免疫组化常用标记物

1 6 免疫组化常用标记物免疫组化常用标记物 一 常用标志物 1 CD15 LeuM1 阳性部位 细胞膜 是一种由半乳糖 岩藻糖和 N 乙酰葡萄糖组成的碳水化合 物抗原 又称半抗原 是粒 单核细胞相关抗原 免疫组织化学表达 成熟粒细胞 激活的淋巴细胞 主要是 T 淋巴细胞 R S 细胞 大多数腺癌等 2 癌胚抗原 carcinoembryonic antigen CEA CD66e 阳性部位 细胞膜 浆 癌胚抗原是表 达于胎儿上皮细胞的一种糖蛋白 分子量为 180kDa 存于某些恶性肿瘤组织尤其是内胚层来源发肿瘤中 大多数胃肠道 包括胰腺 和肺腺癌均有表达 少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达 CEA 主要用于标 记上皮性肿瘤 尤其是腺上皮来源的腺癌 3 嗜铬素 A chromogranin A CgA 阳性部位 细胞浆 嗜铬素是位于神经分泌颗粒内的酸性 糖蛋白家族 是一组可溶性酸性蛋白 分子量为 76 120 kDa 分布广泛 含量最丰富的是嗜铬素 A 另 两个是嗜铬素 B 和嗜铬素 C 几乎所有的神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素 嗜铬素 A 不仅存在于神经 内分泌细胞的分泌颗粒中 也广泛分布于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤细胞 此抗体可以识别嗜铬素 A 抗原羧基末端的片段 而不与氨基末端的片段反应 主要用于标记神经内分泌细 胞及其来源的肿瘤 对小细胞癌进行抗原修复可提高检测的敏感性 4 细胞角蛋白 cytokeratin pan 广谱 CK AE1 AE3 阳性部位 细胞浆 此抗体可以识别绝大 部分酸性细胞角蛋白 型 低分子量 和碱性细胞角蛋白 型 高分子量 用于标记上皮及上皮来源 的肿瘤 特别是对鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性具有一定的意义 5 细胞角蛋白 5 6 cytokeratin 5 6 CK5 6 阳性部位 细胞浆 在正常组织中 鳞状上皮和 导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞 肌上皮细胞和间皮细胞阳性 腺上皮细胞阴性 因 此 可用于鳞癌和腺癌 间皮瘤和腺癌的鉴别诊断 支气管上皮基底细胞 间皮 鳞癌 大细胞癌 移行 细胞癌 间皮瘤阳性 大多数腺癌为阴性 6 细胞角蛋白 7 cytokeratin 7 CK7 阳性部位 细胞浆 CK7 是分子量为 54 kDa 的一种碱性 细胞角蛋白 存在于大多数正常组织的腺上皮和移行上皮细胞中 一般非上皮来源的细胞无表达 在卵巢 乳腺和肺的腺癌呈阳性反应 而胃肠道的腺癌阴性 7 细胞角蛋白 20 cytokeratin 20 CK20 阳性部位 细胞浆 CK20 46kDa 存在于正常的胃 肠道上皮 移行上皮 Merkel 细胞及其来源的肿瘤 而乳腺癌 肺癌和神经内分泌肿瘤不表达 CK7 positive CK7 negative CK20 positive uninformative colorectum CK20 negative lung uninformative 8 细胞角蛋白 高分子量 cytokeratin HMW 阳性部位 细胞浆 高分子量细胞角蛋白抗 体 34 E12 可以识别 68kDa 58kDa 56 5kDa 和 50kDa 的细胞角蛋白 9 上皮膜抗原 epithelial membrane antigen EMA MUC1 阳性部位 细胞浆 上皮膜抗原是 一种高分子量 400 kDa 跨膜糖蛋白 广泛分布于各种上皮细胞及其来源的肿瘤 癌细胞过表达 MUC1 与 肿瘤侵袭有关 有意义的免疫反应性为膜阳性 如为纯粹的胞浆着色则为假阳性 此抗体可以用于标记上 皮及上皮源性肿瘤 EMA 阳性表达的肿瘤包括大多数的癌 间皮瘤 滑膜肉瘤和上皮样肉瘤等 淋巴瘤 黑色素瘤和软组织肿瘤阴性表达 10 HBME1 阳性部位 细胞膜 该抗体与间皮细胞表面的抗原反应 染色方式呈现一种特殊的 厚 膜 方式 在鉴别间皮瘤与腺癌时有一定的参考价值 间皮瘤为厚膜型 腺癌为薄膜型或胞浆着色 11 突触素 synaptophysin Syn 阳性部位 细胞浆 突触素是分子量为 38kDa 的糖蛋白 主要 存在于神经元突触前囊泡膜 是神经性和上皮性神经内分泌肿瘤的特异性标志之一 用于标记神经内分泌 肿瘤 12 甲状腺转录因子 1 thyroid transcription factor 1 TTF 1 阳性部位 细胞核 TTF 1 表 达于甲状腺腺上皮和肺的上皮细胞中 大多数肺的小细胞癌 腺癌 少部分大细胞癌 大多数非典型神经 内分泌肿瘤免疫组化结果显示 TTF 1 阳性 而肺鳞癌及绝大多数典型类癌 TTF 1 阴性 2 6 13 波形蛋白 Vimentin Vim 阳性部位 细胞浆 波形蛋白分子量为 57 kD 是原始的中间丝 分布极广 所有间 充 质细胞均有表达 此抗体的免疫原为猪的晶体 但可与人 大鼠和鸡的波形蛋白反 应 波形蛋白是正常间叶细胞及其来源的肿瘤的特异性标志 在许多上皮细胞及其肿瘤中可与细胞角蛋白 共表达 诊断用途 是一个有用的 对照标记 即 如果波形蛋白未能较易地在非肿瘤性内皮细胞 纤 维母细胞和其他间叶成分中检测到 则总的说来组织的免疫反应性未能得到适当的保存 在间皮瘤与腺癌 的鉴别诊断中 波形蛋白在间皮瘤的上皮细胞中更常见与细胞角蛋白共表达 14 Cam 5 2 分子量 45 kD 和 52 kD 的人角蛋白抗原决定簇 与正常分泌上皮而不是复层鳞状上皮反应 15 MNF 116 该抗体识别许多细胞角蛋白共同的抗原决定簇 是上皮性肿瘤的一线标记 免疫组织化学 表达 正常组织有复层鳞状上皮和单纯腺上皮 平滑肌 淋巴结树突状细胞 浆细胞等 肿瘤主要有鳞癌 小细胞癌 肉瘤样癌 梭形细胞癌 腺癌 间皮瘤 纤维状细胞 滑膜肉瘤 血管肿瘤 平滑肌肿瘤和 浆细胞瘤等 16 Desmin 结蛋白分子量为 53 kD 的中间丝 骨骼蛋白 有三种单克隆抗体 D33 DER 11 和 DEB 5 与其他中间丝无交叉反应 在平滑肌和横纹肌可检测到结蛋白 在肌纤维母细胞中亦有少量结蛋白 在平滑肌组织中结蛋白含量要多于血管平滑肌 诊断用途 识别平滑肌和横纹肌肿瘤 17 MOC 31 为识别上皮细胞中一种功能未知的 38 kDa 糖蛋白的单克隆抗体 大多数腺癌为阳性 而 间皮瘤通常为阴性 18 表面活性蛋白 Surfactant proteins SP 肺表面活性物质含有许多蛋白 包括 10 kD 的 Clara 细 胞蛋白和表面活性蛋白 A B C D 作为细支气管肺泡癌的标志 19 1 AT 细支气管肺泡癌 Clara 细胞型呈阳性表达 二 恶性上皮性肿瘤 1 鳞癌 发生于支气管上皮 有角化和 或细胞间桥的恶性上皮性肿瘤 有四个亚型 乳头状 透 明细胞型 小细胞型 基底细胞样绝大多数表达高分子角蛋白 34 E12 CK5 6 和 CEA 许多鳞癌 表达低分子角蛋白 35 H11 较少表达 TTF 1 或 CK7 2 小细胞癌 由圆形 椭圆形或梭形小细胞组成的恶性上皮性肿瘤 胞质很少 边界不清 核内可见 细颗粒状染色质 核仁不明显或缺如 细胞核变形很明显 常有大量坏死和许多核分裂 绝大多数小细胞 癌 CD56 Cg SY 阳性 神经内分泌标志表达率 90 小细胞癌常见 TTF 1 和 CK 阳性 鉴别诊断 淋巴瘤 小细胞癌显示为神经内分泌标志 TTF 1 和 CK 阳性 LCA 阴性 PNET 小细胞癌与 PNET 均可表达 MIC 2 CD99 但小细胞癌 TTF 1 和 CK 阳性 而 PNET 则为阴性 Merkel 细胞瘤 本瘤 CK20 阳性 CK7 TTF 1 阴性可与小细胞癌鉴别 3 腺癌 具有腺样分化和产生黏液的恶性上皮性肿瘤 呈腺泡样 乳头状 细支气管肺泡细胞样或实性 伴有黏液的生长方式 可混合存在 有下列亚型 腺癌 混合亚型 腺泡样腺癌 乳头状腺 癌 细支气管肺泡细胞癌 包括非粘液型 粘液型 混合性非粘液性与粘液性或中间型 非粘液型细 支气管肺泡癌又包括 型肺泡细胞型和 Clara 细胞型 前者 SP TTF 1 等阳性 后者 Clara 蛋白及 1 AT 阳性 有助于与其它腺癌鉴别诊断 实性腺癌伴有粘液产生 胎儿型腺癌 黏液性 胶样 腺癌 黏液性囊腺癌 印戒细胞腺癌 透明细胞腺癌 腺癌的免疫组化特征与其亚型和分化程度有关 典型的上皮性标志为 AE1 AE3 CAM5 2 EMA 和 CEA CK7 阳性高于 CK20 TTF 1 阳性率较高 尤其是在 分化好的腺癌 在 TTF 1 阳性病例中 甲状腺球蛋白阴性有助于排除甲状腺癌 表面活性蛋白 Surfactant apoprotein SP 较 TTF 1 为低 但要注意的是转移性肿瘤细胞也可能吸附一些 SP 在黏 液性肿瘤中 尤其是黏液型 BAC 可能有例外 即 TTF 1 阴性 而 CK7 和 CK20 往往阳性 鉴别诊断 转移性腺癌 有原发灶病史 在肺内常为多个病灶 如为单个病灶 则鉴别较为困难 肺腺癌有组织学亚型的异质性 尤其是存在 BAC 成分时可明确诊断 60 表达表面活性蛋白 SP A pro SP B pro SP C 70 表达 TTF 1 CK7 CK20 仅黏液性 BAC 为 TTF 1 CK20 转移性腺癌多为均质性 TTF 1 阴性 除外甲状腺癌 黏液染色阴性 甲状腺球蛋白阳性 肾细胞癌 3 6 AE1 AE3 CK7 弱阳性 Vim 强阳性 结肠腺癌 CK7 CK20 CDX 2 阳性 乳腺癌 ER 卵巢癌 雌二醇受体 CA125 Vim 钙粘蛋白 抑制素 CEA 前列腺癌 PSA 上 皮型恶性间皮瘤 根据临床 巨检 镜检 免疫组化和电镜特点进行鉴别 免疫组化方面主要包括腺癌 特异标志 TTF 1 普通标志 CEA CD15 或 MOC31 间皮瘤标志 calretinin 钙视网膜蛋白 和 CK5 6 不典型腺瘤样增生 发生于肺周边部的局灶性病变 通常 5mm 表现为衬覆肺泡或呼吸性细支气管的不 典型细胞呈轻 中度局限性增生 无间质炎症和纤维化 不典型腺瘤样增生表达 SPA CEA MMPs E 钙 粘蛋白 catenin CD44v6 和 TTF 1 一般认为 不典型腺瘤样增生是细支气管肺泡细胞癌的癌前病变 TP53 阳性是细支气管肺泡细胞癌的早期标志之一 非粘液型细支气管肺泡细胞癌 一般大于 5mm 明 显的细胞分层 细胞密集 柱状细胞排列拥挤 微乳头丛生 细胞核重叠 染色质较粗 可见核仁 4 大细胞癌 未分化的非小细胞肺癌 缺乏小细胞癌 腺样或鳞状分化的细胞和结构特征 大细胞癌的 分化表型并无特征性 大多表现为腺分化 也可为鳞分化 有少数大细胞癌具有腺 鳞 神经内分泌三相 分化表型 免疫组化 AE1 AE3 几乎全部阳性 EMA70 阳性 35H11 近 70 阳性 部分病例亦可表 达 CEA CK7 及 Vim 其亚型有 大细胞神经内分泌癌 常表达神经内分泌标志 CgA Syn 和 NCAM CD56 50 可表达 TTF 1 基底细胞癌 TTF 1 阴性 神经内分泌标志一般为阴性 约 10 的病例可表达一个神经内分泌标志 淋巴上皮瘤样癌 透明细胞癌 大细胞癌伴横纹肌样表型 5 腺鳞癌 同时具有鳞癌和腺癌成分 各自不少于肿瘤的 10 表达的 CK 分子量范围很广 AE1 AE3 CAM5 2 KL1 和 CK7 阳性 但通常 CK20 阴性 腺鳞癌可表达 EMA TTF 1 阳性多见于腺癌部分 6 肉瘤样癌 是一组分化差的 NSCLC 伴有肉瘤成分或肉瘤样 梭形和 或巨细胞 分化 目前已认知 五个亚型 多形性癌 梭形细胞癌 巨细胞癌 癌肉瘤 肺母细胞瘤多形性 梭形和 或巨细胞 癌 常同时表达 CK Vim CEA 和平滑肌标志 巨细胞癌可有 TTF 1 阳性 癌肉瘤 上皮成分 CK 阳性 软骨肉瘤见 S 100 阳性 横纹肌肉瘤为肌源性标记阳性 肺母细胞瘤 胎儿型腺癌成分可表达上皮性标 志 CK EMA CEA 和神经内分泌标志 CgA 等 肿瘤细胞可表达特殊的激素 如 降血钙素 calcitonin 胃泌素释放肽 gastrin releasing peptide 蛙皮素 bombesin 亮氨酸 leucine 和甲硫脑啡肽 methionine enkephalin 生长抑素 somatostatin 和 5 羟色胺 serotonin 表达 AFP 极罕见 上皮细胞尤其是桑葚体可表达 clara 细胞抗原和 SP 间质细胞为 Vim MSA Desmin myoglobin 或 S 100 阳性 7 类癌 以神经内分泌分化方式 器官样 小梁状 岛状 栅栏状 缎带样 花环样排列等 为特点 肿瘤细胞具有较一致的形态学特征 如 中度嗜伊红的胞质 细胞核内细颗粒状染色质等 典型类癌 非典型类癌大多数类癌 CK 阳性 CD99 阳性率也较高 神经内分泌标志 如 Cg SY Leu7 CD57 和 N CAM CD56 通常为强阳性 尤其是典型类癌 但在不典型类癌时则可能为灶性 TTF 1 在类癌有表 达 文献报道差异较大 Ki 67 在不典型类癌的阳性率高于典型类癌 与预后有关 支持细胞 S 100 阳性 鉴别诊断 副神经节瘤 CK 阴性 支持细胞 S 100 阳性 神经内分泌标记阳性 类癌 CK 阳性 支持细胞 S 100 阳性 血管球瘤 SMA 阳性 神经内分泌标志阴性 8 唾液腺型癌例 上皮 肌上皮癌 由肌上皮细胞 梭形细胞 透明细胞或浆细胞样形态的细胞 和 含量不等的导管形成上皮所组成的肿瘤 导管内层嗜伊红细胞 CK7 EMA MNF116 阳性 导管外层透明 细胞以及实性成分 Vim SMA S 100 阳性 三 良性上皮性肿瘤 例 腺瘤 1 肺泡状腺瘤 衬覆 型肺泡上皮 表达 CK 广谱 CEA SP 和 TTF 1 间质细胞呈灶性 SMA Act 阳性 TTF 1 des proSPB proSPC 和 CC10 阴性 2 状腺瘤 含有 型 肺泡细胞和 Clara 细胞 故 CK 广谱 Clara 细胞蛋白 TTF 1 和表面活性蛋白阳性 也可表达 CEA NE 标志阴性 3 唾液腺型腺瘤 粘液腺腺瘤 多形性腺瘤 其他 4 粘液性囊腺瘤 四 淋巴增生性肿瘤 1 MALT 型 黏膜相关淋巴组织 边缘区 B 细胞淋巴瘤 由具有形态学异质性的小 B 细胞组成的结外淋巴 瘤 类似单核细胞和 或小淋巴细胞的肿瘤细胞在肺内弥漫浸润 散在有免疫母细胞和中心母细胞样细胞 4 6 在一些病例中可见浆细胞分化 典型病变为肿瘤细胞浸润支气管黏膜上皮 形成淋巴上皮病变 有时肿瘤 间质内有淀粉样变 肿瘤细胞为单克隆 B 细胞 CD20 CD79a 和 bcl 2 阳性 大多数病例表达 重链 少数为 或 CK 可使淋巴上皮病变着色 肿瘤内可有少量反应性 T 细胞 鉴别诊断 淋巴细胞性间 质性肺炎 MALT 淋巴瘤呈浸润性生长 使肺泡间隔增宽 机构破坏 淋巴上皮病变更常见 B 细胞 Ig 轻 链限制 Ig 重链基因重排 PCR 检测 2 弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 大肿瘤性 B 细胞增生 细胞核相当 于或大于巨噬细胞核 或比正常淋巴细胞大两倍 肿瘤细胞表达 B 细胞表型 CD20 CD79a 伴反应性 T 细胞 在冰冻组织切片中可检测到 Ig 轻链表达 五 间叶性肿瘤 1 上皮样血管内皮瘤 是一种低 中级别血管性肿瘤 由上皮样内皮细胞构成的短条索和巢分布于黏液 透明基质中 肿瘤具有突出的上皮样特征 明显的胞浆内空泡 在肺泡内和血管内生长以及中心透明坏死 CD31 CD34 Ulex europaeus 荆豆 F8RA Fli 1 DNA 结合转录因子 ETS 家族的成员之一 SMA 阳 性 CK EMA CEA 阴性 血管肉瘤 高级别的上皮样血管内皮瘤 瘤细胞表达 CD31 CD34 F8 Fli1 FKBP12 与神经钙蛋白相互作用的胞液 FK506 结合蛋白 Vim 强阳性 CK 灶性 阳性 胸膜肺母细胞瘤 肿瘤细胞 Vim 阳性 横纹肌母细胞样细胞 MSA 和 desmin 阳性 炎 性肌纤维母细胞瘤 是广义 炎性假瘤 一种 由多种成分混合而成 如胶原 炎症细胞以及形态温和 显示肌纤维母细胞分化的梭形细胞 同义词有 炎性假瘤 浆细胞肉芽肿 纤维组织细胞瘤和纤维黄色瘤 等 梭形细胞 Vim SMA 阳性 Myogenin myoglobin CD117 c kit 和 S 100 阴性 约 1 3 病例呈局灶 性 CK 阳性 可能是由于肺泡陷入 值得注意的是 40 病例表达 ALK1 和 p80 P53 阳性很罕见 有报道 称可能与肿瘤复发和恶变有关 淋巴血管平滑肌瘤病 一种类似于平滑肌细胞的不成熟短梭形细 胞广泛浸润于间质而形成的病变 常伴有囊性变 表现为平滑肌分化和表达 SMA desmin 和 Vim 阳性 然而 与正常平滑肌细胞不同的是 LAM 可表达 HMB45 一些病例存在 ER 和 PR 滑膜肉瘤 单向 型 双向型 原发于肺的间叶性梭形细胞肿瘤 可有程度不等的上皮分化区域 组织学类似软组织的 同名肿瘤 Vim CK 和 或 EMA 阳性 梭形细胞很少阳性 CK7 和 19 阳性可与其他梭形细胞肉瘤鉴别 瘤细胞可表达 bcl 2 和 CD99 1 3 病例 S 100 阳性 CEA CK20 TTF 1 CD34 和 desmin 阴性 肺 动脉肉瘤 发生于大的肺动脉的肉瘤 有两型 管腔内型 呈息肉样向管腔内生长 通常显示为纤维母 细胞或肌纤维母细胞分化 瘤细胞 Vim 弥漫强阳性 osteopontin 骨桥蛋白 desmin 和内皮细胞标志 F8 CD31 和 CD34 阳性 管壁型 在管壁内浸润生长 组织学类似软组织平滑肌肉瘤 肺静 脉肉瘤 发生于肺静脉的肉瘤 表现为平滑肌肉瘤特点 Vim desmin 和 actin 阳性 40 病例有异常的 keratin 反应性 六 混杂性肿瘤 1 1 硬化性血管瘤 发生在肺部的良性上皮肿瘤 组织学上有显著的共同表现 呈实性 乳头状 硬化和 肺泡内出血 4 种形式 增生的肺泡 型细胞呈立方形 被覆在乳头结构的表面 间质的上皮样细胞为圆形 形态较一致 瘤组织内可见胆固醇裂隙 慢性炎症 黄色瘤细胞 含铁血黄素 钙化 分层状的卷轴样螺 纹 坏死和成熟脂肪组织 免疫组化 如下表 免疫标记 表面细胞 多角形 圆形细胞 AE1 AE3 MNF116 CAM5 2 CK7 CK20 EMA CK5 6 Calretinin ChgA Syn Leu7 SP A pro SP B Clara 细胞蛋白 TTF 1 Vim S 100 CEA F8 雌二醇受体 孕酮受体 鉴别诊断 类癌 CgA Syn 弥漫性强阳性 TTF 1 阴性 2 2 透明细 胞瘤 亦称 糖瘤 可能来源于血管外周的上皮样细胞 肿瘤细胞胞浆透明或嗜酸性 内含丰富的糖 原 无肌膜的薄壁窦状血管具有特性 HMB 45 HMB50 阳性 SY CD57 CD34 NSE S 100 局灶性阳性 Keratin 阴性 HE 知识总结 染料分类 碱性染料 酸性染料 中性染料 备注 染料的酸碱性是由于染料分子在水溶液电离后所带的电 荷性质决定的 与水溶液的酸碱性无关 酸性染料 伊红 酸性品红 苦味酸 刚果红 甲基蓝 水溶性苯胺蓝 橙黄 G 5 6 氧化 碱性染料 苏木红 亚甲蓝 孔雀蓝 中性红 甲基绿 孔雀绿 甲苯胺蓝 沙黄等 中性染料 瑞氏染料 姬姆萨染料 染料原理 物理作用 毛细作用 吸附作用 吸收和溶解作用 分子间作用力 化学作用 离子键 共价键 氢键 媒染与促染 媒染染料 本身与组织作用较弱或者根本不起作用 只有将这类染料先与媒染剂结合 生成色沉淀后才能 用于组织染色 常见的苏木精和卡红 媒染剂 主要是金属离子的盐类 金属原子的含氧酸 最常见的是苏木素染料的媒染剂 硫酸铝钾 染料 媒染剂 组织 特点媒染剂多为过渡的金属元素 一至三价的可溶性盐类或氢氧化物 如铝盐 铁盐 明矾 和金属含氧酸等 媒染剂与色淀分子是竞争关系 因此媒染剂要适量 否则影响染料着色