阿尔新蓝染色

阿尔新蓝 阿尔新蓝 茜素红染色 1 阿尔新蓝染液 100 乙醇 80ml 冰醋酸 20ml alcian blue 8 GX 0 1g 充分混匀溶解后 37 静置过夜 2 无酸双染色剂 阿尔新蓝 茜素红 S A 液 alcian blue 8 GX 用于软骨染色 首先将阿尔新蓝粉末溶解到 50 的乙醇中 37 孵育并摇匀 溶解后再加入 95 乙醇是浓度达到 70 100ml A 液 5ml 0 4 阿尔新蓝 70ml 95 乙醇 5ml 1M MgCl2 20ml dH2O B 液 0 5 alizarin red S 0 5g alizarin red S 粉末溶解于 100ml 蒸馏水中 混合液中试剂终浓度 0 02 alcian blue 40 60 mM MgCl2 70 乙醇 在使用前 取 10ul 的 B 液和 1ml 的 A 液混合使用 现配现用 3 斑马鱼整体软骨 骨骼无酸双染色 取各处理组幼鱼 分装于 1 5 ml 离心管中 每管约 50 只幼鱼 1 幼鱼组织固定 麻醉幼鱼 使用 4 的中性甲醛缓冲液 由 PBS 配制 或使用 2 PFA 固定在 1 5ml 离心管中 室温振荡 10min 放置 2h 吸走固定液 并用 PBS 清洗 2 次 使用 50 乙醇脱水 2 染色 去除 50 乙醇 加入 1ml 阿尔新蓝 茜素红 S 染色液到离心管中 质问 轻微振荡过夜 3 漂白 漂白以去掉幼鱼表面色素 漂白液现配现用 由等量的 3 H2O2和 2 KOH 混合组成 终浓度为 1 5 H2O2和 1 KOH 溶液 染色管中 在 去掉染色液后 加入 1ml 水 倒置混合吸去液体 再新加入 1ml 漂白液 并将离心管盖打开 室温放置 20min 4 清理 去掉漂白液 加入 20 甘油 0 25KOH 室温振荡 30min 至 10h 边振荡边 观察胚胎清理状态 然后用 50 甘油 0 25 KOH 替换之前的清理液 并 再次室温振荡 2h 放置过夜 显微镜下观察 5 保存和统计拍照 染色后幼鱼可在 50 甘油 0 1 KOH 溶液中 4 长期保存备用 并在此 保存液中利用解剖镜和成像系统拍照 4 阿尔新蓝软骨染色 1 幼鱼组织固定 麻醉幼鱼 使用 1 5ml 离心管 固定在静置了两天的 4 PFA 溶液中 室 温过夜 2 阿尔新蓝染色 吸去 PFA 后 用 95 乙醇溶液洗胚胎 2 次 彻底吸干后 添加 1ml80 乙醇 20 冰醋酸配制的 0 1 的阿尔新蓝溶液 取上清染液 染色过夜 3 洗脱 用 60 乙醇 40 PBS 溶液冲洗胚胎 1 次后 换成 40 乙醇 60 PBS 再冲 洗 1 次 再更换成 20 乙醇 80 PBS 冲洗一次 最后用 PBS 缓冲液冲洗 2 次 4 清理 吸干 PBS 溶液后 使用溶解于饱和四硼酸钠溶液中的 0 05 trypsin 清理 胚胎 1 3h 5 漂白 吸去胚胎周围的清理液并用 PBS 冲洗 1 次 然后添加 1 KOH 3 H2O2 溶液侵泡 2 4 小时 打开离心管盖 30 左右静置 并观察胚胎的清理状 态 6 脱色 过 1 KOH 3 H2O2 甘油梯度溶液 现用 1 3 比例 再换成 1 1 最后 换成 3 1 1 KOH 3