临床免疫学检查

第七章临床免疫学吉林大学第一医院检验科黄晶,第三节病毒性肝炎血清标志物检查 甲肝病毒(HAV) 乙肝病毒(HBV) 丙肝病毒(HCV) 丁肝病毒(HDV) 戊肝病毒(HEV) 庚肝病毒(HGV) 输血传播病毒（TTV),病毒性肝炎标志物：肝炎病毒本身、组成该病毒的成份及抗病毒的抗体等总称。,一、HAV标志物检测甲型肝炎病毒标志物: 甲肝抗体(抗-HAV)参考值：阴性【临床意义】抗-HAV IgM阳性表示近期感染过HAV,抗-HAV IgG阳性表示曾经感染过HAV,见于甲肝恢复期,二、HBV标志物检测,大球形颗粒,管形颗粒,小球形颗粒,pre-s1,pre-s2,S,P,pre-c,C,HBV DNA 3.2 kb,pre-S1 pre-S1蛋白pre-S2 pre-S2蛋白S HBsAgpre-C HBeAgC HBcAgP DNAP,Dane颗粒（完整的病毒）形态,HBsAg,HBcAg,HBV DNA,DNAP,（外膜蛋白）,（核衣壳蛋白）,二、HBV标志物检测 （1）乙肝三对半： HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb HBcAg PreS,（2） HBVDNA测定PCR法,参考值：阴性,【临床意义】,1)急性HBV感染可靠的诊断指标2）HBVDNA与血清学结果的评价,【临床意义】,3）抗病毒疗效观察4）筛查献血队员5）检测疫苗安全性,HbsAg HbsAb HbeAg HbeAb HbcAb 临床意义 + - + - - 活跃期，传染性强 + - - - + 携带者/感染早期 + - - + + 趋向恢复/传染性弱 - + - - + 既往感染/恢复期 - - - + + 感染恢复期 - - - - + 窗口期/既往感染 - + - - - 感染恢复期/疫苗 - + - + + 感染恢复期/潜在感 染后有免疫力 + + - + + HBsAg变异,三 HCV标志物检测,【方法】ELISA、RIA、HCVRNA【参考值】阴性【临床意义】1.抗HCV阳性-HCV感染标志 2.抗HCV-IgM阳性急性丙肝3.抗HCV-IgG阳性慢性丙肝4.HCVRNA阳性病毒复制活跃,有关抗-HCV免疫测定试剂的阳性判断标准,抗HCV筛查及确认试验结果的解释,四 HDV标志物检测 HDAg、抗-HDVIgG和IgM检测 【参考值】阴性 【临床意义】 1.抗-HDVIgM急性感染 2.抗-HDVIgG慢性感染,五 HEV标志物检测戊型肝炎病毒标志物:戊肝抗体(抗-HEV)【参考值】阴性【临床意义】1.抗-HEVIgM阳性表示近期感染HEV2.抗-HAVIgG阳性表示戊型肝炎恢复期六 HGV标志物监测七 TTV标志物监测,六、病毒性肝炎血清标志物间的的选择和应用,5种不同病毒性肝炎的特征,第一节体液免疫检查 一、免疫球蛋白检测（immunoglobin，Ig）1. IgG IgA IgM IgE 【参考值】（免疫比浊法） IgG 7.6-16.6g/L IgA 0.7-3.5 g/L IgM 0.48-2.12 g/L IgE 0.1-0.9 mg/L,【临床意义】 IgG IgA IgM IgE 疾病 慢性感染、慢性肝炎、自身免疫病 N N N IgG型MM、高丙种球蛋白血症 N N N IgA型MM N N N 巨球蛋白血症 N N N IgE型MM、过敏疾病、寄生虫感染 低丙种球蛋白血症、免疫缺陷病、 肾病、应用免疫抑制剂,2. IgG 亚型,IgG1 IgG2 IgG3 IgG4,二血清M蛋白的检测,M蛋白是一种单克隆B细胞异常增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其片段。,【临床意义】,M蛋白阳性提示单克隆免疫球蛋白增殖病。 见于：(1)MM：以IgG型常见，其次为IgA,IgD和IgE 罕见，50%MM尿中可检测BJP。 (2)巨球蛋白血症：血液存在大量的单克隆 IgM。80%为轻链，20%为轻链 (3) 重链病、恶性淋巴瘤。,三、补体检测（complementry，C）1、总补体溶血活性测定(total hemolytic complement activity,CH50) 【原理】 致敏的SRBC+待测血清Ag-Ab 激活C 溶RBC 【参考值】 50-100KU/L,2.补体C3、 C 4 测定【方法】 免疫比浊法【参考值】 C3 0.82-1.7g/L C 4 0.15-0.49g/L【临床意义】（1）补体多见于急性感染、传染病、肿瘤、排斥反应。（2）补体a 先天性缺陷b 后天性缺陷 合成：肝病、营养不良（合成原料不足） 消耗：肾小球肾炎、SLE、大失血,第二节细胞免疫检测,一淋巴细胞表面标志（一）T淋巴细胞表面标志 1.玫瑰花结形成实验,【参考值 】 57-71%,2.免疫荧光法 【原理】流式细胞术,【参考值】 CD4/CD8 0.9-2.0,【临床意义】1. T细胞总数的变化（CD3）,CD3见于： 免疫缺陷病 自身免疫病 病毒感染 恶性肿瘤 应用免疫抑制剂,2.T细胞亚群的变化,CD4见于： 免疫缺陷病 病毒感染 恶性肿瘤 应用免疫抑制剂3.CD3CD4CD8，同时伴CD2 CD5 CD7，应考虑急性T淋巴细胞白血病。,CD8见于 自身免疫病CD4 /CD8 AIDS,（二）B细胞分化抗原测定【参考值】 CD19阳性率 11.763.73%【临床意义】 CD19 同时伴有SmIg、HLA表达见 于急性B淋巴细胞白血病。 CD19见于 无丙种球蛋白血症 化疗或应用免疫抑制剂,二淋巴细胞功能检测,（一）淋巴细胞转化试验原理:T细胞-ConA-或(PHA)-淋巴母细胞【参考值】 52-67% （形态法） SI 大于2 （H3掺入法或MTT法）【临床意义】1.判定机体细胞免疫功能水平淋转率见于 a细胞免疫缺陷 b细胞免疫功能：恶肿 免疫缺陷病 自身免疫病 病毒感染 应用免疫抑制剂2.估计疾病疗效及预后,（二）NK细胞测定,1乳酸脱氢酶释放法【参考值】细胞毒指数：27.5%-52.5%2. 51Cr释放法【参考值】自然杀伤率：47.6%-76.8%【临床意义】 1）NK细胞活性：病毒感染早期、抗移植排斥反应、 应用干扰素。 2）NK细胞活性：恶肿、免疫缺陷病、免疫抑制剂。 3）肿瘤疗效观察及预后评价。 4）免疫调节功能,第四节感染免疫学检测,一细菌感染免疫检测,（一）抗链球菌溶血素O测定（anti-streptolysin，ASO）【临床意义】 1.ASO升高见于： 风湿性关节炎、肾小球肾炎、 感染性心内膜炎、扁桃体炎 .判断风湿活动期指标之一。,（二）肥达反应( Widal reaction WR ),【参考范围】伤寒 O 80, H 160副伤寒 O 80, H 80【临床意义】1.诊断伤寒、副伤寒2.早期使用抗生素、激素、免疫功能低下者WR可阴性,（三）结核杆菌抗体检测,【临床意义】 结核分枝杆菌感 染辅助诊断实验,（四）C反应蛋白（C reaction protein,CRP）【参考值】（ELISA） 0.42-5.2mg/L【临床意义】鉴别细菌及病毒感染急性风湿热活动期创伤,二病毒感染免疫检测,（一）汉坦病毒抗体测定 特异性IgM、IgG【临床意义】 特异性IgM-肾综合征出 血热早期诊断,（二）流行性乙型脑炎病毒抗体（三）人类轮状病毒抗体（四）麻疹病毒抗体（五）柯萨奇病毒抗体（六) EB病毒抗体,（七）梅毒螺旋体抗体检测定性试验快速血浆反应素试验（rapid plasma reagin test，RPR）确诊试验梅毒螺旋体血清试验（ treponemal pallidum hemagglutination test, TPHA）参考值 RPR、TPHA均阴性,临床意义1. RPR（+）TPHA（+）梅毒2. RPR（-）TPHA（+）感染过梅毒3. RPR（+）TPHA（-）进一步观察TPHA （-）排除 TPHA（+）确诊 4.RPR（+）可见于SLE、IM、TB、PSS,（八）HIV抗体（human immunodeficient virus）筛选试验 胶体金法、ELISA 确诊试验 WEST BLOT 、RT-PCR参考值 阴性临床意义 诊断AIDS 流行病普查,三TORCH感染免疫检测,toxoplasmosisother(viruses)rubella CytomegalovirusHerpes simplex viruses,第五节肿瘤标志物检测,定义： 肿瘤细胞合成、释放或由机体对肿瘤细胞反产生的一类物质,应用范围,一、临床应用 肿瘤患者的辅助诊断、疗效判断、病情检测、预后评估、评价手术、放疗、化疗是否有效。反映手术是否根除，判断肿瘤有无复发和转移。二、肿瘤高危人群的定期筛查三、肿瘤分子流行病学调查及肿瘤标志物生物学研究。,1.甲种胎儿球蛋白（alpha fetoprotein, APF) -岩藻糖苷酶（alpha fucosidase,AFU),【参考范围】 APF低于25g/L; AFU 3-11U/L【临床意义】 原发性肝细胞癌 生殖腺胚胎癌，胃癌，胰腺癌 病毒性肝炎，肝硬化 妇女妊娠3个月后APF开始升高，7-8个月达到高峰,分娩后 3周恢复正常。,2.癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA),【参考范围】 EIA 、RIA 参考值5g/L【临床意义】(1)消化道恶性肿瘤：整个胃肠道恶性肿瘤均可增高(2)非消化道恶性肿瘤：如卵巢癌、乳腺癌、肺癌等也有不同程度升高。(3)非肿瘤性疾病增高：良性肿瘤、大量吸烟、妊娠也可增高(4)CEA与其它肿瘤标志物结合测定可以提高对癌症的检出率,3.前列腺特异性抗原 (Prostate specific antigen，PSA) 复合型PSA,游离型PSA(f-PSA),前列腺癌患者可见血清PSA浓度升高。4.鳞状细胞癌抗原（squamous cell caocinoma,SCC) 鳞癌肿瘤标志物,5.癌抗原125测定（cancer antigen125, CA-125） 卵巢癌患者血清中CA125水平明显升高6.癌抗原15-3（cancer antigen15-3, CA15-3） 乳腺癌患者常有CA15-3升高7.糖链抗原19-9（CA19-9） 在消化道腺癌病人血清中的浓度可明显升高，是胰腺癌和胆管癌的肿瘤标志物。8.糖链抗原72-4（CA72-4） 胃癌检测首选标志物,9.神经元特异性烯醇化(neuronspecificenolase，NSE) 小细胞肺癌、神经母细胞瘤患者NSE水平明显升高10.人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG) 葡萄胎、绒毛癌异常升高；睾丸母细胞瘤，精原细胞瘤升高,首选标志物对应疾病AFP/AFU 肝癌CEA 结肠癌PSA 前列腺癌SCC 鳞癌CA125 卵巢癌CA153 乳腺癌CA199 胰腺癌/胆管癌CA72-4 胃癌NSE 小细胞肺癌HCG 绒毛癌/精原细胞癌,第七节自身免疫检查,自身免疫性疾病： 由于某些原因造成免疫系统对自身成分的免疫耐受性减低或破坏，致使自身抗体损伤含有相应自身抗原的组织器官而引起的疾病。,Autoantibodies,Systemic autoantibodiesAnti-Nuclear Antibody (ANA) Anti-neutrophil Cytoplasmic Antibody (ANCA) Anti-Double Strand DNA (Anti-dsDNA) Anti-Sjgrens Syndrome A (Anti-SS-A) (Ro) Anti-Sjgrens Syndrome B (Anti-SS-B) (La) Rheumatoid Factor (RF) Anti-Jo-1 Anti-Ribonucleic Protein (Anti-RNP) Anti-Smith (Anti-SM) Antiscleroderma Antibody (Anti-SCL-70) Cardiolipin autoantibodies Endomysial/Gliadin autoantibodies,Organ specific autoantibodies Thyroid Antibodies Anti-Smooth Muscle Antibody (ASMA) Diabetes Autoantibodies Anti-Mitochondrial Antibody (AMA) Liver-Kidney Microsomal autoantibodies,一自身抗体检测,（一）抗核抗体检测（ANA) 抗核抗体是以细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称。应用免疫荧光法检测ANA时，可出现四种荧光图谱：均质型、边缘型、颗粒型、核仁型。,抗原成分：核蛋白（SLE）,抗原成分：（SLE、MCTD）,抗原成分：（SS）,抗原成分：(PBC),1.抗DNA抗体抗dsDNA抗体抗ssDNA抗体 参考值 阴性临床意义1）抗DNA抗体阳性主要见于SLE活动期。2）SLE复发的先兆指标。3）抗DNA抗体阳性也可见于结缔组织疾 病，但一般认为是SLE的重叠症。,2.其他抗核抗体,（1）抗Sm抗体、抗RNP抗体【结果判定】 Hep-2细胞核浆呈粗颗粒型【临床意义】 Sm抗体：SLE的标志性抗体30% 抗RNP抗体：混合性结缔组织病95%（2）抗组蛋白抗体【结果判定】 Hep-2细胞核浆呈均质性型【临床意义】 SLE及药物性SLE95%,（3）抗SSA/Ro抗体 、抗SSB抗体,【结果判定】 Hep-2细胞核浆呈细颗粒型【临床意义】干燥综合征40-95%新生儿狼疮征,（4）抗核点抗体,【结果判定】 Hep-2细胞核浆呈特 异性颗粒型少点型：1-5个点状颗粒多点型：5-20点状颗粒着丝点型：46/92点状颗粒【临床意义】少点型：SS SLE PBC多点型：PBC 30%着丝点型:局限型PSS 80-95%,(5)抗核膜抗体,【结果判定】 Hep-2细胞核边缘呈线形强着染【临床意义】 自身免疫型肝炎30-40% 血细胞减少 血管炎,（6）抗Scl-70抗体,【结果判定】 Hep-2细胞核仁强荧光,核浆均 质型【临床意义】PSS 25-75%（7）抗PM-Sc1抗体【结果判定】Hep-2细胞核仁均质型【临床意义】DM、PM 8%,(二）抗胞浆抗体检测,1.抗线粒体抗体( Anti-Mitochondrial Antibody，AMA)【结果判定】 Hep-2细胞浆呈均匀粗颗粒【临床意义】 PBC 90%,2.抗肌动蛋白抗体,【结果判定】 Hep-2细胞浆呈针状纤维束【临床意义】CAH40-90%3.抗Jo-1抗体【结果判定】 Hep-2细胞浆呈细颗粒型【临床意义】PM25-35%、间质性肺纤维化,（三）抗组织细胞抗体,1.抗肾小球基底膜抗体(Glomerular basement membrane,GBM)【结果判定】 基底膜呈花瓣状着染【临床意义】抗肾小球基底膜抗体型肾小球肾炎,（三）抗组织细胞抗体,2.抗胃壁细胞抗体3.抗甲状腺抗体4.抗平滑肌抗体5.抗胰岛细胞抗体,（三）抗组织细胞抗体,6.肝脏相关自身抗体（1）ANA、抗平滑肌抗体（2）抗肝肾微粒体抗体（LKM)（3）抗肝细胞胞浆抗原1型抗 体(LC-1)（4）抗可溶性肝抗原抗体(SLA) 和抗肝胰抗体（LP),（三）抗组织细胞抗体,7.抗精子抗体8.抗子宫内膜抗体9.抗心肌抗体,（四）其他自身抗体检测,1.类风湿因子（rheumatoid factor，RF）【临床意义】 RF阳性见于 1.类风湿性关节炎 其它自身免疫性疾病 2.随着年龄的增长 RF阳性率增加,（四）其他自身抗体检测,2.抗中性粒细胞抗体（ Antineutrophil cy