辣椒红素的提取、分离及鉴定

辣椒红色素的提取 分离及鉴定辣椒红色素的提取 分离及鉴定 一 实验目的一 实验目的 1 了解从红辣椒中提取辣椒红素的原理和方法 2 进一步熟悉回流 抽滤 薄层层析 柱层析等基本操作 3 学习红外光谱鉴定有机化合物的方法 二 实验原理二 实验原理 红辣椒中含有辣椒红素 辣椒玉红素和 胡萝卜素等几种色泽鲜艳的色素 其中以辣 椒红素为主 这几种物质都是有 8 个异戊二烯单元组成的四萜类化合物 难溶于水和乙醇 易溶于石油醚 氯仿和二氯甲烷 其中极性较大的红色组分主要是辣椒红素和辣椒玉红素 占总量的 50 60 另一类是极性较小的黄色组分 主要成分是 胡萝卜素和玉米黄质 辣椒红素不仅色泽鲜艳 热稳定性好 而且耐光 耐热 耐酸碱 耐氧化 无毒副作 用 是高品质的天然色素 可用作食品的添加剂 也广泛用于化妆品 保健药品等行业 其结构式如下 在实验室中 常用二氯甲烷 沸点 39 75 作溶剂从红辣椒中提取辣椒红素 用二氯 甲烷提取的混合物可通过薄层层析和柱层析将它们分离 在薄层层析中 有三个斑点 Rf 值约为 0 6 的较大红色斑点为辣椒红素 Rf值稍大的较小红色斑点为辣椒玉红素 Rf值最 大的黄色斑点是 胡萝卜素 柱层析时 以硅胶为吸附剂 以二氯甲烷为洗脱剂 可对比 标准样品图谱较容易地将 3 种物质分开 红辣椒色素的薄层层析图 最后 用紫外光谱测样品的 max并用红外光谱仪做辣椒红素的红外光谱图 并将它与 标准谱图比较 便可证明所得到的主要物质是否为辣椒红素 辣椒红素的紫外可见吸收光谱图 辣椒红素的标准红外光谱图 三 实验仪器及试剂三 实验仪器及试剂 材料 材料 干红辣椒 或辣椒粉 仪器 仪器 研钵 25ml 锥形瓶 3 个 50ml 量筒 50ml 烧杯 2 个 50mL 圆底烧瓶 沸石 电热套 球形冷凝管 布氏漏斗 抽滤瓶 蒸馏装置 滤纸 玻璃板 毛细管 层析缸 层析柱红外光谱仪等 试剂 试剂 二氯甲烷 硅胶 G 硅胶 60 200 目 0 1mol L 乙酸钠 无水硫酸钠等 四 实验步骤四 实验步骤 1 实验材料前处理实验材料前处理 称取 5 00g 干红辣椒 去蒂 去籽后研磨成粉末 2 色素提取色素提取 在 50mL 圆底烧瓶中加入 3 00g 磨细的红辣椒粉和 25mL 二氯甲烷 沸点 39 75 加 沸石回流 30min 冷却至室温 抽滤 得到红色滤液 3 薄层分离薄层分离 1 制板 取 4 块玻璃板 洗净后用蒸馏水淋洗 再用少量乙醇淋洗 晾干 取 3 5g 硅胶 G 量取 0 1mol L 的乙酸钠溶液 10mL 于研钵中 研磨至无明显颗粒且由稀变稠为止 将硅胶倒在玻璃板上 使快速流动 最终在板上均匀铺平且无气泡 风干 置于烘箱中 110 活化 30min 2 点样 在薄层板一端据边缘约 1 5cm 处用铅笔轻轻画一条直线作为点样线 取少 量粗产品放入小试管中 加入 10 滴二氯甲烷溶解 用毛细管取此溶液在硅胶 G 板上点样 斑点直径不超过 2mm 3 展层 将薄层板放入盛有展层剂的层析缸中进行展层 当展开剂达到该板的指定 前沿时 取出层析板 用吹风机吹干或晾干 将该板与红辣椒色素的薄层色谱图比较 计 算辣椒红素的 Rf值 4 柱层分离柱层分离 1 装柱 将层析柱洗净干燥 固定在铁架台上 取 5g 吸附剂硅胶 60 200 目 用 适量洗脱剂二氯甲烷调成均匀糊状 关闭层析柱下方的活塞 先加入少量洗脱剂 再将硅 胶缓慢而连续地装填到柱中 同时将活塞打开在下面放一个干净的烧杯呈接洗脱剂 吸附 剂全部装完后在柱中加入洗脱液将柱内壁上残留的吸附剂淋洗下来 此过程中应不断敲打 色谱柱使色谱柱装填均匀没有气泡 继续流出洗脱剂 直至洗脱剂液面仅高于柱面 2mm 左右时 关闭活塞 2 上样 用长滴管加入已用二氯甲烷溶解好的粗色素 加完样后打开活塞 使液体 样品进入 再用洗脱剂将粘附在层析柱内壁上的样品溶液洗下来 待这部分样品也进入后 再次加入洗脱剂进行淋洗 3 洗脱 随着洗脱的进行 可以清晰地看到 3 个谱带 由下至上依次为 胡萝卜 素 辣椒玉红素和辣椒红素 分别用 3 个 25ml 锥形瓶收集流出液 其中第三个锥形瓶内 为辣椒红素 5 色素检验色素检验 1 最大吸收波长 max 取上述辣椒红素溶液 5 滴于一试管中 加入 5ml 正已烷 并以正已烷为空白对其进行紫外扫描 找出 max 正己烷对照下 辣椒红素 max 470nm 2 红外光谱图 取上述辣椒红素溶液少量 在红外光谱仪上做红外光谱图 并将谱 图