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文档简介

1 DNA的基本组成单位 脱氧核苷酸 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺嘌呤脱氧核苷酸 胞嘧啶脱氧核苷酸 胸腺嘧啶脱氧核苷酸 2 脱氧核苷酸的种类 知识重温 DNA分子的结构 平面结构 立体结构 磷酸二酯键 3 DNA分子的结构 12 限制酶的识别序列有何特点 限制酶识别序列的特点 中轴线两侧的DNA上碱基呈反向对称 重复排列如 GAATTCCCCGGGCTTAAGGGGCCC 中轴线 1 EcoR 大肠杆菌的一种限制酶 能识别GAATTC序列 并切割G和A之间的磷酸二酯键 2 Sma 能识别CCCGGG序列 并切割C和G之间的磷酸二酯键 常用的两种限制酶 EcoR 黏性末端 黏性末端 什么叫黏性末端 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时 被限制酶切开的DNA的末端带有几个伸出的核苷酸 他们之间正好互补配对 这样的末端叫黏性末端 Sma 平末端平末端 什么叫平末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时 切开的DNA的末端是平整的 这样的末端叫平末端 平末端平末端 可把黏性末端之间的缝隙 缝合 起来 E coliDNA连接酶或T4DNA连接酶 T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙 缝合 起来 但效率较低 氢键 DNA聚合酶的作用 把单个脱氧核苷酸连接到DNA片段末端 DNA连接酶的作用 将两个双链DNA片段连接起来 1 载体需要的条件 有1 多个限制酶切点 便于外源基因的插入 对受体细胞无害 导入基因能在受体细胞中复制 表达 有某些标记基因 便于筛选 作为分子运输车 载体 如果没有切割位点将会怎样 霍乱菌的质粒多个限制酶切点 你会用它来做分子运输车吗 假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录 转基因生物能有预想的效果吗 目的基因有没有进入受体细胞 如何去发现 三 分子运输车 基因进入受体细胞的载体 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 标记基因将来可用含青霉素的培养基鉴别 2 基因工程中常用的载体 质粒 质粒是一种裸露的 结构简单独立于细菌拟核之外 具有自我复制能力的双链环状DNA分子 在进行基因工程操作中 真正被用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的 质粒 噬菌体的衍生物 某些动植物病毒等 2 基因工程中常用的载体 一 基因工程的概念 二 DNA重组技术的基本工具 1 限制性核酸内切酶 分子手术刀 2 DNA连接酶 分子缝合针 3 基因进
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