葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度.pptx

生物化学与分子生物学专业XXX邮箱 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度 1 掌握血糖测定原理 计算方法 参考正常值 临床意义 2 了解尿糖的测定及意义 1 收集耳缘静脉血 制备血浆 葡萄糖氧化法比色测定血糖浓度 2 收集尿液 班氏法测定 一 实验要求 二 实验内容 血糖 bloodglucose BG 指血浆 清 中的糖类物质 主要为葡萄糖 一 血糖的来源 食物 糖原的分解 糖异生 二 血糖的去路 有氧氧化 转换成非糖物质 尿排出 糖酵解 血糖 正常血糖浓度 3 9 6 1mmol L 成年人空腹 低血糖 低于2 8mmol L高血糖 超过7 8mmol L2 低血糖的因素 胰岛素 磺脲类药 饮酒 严重饥饿高血糖的因素 进食 情绪紧张时 糖尿病 3 糖尿病的诊断和治疗监视 新生儿低血糖症等 肾上腺素由肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺激素 肾上腺素升高血糖机制 在应激状态 内脏神经刺激和低血糖等情况下 肾上腺素被释放入血液循环 促进糖原分解并升高血糖 促进脂肪分解 促进非糖物质向血糖的转化 使血糖浓度增大 肾上腺素adrenaline epinephrine 一 血糖测定 福林 酚试剂法 葡萄糖氧化酶法 邻甲苯胺法 葡萄糖氧化酶法原理 葡萄糖 O2 H2O 葡萄糖酸 H2O2 葡萄糖氧化酶 GOD 氧化 37oC H2O2 苯酚 4 氨基安替吡啉 H2O 红色醌亚胺 O2 37oC辣根过氧化物酶 POD Trinder反应 溶液在505nm下有吸收峰 可用比色法测定 得出葡萄糖的浓度 标准浓度法 A标 KC标LA样 KC样L C样 A样 A标 C标 试剂 酶酚混合试剂 PH7 0 5mmol L葡萄糖标准应用液班氏试剂 器材 试管 试管架 吸量管 移液枪 恒温水浴 722型分光光度计 实验前准备 标本 1 血浆应在血液采集1小时内尽早分离 具体操作 1 称重 2 取血 找到耳缘静脉 二甲苯擦拭 涂薄层凡士林 有何作用 用三棱针刺破耳缘静脉放血 自然血流 将血液收集于草酸钠抗凝管内 边接边摇 以防凝固 取约5ml 离心 2000rpm 10min 取上清 编号 3 注射激素后再取血 皮下注射肾上腺素 0 4mg kg体重 记录在注射时间 30min后取血5ml于抗凝管内 离心 2000rpm 10min 取上清 编号 4 取4支试管 按下表加入试剂 将各管充分混匀 37 水浴中保温15min 取出冷却至室温后 505nm处比色 以空白管调零 读取标准管及测定管光密度值 计算 测定管葡萄糖含量 mmol L 测定管光密度标准管光密度 5 1 注射前后的血糖浓度 2 注射后血糖浓度增高率 A肾 A正 A正 100 增高率 结果记录 尿糖是指尿中的糖类 主要是指尿中的葡萄糖 正常情况下 肾小管能将肾小球滤过的葡萄糖全部重吸收回血液 当血糖 肾糖阈8 96 10 08mmol L 超过肾小管的重吸收能力 部分葡萄糖随尿排出 尿糖的测定虽然不能单纯作为糖尿病的诊断标准 但是从某种层面上也能反映一些问题 血浆 尿糖 尿糖 动脉血 血细胞 大分子蛋白质等 部分水 无机盐 葡萄糖 维生素 尿素等 重吸收 近端小管 二 二 1 班氏定性试验 2 葡萄糖氧化酶试纸法 干化学法 反应原理同血糖葡萄糖氧化酶法 尿糖测定 班氏定性试验原理 利用葡萄糖或其它还原性物质在碱性高温环境中 将反应液中Cu2 还原为亚铜离子Cu 形成黄色的氢氧化亚铜或红色的氧化亚铜 根据显色的程度 可对尿葡萄糖作定性及半定量检测 CHOH n CHO CH2OH 2Cu2 4OH COOH CHOH n CH2OH 2CuOH H2O 2CuOH H2O Cu2O 醛糖 醛糖酸 黄色或红色 操作步骤 20滴班氏剂 A尿液2滴B尿液2滴 煮沸5min 煮沸5min 注意事项 操作到位 取量要准确 吸量管不能混用 血清分离后要及时的测定以免影响实验结果 试剂中含叠氮钠 0 95g L 为防腐剂 不可入口 避免接触皮肤及粘膜 应采取必要的预防措施使用试剂 结果分析 三 测定的血糖浓度异常 反应不彻底引起的 偏低 葡萄糖标准溶液浓度有问题 偏高或偏低 移液器引起的 偏高或偏低 一 结果可报告范围 本法对葡萄糖的检测范围为0 06 22 2mmol L 当样品测定值超过上限时 应将样品用9g L氯化钠溶液作1 4稀释 重新测定 结果乘以5 二 当样品中抗坏血酸浓度 852 mol L 胆红素浓度 684 mol L 血红蛋白浓度 2 00g L 甘油三酯浓度 22 6mmol L时没有观察到干扰 本法测定葡萄糖非常特异 从原理反应式中可知第一步是特异反应 第二步特异性较差 误差往往发生在反应的第二步 一些还原性物质如尿酸 维生素C 胆红素和谷胱甘肽等 可与色原性物质竞争过氧化氢 从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢 产生竞争性抑制 使测定结果偏低 1 葡萄糖 O2 H2O 葡萄糖酸 H2O2 2 H2O2 4 氨基安替吡啉 苯酚 H2O 红色醌式物质 过氧化物酶 POD Trinder反应 讨论 思考题 1 为什么要在饥饿条件下采血 血糖主要来源是食物 进食会增高血糖浓度 2 除糖尿病外 若血糖浓度测定结果不正常可考虑哪些原因 注射