就是先做一个菌液浓度与OD值的标准曲线

就是先做一个菌液浓度与 OD 值的标准曲线 以后测 OD 值的话 直接根据标准曲线就知 道菌液浓度了 波长的确定 可以拿你的菌液扫个谱 找出吸收峰 一般细菌 600nm 但 也不一定 菌液浓度可以取一定体积的菌液 离心收集菌体 测菌体干重 或者涂板计数 也可以用 血球计数板计数 不提倡用 如果测细菌 简单说来 在细菌培养 24 小时内 每 4 小时或者其他时间取样品 用 LB 平板测定活细菌数量 同时测定培养液的 OD 值 等细菌长出后 根基细 菌数量和相应 OD 知理论上就可以做成标准直线了 在以后的试验中 你可以据 此 直接得出细菌数 通过 OD 直线 但不是所以的微生物都有这种对应关系 原理 比浊法测菌体浓度 在菌体浓度小时 菌体量 g L 与光密度 OD 值成正比 用得最多的就是 505nm 测菌丝菌体 560nm 测酵母 600nm 测细菌 具体的 g L 和 OD 之间好像没有具体的数量对应关系 这个恐怕要凭感觉 1 测 OD600 以你所用的培养基为对照 取 1 毫升菌液稀释一下 取三组连续的剃度测 2 稀释涂平 板法 取出 1 毫升菌液稀释一下 取三到五组连续的剃度 涂到相应的固体培养基上 12 小时后数 菌落数 1 使用 OD600 表示 则可以使用比浊法 使用分光光度计 波长 600nm 参比可以是水也可以是无菌 培养基 2 使用称量法 10000rpm 离心 1min in EP 中 取 1ml 菌液 弃尽上清 称菌湿重 烘干后则称 干重 单位是 mg ml 3 使用细菌计数板 显微镜镜检菌数 单位是个 ml 1 测 OD600 每种菌的 OD 值不一样吧 可以用紫外分光仪全波段扫描一下你的菌的吸收峰 只用 600 是 不是不太稳妥 2 最快的方法是 先做剃度稀释 再用细菌计数板显微镜 这是最快的方法 3 最传统的方法是剃度稀释涂平板法 这个周期较长 24 小时 PS 如果你的要测的较多 又没有细菌计数板的话 我教你个节省培养基 较准确的方法 做剃度稀释后 用 微量加样器吸取 20 微升滴在平板上倾斜平板让它自然流成一条线 也可以直接用加样器拉一直线 每 个平板可以做 3 个样品 注意不要互相污染 也可以分离到单个菌落计数 你可以取一定体积的大肠杆菌培养液经过离心后经过几次洗涤后在离心 然后在将离心后 的菌体放入一个称至恒重的称量瓶经过干燥后称至恒重即可大肠杆菌的菌体干重 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来 然后烘干 干燥温度可采用 105 100 或 80 称重 一般干重为湿重的 10 20 而一个细菌细胞一般重约 10 12 10 13g 该法适合菌浓较高的样品 举例 大肠杆菌一个细胞一般重约 10 12 10 13g 液体培养物中细胞浓度达到 2 109 个 ml 时 100ml 培养物可得 10 90mg 干重的细胞 研究对象的确定研究对象的确定 常以微生物的群体为研究单位来研究常以微生物的群体为研究单位来研究微生物的生长微生物的生长 微生物的生长微生物的生长通常指细胞数目的增加 或细胞总重量的增加通常指细胞数目的增加 或细胞总重量的增加 研究方法研究方法 以细菌为例以细菌为例 细菌群体生长情况的测定方法 细菌群体生长情况的测定方法 1 1 测细菌的细胞数目测细菌的细胞数目 2 2 测细菌的细胞总重量测细菌的细胞总重量 干重或湿重 干重或湿重 一 测生长量一 测生长量 1 1 直接法 测湿重 体积 沉降量 或干重 直接法 测湿重 体积 沉降量 或干重 2 2 间接法 间接法 1 1 比浊法比浊法 测菌悬液稀释液的透光值 测菌悬液稀释液的透光值 ODOD 值 值 2 2 间接成分测定 测含氮量 测间接成分测定 测含氮量 测 C C 或或 P P 量 测遗传物质量 量 测遗传物质量 DNADNA RNARNA 3 3 生理指标法 呼吸强度 耗氧 酶活性 生物热等 生理指标法 呼吸强度 耗氧 酶活性 生物热等 二 计数法二 计数法 1 1 直接计数 直接计数 1 1 计死活总菌数 显微镜下计数计死活总菌数 显微镜下计数 2 2 死活菌分别计数 酵母 美蓝染色 活细胞无色 死细胞蓝色死活菌分别计数 酵母 美蓝染色 活细胞无色 死细胞蓝色 细菌 细菌 丫啶橙染色 活细胞有橙色荧光 死细胞发绿色荧光 丫啶橙染色 活细胞有橙色荧光 死细胞发绿色荧光 2 2 间接计数法 间接计数法 是一种活菌计数法是一种活菌计数法 1 1 平板菌落计数 好氧菌 厌氧菌均可平板菌落计数 好氧菌 厌氧菌均可 实验 实验 菌样稀释菌样稀释 与培养基混匀浇注平板与培养基混匀浇注平板 倒置培养倒置培养 统计菌落形统计菌落形 成单位成单位 cfu cfu 乘以稀释倍数乘以稀释倍数 菌样含菌数菌样含菌数 用活菌指示剂用活菌指示剂 TTC 2 3 5 TTC 2 3 5 氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四氮唑 可使菌落在短时间内形成玫瑰红可使菌落在短时间内形成玫瑰红 色色 快速鉴定快速鉴定 2 2 膜滤器法膜滤器法 二二微生物的生长微生物的生长规律规律 一 微生物的个体生长与同步生长 一 微生物的个体生长与同步生长 1 1 个体生长 一个微生物从小到大的生长 个体生长 一个微生物从小到大的生长过程过程 2 2 同步生长 某一群体中所有个体细胞尽可能都处于分裂步调一致的生长状态 同步生长 某一群体中所有个体细胞尽可能都处于分裂步调一致的生长状态 二 单细胞微生物的典型生长曲线 见下 二 单细胞微生物的典型生长曲线 见下 定量描述液体培养基中定量描述液体培养基中 M M 群体群体 生长规律的实验曲线称为生长曲线 生长规律的实验曲线称为生长曲线 M M 典型生长曲线典型生长曲线 4 4 个阶段 个阶段 1 1 延滞期 指细胞数目没有增加 延滞期 指细胞数目没有增加 1 1 延滞期的特点 延滞期的特点 5 5 点点 2 2 影响延滞期的因素 种龄 接种量 培养基成分 培养条件等 影响延滞期的因素 种龄 接种量 培养基成分 培养条件等 2 2 对数期 细胞数目以几何级数增长的时期 对数期 细胞数目以几何级数增长的时期 1 1 对数期的特点 对数期的特点 3 3 点点 2 2 描述对数期生长的几个参数描述对数期生长的几个参数 繁殖代数 繁殖代数 n n lgxlgx2 2 C C lgxlgx1 1 lg2lg2 3 322 lgx3 322 lgx2 2 Clgx Clgx1 1 生长速率常生长速率常 数 数 R R n n t t2 2 C C t t1 1 代时 代时 G G 1 1 R R t t2 2 C C t t1 1 n n 3 3 影响指数期微生物代时的因素 影响指数期微生物代时的因素 i i 菌种菌种 iiii 营养成分营养成分 iiiiii 营营 养物浓度 养物浓度 iviv 培养温度培养温度 3 3 稳定期 新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等 稳定期 新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等 1 1 稳定期到来的原因稳定期到来的原因 4 4 点点 2 2 稳定期的特点 稳定期的特点 3 3 点点 3 3 稳定期的重要性 稳定期的重要性 3 3 点点 4 4 衰亡期 微生物个体死亡速度超过新生速度 衰亡期 微生物个体死亡速度超过新生速度 1 1 衰亡期特征 衰亡期特征 2 2 衰亡期出现的原因 衰亡期出现的原因 微生物生长曲线的实践意义微生物生长曲线的实践意义 1 1 处于对数期的细菌 生长繁殖速率快 代谢旺盛 生产上常用这个时期的细处于对数期的细菌 生长繁殖速率快 代谢旺盛 生产上常用这个时期的细 菌作为菌种 以缩短生产周期 菌作为菌种 以缩短生产周期 2 2 进入稳定期后 抗生素等代谢产物逐渐增多如果适当补充营养物质 就有助进入稳定期后 抗生素等代谢产物逐渐增多如果适当补充营养物质 就有助 于延长稳定期 提高代谢产物的产量于延长稳定期 提高代谢产物的产量 三 微生物的连续培养 三 微生物的连续培养 1 1 概念 概念 单批培养 按生长曲线描述的方式培养的方法 单批培养 按生长曲线描述的方式培养的方法 连续培养 将新鲜培养基连续加入均匀搅拌的培养物中 保持细胞浓度 比连续培养 将新鲜培养基连续加入均匀搅拌的培养物中 保持细胞浓度 比 生长速率 培养环境不随时间变化 维持稳定状态的培养生长速率 培养环境不随时间变化 维持稳定状态的培养过程过程 2 2 连续培养方法 恒化器法 恒浊器法 连续培养方法 恒化器法 恒浊器法 三三 影响微生物生长的环境因素影响微生物生长的环境因素 1 1 温度 温度 微生物生长最旺盛时的温度叫最适生长温度微生物生长最旺盛时的温度叫最适生长温度 在最适生长温度范围内 在最适生长温度范围内 微生物的生长微生物的生长速率随温度的上升而加快速率随温度的上升而加快 超过最适生长温度以后 超过最适生长温度以后 微生物的生微生物的生 长长速率会急剧下降速率会急剧下降 2 pHpH 每种微生物的最适每种微生物的最适 pHpH 不同 多数细菌 不同 多数细菌 6 56 5 7 57 5 真菌 真菌 5 05 0 6 06 0 放线菌 放线菌 7 5 8 57 5 8 5 超过最适超过最适 pHpH 范围以后 影响酶的活性 细胞膜的稳定性等范围以后 影响酶的活性 细胞膜的稳定性等 3 3 氧气氧气 按照微生物与氧的关系 可分为 按照微生物与氧的关系 可分为 专性好氧菌 氧分压专性好氧菌 氧分压 0 2Pa 10ppm 0 2Pa 10ppm 呼吸产能呼吸产能 兼性厌氧菌 有氧无氧均可生长 有氧呼吸产能 兼性厌氧菌 有氧无氧均可生长 有氧呼吸产能 无氧发酵或无氧呼吸