临床细菌培养相关知识培训

临床细菌培养相关知识培训,科 室:主讲人：,培 训 内 容,一、微生物室开展检验项目二、临床样本采集三、样本送检时间四、鉴定药敏报告解读五、血培养再认识六、 VITEK 2鉴定药敏分析仪七、微生物室在医院中的作用,一、微生物检测项目,一般细菌培养及鉴定真菌培养及鉴定尿培养加菌落计数血培养(需氧培养及厌氧培养)常规药敏定量实验结核菌涂片真菌涂片一般细菌涂片新型隐球菌涂片(脑脊液样本),培养涂片类,一、微生物检测项目,肥达氏反应(沙门氏菌感染引起的伤寒副伤寒)外斐氏反应(立克次体感染引起的斑疹伤寒)布鲁氏菌凝集试验(布鲁氏菌感染引起的布病)肺炎支原体抗体检测结核杆菌抗体检测梅毒螺旋体抗体检测,血清学检验类,一、微生物检测项目,细菌性阴道病四联检验泌尿生殖道支原体培养及药敏淋病奈瑟菌培养衣原体抗原检测（沙眼衣原体）,性病检验类,二、临床样本采集,临床样本种类,呼吸道样本:痰、鼻口咽拭子、支气管肺泡灌洗液消化道样本:便、肛门拭子泌尿道样本:中段尿、尿道分泌物、阴道分泌物伤口渗出液：脓液、创伤感染渗出液、各类穿刺液无菌类体液:胸腹水、脑脊液、关节液、心包积液血 样 本:静脉血,二、临床样本采集,痰样本:患者晨起凉白开水漱口，用力咳出第一口深部痰直接留于无菌痰杯内，加盖送检。咽拭子:无菌拭子用无菌盐水蘸湿，直取感染部，反复刮取数下，插回无菌管中。送检时限:样本采集后立即送检，时间不超过2小时。送检指征:咳嗽咳痰，影像学改变，咽痛咽部红肿及有脓性分泌物.,呼吸道样本采集送检要求,二、临床样本采集,中段尿:患者留样本前一天晚上少饮水，晨起先清洗外阴，无菌棉签或纱布擦干，排出前段尿，留取中段尿于无菌管中加盖送检。原则上采集晨起第一次尿.尿道分泌物:晨起排尿前留取.阴道分泌物:请妇科大夫取。导尿患者尿样本:上段导尿管消毒后，注射器穿刺抽取10ml尿液置于无菌管中送检。送检时限:采集后应立即送检,时间不超过两小时.送检指征:尿频,尿急,尿痛,肉眼脓尿血尿,尿道口脓性分泌物,尿常规检查有白细胞或亚硝酸盐阳性.留置导尿患者发热.,泌尿生殖道样本采集送检要求,二、临床样本采集,消化道样本采集送检要求,粪便样本:患者自然排便后，挑取有脓血或黏液部分粪便，液状粪便取絮状物于无菌容器内(痰杯),样本勿留取过多。 直肠拭子:排便困难的患者和婴幼儿，清洗肛周，拭子经无菌盐水润湿后插入肛门，成人4-5cm，儿童2-3cm，轻轻旋转后拔出置无菌管中送检。送检时限:采集后立即送检，时间不超过2小时 。送检指征:腹泻、稀便、黏液便、脓血便伴有腹痛或发热等症状。,二、临床样本采集,开放性脓肿:无菌盐水清洗病灶，用无菌拭子采集靠近组织部分的脓液及病灶深部的分泌物(脓肿底部或脓肿壁取样)。闭锁性脓肿:各类与外界不相通的脓肿，皮肤消毒两次后，注射器抽取脓液后(针头插入胶塞)，切开引流采集部分脓肿壁置无菌管与注射器一并送检。(也可将抽取的脓液打入血培养的需氧及厌瓶中)送检时限:采集后立即送检，时间不超过2小时。送检指征:局部红肿热痛和功能障碍等化脓性感染典型特征。,脓液样本采集送检要求,二、临床样本采集,脑脊液:腰椎穿刺无菌采集1-3ml立即保温送检.胆 汁:十二指肠引流或胆囊穿刺等方法采集3-5ml立即送检.胸腹水,心包液,关节液:无菌穿刺采集,置无菌注射器或无菌管送检.也可打入血培养需氧厌氧瓶内送检.送检时限:样本采集后立即送检,脑脊液要求保温送检.送检指征:头痛恶心呕吐颈强直等脑膜炎症状.重要原则：早期、服用抗菌药物前采样，多次送检。,穿刺液样本采集送检要求,三、样本送检时间,痰、尿、便等临床样本：尽可能于9:00时前送检。脓液、脑脊液、胸腹水：8:00-16:00时送检，节假日8:00-11:30送检。血培养类：血培养及使用血培养瓶培养的胸腹水脓液样本可随时送检，8:00-16:20送检至医技楼五楼，其他时间及节假日11:40后送急诊化验室。,四、鉴定药敏报告解读,痰及咽拭子等呼吸道样本-咽部正常喉菌尿培养及菌落计数-无菌生长便及肛门拭子消化道样本-无致病菌生长脓液及体表创伤口渗出液-无菌生长或无致病菌生长胸腹水脑脊液-无菌生长阴道分泌物-无致病生长血培养-需氧及厌氧培养均未生长,细菌培养鉴定阴性结果,四、鉴定药敏报告解读,痰及咽拭子:革兰阴性杆菌，金黄色葡萄球菌，乙型溶血链球菌均认为是致病性细菌。有真菌生长时，可能为污染菌，需要复检.中段尿:需认真看菌落计数提示，肠球菌计数104cfu/ml认为是致病菌；革兰阴性杆菌计数105cfu/ml认为是致病菌， 105cfu/ml时为可疑结果，需根据临床症状进行判断，必要时重复送检。便及肛门拭子:只检验沙门菌，志贺菌及四种致病大肠埃希菌。脓液:表皮葡萄球菌可能为污染菌，深部脓肿样本建议复检。重要提示：培养结果与临床症状不符时需复检或联系检验科。,细菌培养鉴定阳性结果,四、鉴定药敏报告解读,敏感度提示: 敏感有效；耐药无效；中介无敏感药物时才可用，需加大剂量或与其它抗菌药物合用。耐药机制: 耐甲氧西林金葡菌(MRSA)内酰胺类无效 泛耐药不动杆菌对临床现有抗菌药物无效 超广谱内酰胺酶(ESBL)半合成类青霉素,头孢菌素无效 多重耐药菌对三类以上抗菌药物耐药 内酰胺酶(BLAC)青霉素类无效 诱导克林霉素耐药(ICD)红霉素和克林霉素不可合用 其他:嗜麦芽黄单胞菌只有复方新诺明,左氧氟沙星,头孢他定,细菌药敏试验结果,四、鉴定药敏报告解读,药敏试验并不针对临床所有抗菌药物，基本涵盖几大类青霉素类：氨苄西林、哌拉西林青霉素/酶抑制剂类：氨苄/舒巴坦、哌拉/他唑巴坦、阿莫/克拉维酸头孢菌素：一代(头孢唑林)、二代(头孢替坦)、三代(头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟)、四代(头孢吡肟)头霉素类：头孢西丁单酰胺类：氨曲南碳青酶烯类：亚胺培南、厄他培南氨基糖苷类:阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素喹诺酮类：左氧氟沙星、环丙沙星磺胺类：复方新诺明重要提示：尽可能使用药敏报告中的抗菌药物，想用的抗菌药物不在药敏报告中，要参照同类的药敏试验结果。,革兰阴性菌药敏试验结果,四、鉴定药敏报告解读,青霉素类：青霉素、氨苄西林、苯唑西林头孢菌素：三代(头孢曲松)氨基糖苷类:庆大霉素、妥布霉素喹诺酮类：左氧氟沙星、环丙沙星、莫西沙星磺胺类：复方新诺明四环素类：四环素、替加环素大环内酯类：红霉素林可霉素类：克林霉素多肽类：万古霉素其他类: 利福平、呋喃妥因,革兰阳性菌药敏试验结果,五、血培养再认识,时间：抗菌药物使用前，寒战和发热初起时采血。操作：1)确定静脉穿刺采血部位。 2)75%酒精脱脂（30秒）安尔碘（ 30秒）。 3)75%酒精消毒血培养瓶。 4)20ml注射器换用5ml注射器针头采血20ml。 5)需氧瓶和厌氧瓶各10ml。务必保证需氧瓶血量。送检：样本采集后立即保温送检。血培养瓶保存：未使用的血培养瓶常温避光保存。送检指征：发热（弛张热、波浪热、稽留热）、低体温。,血培养采集送检要求,五、血培养再认识,次数：怀疑菌血症及败血症患者应连续送检三次，每次均应做需氧及厌氧培养。感染性心内膜炎：应采集5套血培养。血量：成人10ml/每瓶；婴幼儿13ml/瓶(可只采需氧瓶）。采血数与检出率关系,血培养送检次数,五、血培养再认识,阴性报告：经5日以上需氧及厌氧培养（现多延至7日）报告需氧培养厌氧培养均无菌生长。阳性报告：提示菌血症、败血症、一过性菌血症。重要提示：培养出表皮葡萄球菌时，有一定机率为一过性菌血症，或采血时消毒不彻底的污染菌，此时应复查。题外音：发热即为血培养指征，不能以白细胞多少做为血流感染指征，布病、伤寒及免疫力低下患者白细胞可不升高。,血培养报告解读,五、血培养再认识,血培养全球分布量,五、血培养再认识,每一千人每年用的血培养瓶数目,六、VITEK2鉴定药敏分析仪,全自动标准化更快速更准确专家系统纠正错误的发生,VITEK2鉴定药敏分析仪,细菌鉴定药物系统的更新换代,半自动,全自动,七、微生物室的发展,成 本,