标准菌株使用标准操作规程

1 6 标准菌株使用标准操作规程标准菌株使用标准操作规程 1 1 检验目的检验目的 对实验室的标准菌株进行合理的保存 并规范合理的使用流程 保证菌株的性能稳定可靠 2 2 范围范围 微生物实验室保存的标准菌株 3 3 职责职责 微生物组工作人员正确执行本操作规程 4 4 术语和定义术语和定义 4 14 1 标准菌株标准菌株 其特征进行了分类和描述 有明确的来源 ATCC American Type Culture Collection 美国标准菌 株收藏中心 4 24 2 标准储备菌株标准储备菌株 标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株 4 34 3 工作菌株工作菌株 标准储备菌株传代后得到的同种菌株 4 44 4 标准培养物标准培养物 标准菌株 标准储备菌株 工作菌株的统称 4 54 5 质控菌株质控菌株 ATCC 最佳 但当无法获得时可以使用 ATCC 演化的菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株 特殊情况 例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株 室间质评的菌株即可 5 5 保存程序保存程序 2 6 5 15 1 标准菌株标准菌株 5 1 1 商业购买的 ATCC 标准菌株干粉 80 低温保存 可以 2 年以上 安瓿真空包装的 80 可长期稳 定保存 将标准菌株进行编号和登记 5 1 2 复苏 用 1ml 无菌的小牛血清或营养肉汤溶解 根据菌种的生长特点 接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件 培养 18 24h 酵母菌要求 3 天 形成孢子的微生物宜保存孢子 5 25 2 标准储备菌株标准储备菌株 5 2 1 由复苏后的 ATCC 标准菌株制备 复苏后的标准菌株要检查其纯度 必要时进行生化试验检查 刮取 培养物上的菌体 用足量的菌悬浮于防冻培养基中 防冻液可以是无菌脱纤维羊血 10 甘油肉汤 储存 足够量的标准储备菌株 可用 1 2 年 一年 52 周需要 52 支以上 5 2 2 甘油肉汤保存法 成分有蛋白胨 牛肉浸出粉 氯化钠 甘油 纯化木 相当于 20 的甘油 挑取 5 环菌落加入到 1ml 甘油 肉汤中混匀 苛养菌可以适当增加菌量 80 保存 除链球菌和嗜血杆菌以外细菌均可使用 保存期限 1 5 年 5 2 3 全血保存法 成分为脱纤维羊血 挑取 5 环菌落加入到 1ml 甘油肉汤中混匀 苛养菌可以适当增加菌量 80 保存 主要用于保存链球菌 嗜血杆菌及厌氧菌 保存期限 1 5 年 5 2 4 标准储备菌株进行编号和登记 5 35 3 工作标准菌株工作标准菌株 由标准储备菌株传代得到的菌株 标准储备菌株对多向下传三代 过多的传种会增加变异的机会 标 准储备菌株根据菌种特点选择适宜的培养基和培养条件进行培养 18 24h 即工作标准菌株 储存在 2 8 可放四周 个别营养要求高的为 2 周 例如肺炎链球菌和嗜血杆菌 使用时应编号并登记 3 6 5 45 4 编号方法编号方法 每个菌的保存管都要有唯一的编号 签字笔标注 便于查找和管理 来源数字意义 购买的标准菌株 1501ATCC25922 15 年第 1 株 ATCC25922 储备标准菌株 1501ATCC25922 3 由 1501ATCC25922 传代而来的 3 号标准储备菌株 5 55 5 记录管理记录管理 5 5 1 菌种应有严格的登记 每个编号都要有详细的记录包括来源 传代 保存方法 使用记录 使用原 因 高压灭菌记录等 附表 标准菌株记录表 标准储备菌株记录表 5 5 2 菌种保管应有专人负责 保存于专用冰箱中 双人双锁 确保菌种安全 保管人员变动时 必须严 格交接手续 5 5 3 各种菌种应按规定时间接种 注意菌种有无污染及变异 如发现变异时 应及时更换 5 5 4 一个使用周期结束后 标准菌株 储备菌株 工作菌株都要进行高压灭菌处理 并做好记录 6 6 使用流程使用流程 购买的标准菌株 编号 80 保 存 复苏接种合适的培养基 孵育出菌落 挑取典型的菌落到合适的稳定剂中 编号 80 保存 准备 n 支 性能验证 标准菌株 标准储备菌株 每周取出一支标准储备 菌株传种合适的培养基 适宜条件孵育出菌落 传代培养物 日质控周质控月质控 每周取出一支标准储备 菌株传种合适的培养基 适宜条件孵育出菌落 每月取出一支标准储备 菌株传种合适的培养基 适宜条件孵育出菌落 储备菌株管 用完第二天 高压灭菌 用完第二天高压灭菌 4 6 传代培养物可以作为第一 天的工作菌株使用 4 保存 以后 6 天用 以后的 6 天每天都用传 代培养物传一个新的菌 株 作为工作菌株使用 工作菌株使用后第二天 高压灭菌 7 天后传代培养物作废 进行高压灭菌 重新取一直标准储备菌 株传种 进入下一轮周 期 程序如上面几个步 骤 直接作为工作菌株使用 第二天高压灭菌 也可以用最后一天的的 工作菌株作为传代培养 物继续使用一周 5 6 0 代 1 代 2 代 7 7 质量控制质量控制 7 1 观察菌落的典型形态是否符合菌种 有没有杂菌生长 7 2 用氧化酶 触酶 上机等生化试验 鉴定菌种有没有变化 7 3 如果有污染或怀疑有问题时 应准备新的首次传代物或者获取新的标准菌株 8 8 参考文献参考文献 序号唯一性编号文献名称 9 1ISBN978 7 117 19862 2 R 19863 全国临床检验操作规程 第四版 购买的标准菌株 可追溯来源 卫生部室间质评菌株可作为质控 菌株使用 按照标准菌株管理 接种传代培养一次 并进行 纯度和生化鉴定 作为 储存标准菌株储存标准菌株 进行 多个分装保存 按照特定条 件储存和推荐的储存时间 进行纯度检查 和生化鉴定 作为传代物传代物或 者第一支 工工 作菌株作菌株 特定 的储存条件和 推荐储存时间 室内质控 每天传代平板作为第二天的工作标准菌株 进 行室内质控 用完立刻高压处理 可以再重复一周 规则同上 但一般来说工作菌株不能超 过 3 代 6 6 9 2ISBN978 7 5478 1226 6 R 395 临床微生物学诊断与图解 第三版 9 3GBT 27405 2008 实验室