实验 啤酒中α-氨基酸的测定

实验实验 啤酒中啤酒中 氨基酸的测定氨基酸的测定 一一 实实验验目目的的 学习 氨基氮含量的测定方法 控制麦汁或啤酒质量 二二 实实验验原原理理 氨基氮为 氨基酸分子上的氨基氮 水合茚三酮是一种 氧化剂 可使氨基酸脱羧氧化 而本身被还原成还原型水合茚三酮 还原型水合茚三酮再与末还原的水合茚三酮及氨反应 生成蓝紫色缩 合物 颜色深浅与游离 氨基氮含量成正比 可在 570nm 下比色 测定 三三 实实验验器器材材与与试试剂剂 分光光度计 电炉等 1 显色剂 称取 10g Na2HPO4 12H2O 6g KH2PO4 0 5g 水 合茚三酮 0 3g 果糖 用水溶解并定容至 100mL pH 6 6 6 8 棕 色瓶低温保存 可用两周 2 碘酸钾稀释液 溶 0 2g 碘酸钾于 60mL 水中 加 40mL 95 乙醇 3 标准甘氨酸贮备溶液 准确称取 0 1072g 甘氨酸 用水溶解 并定容至 100 mL 0 保存 用时 100 倍稀释 四四 实实验验步步骤骤 1 样品稀释 适当稀释样品至含 1 3 g 氨基氮 mL 麦汁 一般稀释 100 倍 啤酒 50 倍 啤酒应先除气 2 测定 取 9 支 10mL 比色管 其中 3 支吸入 2mL 甘氨酸标准 溶液 另 3 支各吸入 2mL 试样稀释液 剩下 3 支吸入 2mL 蒸馏水 然后各加显色剂 1 mL 盖玻塞 摇匀 在沸水浴中加热 l 6 分钟 取出 在 20 冷水中冷却 20 分钟 分别加 5mL 碘酸钾稀释液 摇 匀 在 30 分钟内 以水样管为空白 在 570nm 波长下测各管的光密 度 计计算算 氨基氮含量 g mL 样品管平均 O D 标准管平均 O D 2 稀释倍数 说说明明 式中 样品管平均 O D 标准管平均 O D 表示样品管与标准管 之间的 氨基氮之比 2 标准管的 氨基氮浓度 g mL 即 0 1072 14 75 100 五五 注注意意事事项项 1 必须严防任何外界痕量氨基酸的引入 所用比色管必须仔细 洗涤 洗净后的手只能接触管壁外部 移液管不可用嘴吸 2 测定时加入果糖作为还原性发色剂 碘酸钾稀释液的作用是 使茚三酮保持氧化态 以阻止进一步发生不希望的生色反应 3 深色麦汁或深色啤酒应对吸光度作校正 取 2mL 样品稀释 液 加 1mL 蒸馏水和 5mL 碘酸钾稀释液在 570n m 波长下以空白做 对照测吸光度 将此值从测定样品吸光度中减去 六六 思思考考题题 1 啤酒色泽是否会对结果产生影响 附附 分光光度计的使用 现以 SP 2000UV 紫外可见分光光度计为 例介绍使用方法 a 接通电源 预热 20 分钟 使仪器进入热稳定状态 仪器开 始自检 b 自检结束后 仪器自动停留在 546nm 处 并自动调 100 T 和 0 T 当仪器显示 546 100 T 即进入测试状态 c 按方式键 MODE 将测试方式设定为吸光度方式 仪器 显示 XXXnm X XXXAbs d 按波长设置键至所需要波长 如 570nm e 将参比溶液和被测溶液分别倒入比色杯中 插入比色槽中 盖上样品室盖 f 将参比溶液推入光路