人教版教学课件土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

专题2微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课题目标 研究培养基对微生物的选择作用 进行微生物数量的测定 研究对象 土壤中能分解尿素的细菌 达到目的 1 从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 2 统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 研究思路 一 筛选菌株 原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件 包括营养 温度 PH等 同时抑制或阻止其他微生物生长 回答 1 在该配方中 为微生物生长提供碳源和氮源的是什么物质 2 绝大多数的微生物都能利用葡萄糖 但是 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 请分析该培养基是否对微生物有选择作用 如果有 是如何进行选择的 葡萄糖 尿素 有选择作用 选择培养基 在微生物学中 将允许特定种类的微生物生长 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 统计菌落数目 常用方法 稀释涂布平板法 显微镜直接计数法 还可以用过滤膜法 1 稀释涂布平板法 也叫活菌计数法 原理 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有多少活菌 为了保证结果的准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 若设置的重复组中结果相差太远 意味着操作有误 需重新实验 计算公式 每克样品中的菌落数 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 涂布平板所用稀释液体积 稀释倍数 设置重复组 目的是增强实验的说服力与准确性 将待测样品经一系列10倍稀释 然后选择三个稀释度的菌液 分别取0 1ml接种到已制备好的平板上 然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面 放在适宜的温度下培养计数菌落数 为是结果接近真实值 可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上 经涂布培养 计算出菌落平均数 操作 2 显微镜直接计数法 1 原理 此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板 在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量 2 方法 用计数板计数 计数板是特制的载玻片 其上有特定的面积为1mm2 高为0 1mm的计数室 一个计数室又被分成25个 或16个 中格 每个中格再被分成16个 或25个 小格 每个计数室都由400个小格组成 3 操作 将稀释的样品滴在计数板上 盖上盖玻片 然后在显微镜下计数4 5个中格中的细菌数 并求出每个小格所含的细菌数 再按计数公式求出每毫升样品中所含的细菌数 4 计算公式每毫升原液所含细菌数 每小格平均细菌数X400X10000X稀释倍数 5 缺点 不能区分死菌与活菌 3过滤膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例 将已知体积的水过滤后 将滤膜放在伊红美蓝培养液基上培养 在该培养基上 大肠杆菌的菌落呈现黑色 可以根据培养基上黑色菌落的数目 计算出水样中大肠杆菌的数量 思考题 1 想一想 如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数 答 统计某一稀释度下平板上的菌落数 最好能统计3个平板 计算出平板菌落数的平均值 然后按课本旁栏的公式进行计算 A同学的结果与其他同学不同 可能的解释有两种 一是由于土样不同 二是由于培养基污染或操作失误 三 设置对照 究竟是哪个原因 可以通过实验来证明 另一种方案 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养 作为空白对照 以证明培养基是否受到污染 通过这个事例可以看出 实验结果要有说服力 对照的设置是必不可少的 实验方案有两种 一种方案 可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验 如果结果与A同学一致 则证明A无误 如果结果不同 则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题 四 实验案例