动物生理学实验教学

动物生理学实验教学课件,目录 INDEX,EXP1.肠系膜血流显微观察EXP2.坐骨神经-腓肠肌标本制备EXP3.红细胞的凝集与ABO血型鉴定EXP4.动脉血压的间接测定EXP5.红细胞渗透脆性的测定EXP6.红细胞比容测定EXP7.红细胞沉降率测定EXP8.人体心电图的描记,肠系膜血流显微观察,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,P114,目的要求,观察蛙肠系膜血管内血液的流动，了解外周血管的血流特点及其影响因素,基本原理,肠系膜薄而透明，可观察血流情况及神经递质对内脏血管舒缩的作用。 动脉血管内血液由主干流向分支；静脉血管内血液由分支流向主干；毛细血管内血细胞往往单排流动。,仪器材料,蛙蛙类手术器械、显微镜、任氏液、0.01%去甲肾上腺素溶液。0.01%组胺溶液、 蛙板、蛙钉。,方法步骤,1、实验准备：损毁蟾蜍的脑、脊髓,先背位固定，剪开腹腔，找到肠系膜。,然后腹位固定四肢；拉出肠系膜，用大头针将肠系膜固定在蛙板孔上。,2、实验观察项目,（1）低倍镜下，识别动脉、静脉、毛细血管及管内血液流动特点（血管壁、血管口径、血细胞形态、血流方向和流速）。（2）机械刺激的影响（血管口径和流速的变化）。（3）肾上腺素、组织胺的影响。实验报告描绘观察到的现象并加以分析。,注意事项,1、固定肠系膜避免撕裂；2、大头针斜插固定，以免遮挡物镜；3、注意不要污染显微镜。4、实验过程加少许任氏液，防止标本干燥。5、手术操作仔细，避免出血造成视野模糊。,思考题,1、根据观察结果，归纳交感神经及其递质对内脏血管活动的作用。2、如何判断动脉血管和静脉血管？3、微循环是如何调节的？,坐骨神经-腓肠肌标本制备,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,目的要求,学习并掌握两栖类神经-肌肉标本的制备方法；观察肌肉的收缩现象。,基本原理,两栖类神经肌肉标本体外保持活性的条件相对简单，操作容易，其兴奋、收缩特性与哺乳动物的类似。 神经组织受到刺激时，能产生可传导的动物电位。该电位可引起神经-肌肉标本的肌肉收缩。,仪器材料,蟾蜍。蛙毁脊针、蛙类手术器械、玻璃分针、锌铜弓、任氏液、滴管、细线等。,方法步骤,1、损毁脑脊髓。2、在两前肢附近剪断脊柱，去掉内脏，剥离皮肤，制备双后肢标本。,3、从正中间剪开后肢。4、分离坐骨神经。5、分离腓肠肌。6、活性检验。,用线结扎8cm左右,实验报告描述所制备的蛙坐骨神经-腓肠肌标本，标注出各组成部分；观察、描述并分析肌肉二次收缩、损伤电位和心肌的生物电现象。,注意事项,1、剪刀的用法：粗剪刀用于剪骨骼、皮肤等，大剪刀用于剪肌肉、眼科剪用于剪神经、血管等纤薄组织。2、神经组织避免牵拉及金属器械夹持，一定要用玻璃分针。3、制备过程中用任氏液保持神经肌肉的湿润。4、标本受皮肤分泌物和血液等污染时，不能用清水冲洗。,思考题,1、兴奋是如何从神经传递到肌肉的？2、用锌铜弓刺激神经时，为何会引起肌肉收缩？3、神经兴奋与肌肉收缩如何保证是一对一的关系？,红细胞的凝集与ABO血型鉴定,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,目的要求,观察红细胞的凝集现象。学习血型鉴定的基本原理，掌握利用标准血清进行人类ABO血型鉴定的方法。,基本原理,血型是根据红细胞细胞膜上抗原（凝集原）的种类而将血液分成的类型。红细胞膜上只含有A型凝集原、血清中含有抗B凝集素的为A型血，红细胞膜上只有B型凝集原、血清中只有抗A凝集素的为B型血，红细胞膜上具有AB两种凝集原、血清中没有凝集素的为AB型血，红细胞膜上没有AB凝集原、血清中具有抗A和抗B两种凝集素的为O型血。当相应的凝集原、凝集素相互作用时，就产生红细胞的凝集。可依此用标准血清判定被测定人红细胞上凝集原的类型，即血型。,仪器材料,人。双凹载玻片、一次性采血针、牙签、酒精棉球、干棉球、标准血清、显微镜。,方法步骤,1、取一干燥清洁双凹载玻片，在左、右上角标好“”、“”字样，分别滴入抗(即型)、抗(即型)标准血清1滴。2、人指尖或耳垂、采血针消毒，待酒精挥发后采血。挤出第一滴血用干棉球擦去，再挤出一滴血液，用牙签刮下，与标准血清混合均匀；再挤出一滴血，用牙签另一端刮下，与另一侧的标准抗血清混合均匀，室温下静置几分钟，观察。,3、观察判定：如果红细胞聚集成团，虽经振荡或轻轻搅动亦不散开，为“凝集”现象；红细胞散在均匀分布或虽似成团，一经振荡即散开，则为未凝集或“假凝集”。必要时可在显微镜下观察。按下图判定血型。,左侧：A型标准血清（含抗B凝集素）右侧：B型标准血清（含抗A凝集素）,注意事项,一次性采血针一定要专人专用。牙签两端不可混用。采血后要迅速与标准血清摇匀，防止血液凝固。,思考题,如果没有标准血清，仅知道1人的血型为A型或B型，请你设计无标准血清情况下测知全班同学血型的实验方案。,动脉血压的间接测定,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,目的要求,1、学习并掌握人体间接测压法的原理和方法。2、观察在正常情况下，某些因素对动脉血压的影响。,基本原理,仪器材料,血压计、听诊器,方法步骤,1、正常血压的测定（1）受试者脱左臂衣袖，静坐 5min。（2）松开打气球上的螺丝，将压脉带内的空气放出，再将螺丝扭紧。（3) 将压脉带裹于左上臂，其下缘应在肘关节上约 3cm 处，松紧应适宜,位置应与心脏同一水平。 (4) 在肘窝部找到动脉搏动处，左手持听诊器的胸具置于其上。注意：不可用力下压。,（5） 将听诊器两耳器塞入外耳道，使耳器的弯曲方向与耳道一致（向前）。（6）听取血管音变化，右手持打气球，向压脉带打气加压，此时注意倾听声音变化，在声音消失后再加压 30mmHg，然后扭开打气球之螺丝，缓慢放气（切勿过快），此时可听到血管音的一系列变化，声音从无到有，由低而高，而后突然变低，最后完全消失。然后扭紧打气球螺丝继续打气加压，反复听取声音变化 23 次。记录血压数值。,2、运动对血压的影响 受试者作原地蹲起运动，1min 内完成 30 次，共做 2min。运动后立即坐下，30s 测量血压一次，直至血压恢复正常。精确记录每次测量血压的时间，画出血压恢复过程与时间的函数关系曲线。,注意事项,1、保持室内安静，以利听诊。在听诊过程中，压脉带充气或放气不宜过快或过慢。2、戴听诊器时，务使耳具的弯曲方向与外耳道一致，即接耳的弯曲端向前。3、重复测压时，须将压脉带内空气放尽，使压力降至零位，而后再加压测量。测压前嘱受试者休息10分钟。,思考题,1、心动周期中血管的平均压与舒张压和收缩压的关系。2、测定血压时为什么要与心脏基本保持水平？3、高血压与低血压分别反映了心血管什么方面的问题？,红细胞渗透脆性的测定,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,目的要求,学习测定红细胞渗透脆性的方法。加深对细胞外液渗透张力在维持红细胞正常形态与功能重要性方面的理解。,基本原理,正常情况下，红细胞的渗透压与血浆的渗透压相等。若将红细胞置于高渗溶液中，则红细胞将因失去细胞内的液体而皱缩；反之，若置于低渗溶液中，则水分进入细胞内，使红细胞膨胀，甚至胀破溶解，释放血红蛋白，形成溶血。测定红细胞渗透脆性即测定红细胞对低于0.9%NaCl溶液的抵抗力。抵抗力高，则红细胞不易破裂，脆性低；反之，抵抗力低，则红细胞易于破裂，脆性高。,基本原理,将红细胞悬浮于等渗NaCl液中，其形态不变。若置于低渗NaCl溶液中则发生膨胀破裂，此现象称为红细胞渗透脆性。但红细胞对低渗盐溶液具有一定抵抗力，其大小可用NaCl溶液浓度的高低来表示。将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中，开始出现溶血现象的NaCl溶液浓度为该血液红细胞的最小抵抗力。出现完全溶血现象时的NaCl溶液浓度为该红细胞的最大抵抗力。前者代表红细胞的最大脆性(最小抵抗力)，后者代表红细胞最小脆性(最大抵抗力)。,仪器材料,鱼试管架、小试管13支、滴管、移液管 、注射器1%NaCl溶液、0.85%氯化钠溶液、蒸馏水，1.9%尿素溶液，1%肝素。,方法步骤,1配制不同浓度的低渗NaCl溶液：取口径相同的干燥洁净小试管10支，分别编号排列在试管架上，配制出10种不同浓度的NaCl低渗溶液（0.25%，0.3%，0.35%，0.4%，0.45%，0.5%，0.55%，0.6%，0.65%，0.7%）。每个试管总量均为2ml。另取3支小试管，在三支试管上分别编号11-13，分别加入0.85%NaCl溶液、1.9%尿素和蒸溜水2ml，与前面10支试管量一致。,（配制方法见实验课本P102）,2.制备抗凝血：用心脏取血法取2ml血液放入含有肝素的试管内，混匀。1%肝素1ml可抗凝血10ml。3.加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，依次向13支试管内各加1滴，轻轻颠倒混均，切忌用力振荡。先观察11、12、13管的变化，其他10支试管在室温下放置1小时。,2、实验观察项目,4观察项目(1) 观察不同浓度低渗NaCl混合液的颜色和透明度。记录红细胞脆性范围。(2) 比较第11、12、13管的溶血情况并分析其原因。(3) 描述实验结果，分析红细胞渗透脆性与红细胞膜对低渗透压抵抗力的关系。,注意事项,1每支试管内血液滴入量应准确无误(只加一滴)。2确保每支试管NaCl溶液的浓度准确、容量相等。3试管必须清洁、干燥。4混匀时，轻轻颠倒1-2次，减少机械振动，避免人为溶血5. 观察结果时应以白色为背景。6.滴加血液时要靠近液面。,思考题,1、输液时为什么要用等渗溶液？2、红细胞渗透脆性的大小说明了什么？,红细胞比容测定,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,目的要求,学习红细胞比容测定的方法。,基本原理,将抗凝血放在有刻度的玻璃管（温氏分血管）中，经过离心沉淀，使血细胞与血浆分离。红细胞下沉，彼此压紧而又不改变每个血细胞的正常形态。根据玻璃管刻度的读数，测出红细胞占全血的容积百分比即细细胞比容。此时管中的血液分为三层：上层为淡黄药的透明液体即血浆；中层为很薄的一层呈灰白色的白细胞和血小板；下层为挤压很紧的暗红色的红细胞。,仪器材料,蟾蜍或鱼。温氏管、台氏离心机、注射器、试管、抗凝剂（双草酸盐溶液、柠檬酸钠）、酒精和棉球。,方法步骤,1.草酸盐抗凝剂的酸制：草酸钾0.8克，草酸铵1.2克，甲醛1.0ml，再加蒸馏水至100毫升。每1毫升血液可用0.1豪升上述溶液。吸取混合草酸盐抗凝剂溶液，置于小试管内，并使该抗凝剂均匀分布于小试管内壁上，60-80烘干备用。,2.采血：将血液缓缓注射于有抗凝剂的试管中，用拇指堵住管口，倒转试管两、三次（慢），使血液与抗凝剂充分混合。,3.离心：用长颈滴管吸取试管内的抗凝血，将滴管插入温氏分管的底部，沿管壁将抗凝血准确加到分血管刻度10厘米处。注意不要有汽泡。将温氏分血管配平后放入离心机中，3000转/分钟离心30分钟。4.读数。,实验安排,5%的柠檬酸钠水溶液，每毫升血液加5mg，即0.1毫升。,注意事项,选择不影响红细胞体积的抗凝剂。用抗凝剂处理的温氏管必须清洁干燥。用混匀血液与抗凝剂及注血时应避免红细胞破裂溶血，若有溶血发生，则血浆成红色。,思考题,1、影响比容测定的因素？2、如何防止溶血和产生气泡？3、测定血细胞比容有何实际意义？,红细胞沉降率测定,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,目的要求,了解红细胞沉降率并掌握其测定方法。,基本原理,将加有抗凝剂的血液置于一特制的具有刻度的血沉管内，置于血沉架上，红细胞因重力作用而逐渐下沉，上层留下一层黄色透明的血浆。经一定时间（1h），沉降的红细胞上面的血浆柱的高度（mm），即表示红细胞的沉降率。血浆层越高，则血沉越快。动物有的疾病可以引起红细胞沉降率的显著加速，故测定红细胞沉降率具有临床诊断价值。,仪器材料,血沉管、血沉管架、试管、1ml移液管、注射器、抗凝剂（5%柠檬酸钠溶液）、酒精和棉球。,方法步骤,1.采血：5%的柠檬酸钠作为抗凝剂，抗凝剂与血液之间的容积比例为1：4。2.血沉管（清洁干燥）：吸血前要混匀抗凝血，加入血沉管的血不能带有气泡，血沉管垂直放置。,3.检查：15分钟，30分钟，1小时检查血沉管上部血浆的高度。,注意事项,抗凝剂与血液比例为1：4，在不破坏红细胞的前提下，充分摇匀。血沉管要垂直放置，不得有气泡。血沉快慢与温度密切相关。实验要在采因后2h内完成。,思考题,影响红细胞沉降率的因素有哪些？正常情况下，红细胞沉降率保持相对稳定的原因是什么？,人体心电图的描记,请务必认真学习本课件然后开始实验操作！,返回目录,目的要求,1学习心电图机的使用方法和心电图波形的测量方法。2了解人体正常心电图各波的波形及其生理意义。,基本原理,心脏在收缩之前，首先发生电位变化。心电变化由心脏的起搏点窦房结开始，经特殊传导系统最后到达心室肌，引起肌肉的收缩。心脏尤如一个悬浮于容积导体中的发电机，其综合性电位变化可通过容积导体传播到人体的表面，并为体表电极所接受。经心电图机的放大和记录，成为心电图。心电图可以反映心脏内综合性电位变化的发生、传导和消失过程，但不能说明心脏收缩活动的变化。,导联 心脏周围的组织和体液都能导电，因此可将人体看成为一个具有长、宽、厚三度空间的容积导体。心脏好比电源，无数心肌细胞动作电位变化的总和可以传导并反映到体表。在体表很多点之间存在着电位差，也有很多点彼此之间无电位差，是等电的。为了记录心电，将探测电极安置于体表相隔一定距离的两点，此两点即构成一个导联，两点的连线代表导联轴，具有方向性。,导联 将心电描记器的记录电极放在体表的任何两个非等电部位，都可记录出心电变化的图象，这种测量方法叫做双极导联，所测的电位变化是体表被测两点的电位变化的代数和，分析波形较为复杂。如果设法使两个测量电极之一，通常是和描记器负端相连的极，其电位始终保持零电位，就成为所谓的“无关电极”，而另一个测量电极则放在体表某一测量点，作为“探查电极”，这种测量方法叫做单极导联。由于无关电极经常保持零电位不变，故所测得的电位变化就只表示探查电极所在部位的电位变化，因而对波形的解释较为单纯。目前在临床检查心电图时，单极和双极导联都在使用。,标准肢体导联 属双极导联，只能描记两电极间的电位差。导联：左上肢与心电图机正极相连，右上肢与负极相连，所得电位是两上肢间的电位差。当左上肢电位高于右上肢时，所描记的波形向上；反之向下。导联：正极接左下肢，负极接右上肢。当左下肢电位高于右上肢时波形向上；反之向下 。导联：正极接左下肢，负极接左上肢。当左下肢电位高于左上肢时波形向上；反之向下,加压单极肢体导联 将探查电极放在标准导联的任一肢体上，而将其余二肢体上的引导电极分别与5000欧姆电阻串联在一起作为无关电极。这种导联记录出的心电图电压比单极肢体导联的电压增加50左右，故名加压单极肢体导联。根据探查电极放置的位置命名。 aVR导联：探查电极与右上肢相连，无干电极与左上肢及左下肢相连 ； aVL导联：探查电极与左上肢相连，无干电极与右上肢及左下肢相连； aVF导联：探查电极与左下肢相连，无干电极与左、右上肢相连 ；,心电图波形用标准导联引出的心电图各波，由荷兰生理学家W艾因特霍芬命名P，Q，R，S，T波，U波是以后发现命名的。,心电图波形P波：代表左、右心房除极的过程。 PR间期：代表自