醚 冰醋酸 2 2 1 大黄素 苯 醋酸乙酯 甲醇 15 2 0 2 或者苯 乙醇 8 1 丹参酮 A 苯 醋酸乙酯 甲酸 40 25 4 穿心莲内酯 氯仿 无水乙醇 9 1 靛玉红 靛蓝氯仿 乙醇 9 1 或者苯 氯仿 丙酮 5 4 1 结论 这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些 因为这类物质极性小的母核大 而极性大的基团通常可以形成氢键 比如羧酸 羟基 以上物质 母核分子量减小 母核结构中不饱和健的增加 尤其是出现苯环 极性基团的增加 都使极性增加 展开剂极性也增大 这个范围内的物质很多 一般展开剂大百分数的溶剂可以从环己烷 甲苯 二甲苯 苯 氯仿的顺序 按照极性要求选择 这里注意 异丙醇 正丁醇极性指数也比较小 在这范围的化合物很少用 因为粘性大 展开慢 造成斑点扩散 另外 羟基的氢键作用力也有不利 调节Rf值的溶剂 从醋酸乙酯 甲醇 丙酮 乙醇 挥发性物质也有很多带羰基 羟基的 但从它的挥发性就可以明白 分子间作用力不强 另外 母核与石油醚 正构烷和苯的结构差异小 估计更容易脱离硅胶吸附 更快进入溶剂中 而不需要通过提高展开剂的极性 3 类极性大的小分子有机酸 结论 这类物质多数是苯乙烯母核的 这个结构的极性本身比较大 另外有酚羟基和羧酸基团 个别有多羟基配基 皂苷的展开剂差不多 极性大 注意甲酸通常指的是浓度85 左右的 含有水 没食子酸 氯仿 醋酸乙酯 甲酸 5 4 1 阿魏酸 咖啡酸 菊苣酸 绿原酸 异绿原酸 例如下面以苯丙烷为极性小部分 随着极性基团部分的增加 总体的极性就增加 展开剂极性也增加了 依次为肉桂酸 阿魏酸 咖啡酸 菊苣酸 绿原酸 相应展开剂分别为 正己烷 乙醚 冰醋酸 5 5 0 1 苯 冰醋酸 甲醇 30 1 3 氯仿 甲醇 甲酸 9 1 0 5 石油醚 乙酸乙酯 甲酸 3 6 1 醋酸丁酯 甲酸 水 7 2 5 2 5 4 类含氮有机物 结论分析 由于NH2硅醇基的作用很强 在强极性展开剂加有机酸 有机碱扫尾 对于极性化合物 使用正丁醇对斑点扩散影响较小 因为化合物和硅胶的作用强 盐酸小檗碱 苯 醋酸乙酯 甲醇 异丙醇 浓氨试液 12 6 3 3 0 6 氨蒸气饱和 或正丁醇 冰醋酸 水 7 1 2 麻黄碱 氯仿 甲醇 浓氨试液 20 5 0 5 或正丁醇 冰醋酸 水 8 2 1 甘草酸铵 醋酸乙酯 甲酸 冰醋酸 水 15 1 1 2 五 TLC的通用显色方法 1 紫外照射法 方便 不破坏样品 2 碘蒸气法 通用性强 与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用 3 荧光试剂 制造荧光背景 使原来紫外下无荧光物质被鉴别 有荧光物质更明显 4 硫酸溶剂 对绝大多数有机物有效 但有破坏性 六 薄层层析和纸色谱操作注意事项 1 点样点样器点样于薄层板上 一般为圆点 点样基线距底边1 0 1 5cm 样点直径一般不大于2mm 点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜 若因样品溶液太稀 可重复点样 但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样 以防样点过大 造成拖尾 扩散等现象 而影响分离效果 点样时必须注意勿损伤薄层表面 2 展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中 浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜 密封 待展开至规定距离 一般为8 15cm 取出薄层板 晾干 待检测 注 展开缸如需预先用展开剂预平衡 可在缸中加入适量的展开剂 密闭 一般保持15 30分钟 3 显色与检视供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视 也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色 或加热显色 在日光下检视 有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在356nm紫外光灯下观察荧光色谱 对于可见光下无色 但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板 如GF254板 在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱 理想的显色希望灵敏度高 斑点颜色稳定 斑点与背景间的对比度好 斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比 在样品组成并不完全已知的情况下 通用显色方法显得尤为重要 通常显色方法主要有 1 紫外照射法 方法 不破坏样品2 碘蒸气法 通用性强 与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用3 荧光试剂 制造荧光背景 使原来紫外下无荧光物质被鉴别 有荧光物质更明显 四种体系展开剂 PE 60 90 EtAc AcOH n Butanol H2O2 1 1 1 EtAc PE 1 2 EtAc PE AcOH15 5 1 展开剂 展开剂选择的大概原则 选择展开剂一般要用混合溶剂 一般要有一种对所要展开样品溶解度较大的溶剂 视样品的极性 再选用相应的体