天胡荽药材中槲皮素的薄层鉴别与含量测定

1 / 6天胡荽药材中槲皮素的薄层鉴别与含量测定作者：王祥培，许士娜，吴红梅，王婷婷【摘要】 目的对天胡荽药材中槲皮素进行薄层鉴别，并建立天胡荽药材中槲皮素的含量测定方法。方法采用薄层色谱法对天胡荽药材中槲皮素进行鉴别。并采用高效液相色谱法进行含量测定，色谱柱为 Dikma 公司 Diamonsil C18；流动相为乙腈- %磷酸；流速 ml/min。检测波长 370 nm，柱温 25。结果薄层色谱可鉴别槲皮素。槲皮素在 88 8g 范围内线性关系良好，r= 8，平均回收率为%，RSD=%。结论此法简便、准确，可用于天胡荽药材的质量控制。 【关键词】 天胡荽；槲皮素；薄层色谱法；高效液相色谱法天胡荽为伞形科植物天胡荽 Hydrocotyle sibthorpioides Lam.或破铜钱 Hydrocotyle sibthorpioides - Shan 的干燥全草，具有清热解毒、利湿之功效，用于黄疸型肝炎、胆结石、目翳1治疗。天胡荽含槲皮素、槲皮素-3-半乳糖苷等黄酮类化合物2 ，其中槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突变等多种功能3 ，是天胡荽药材的有效成分之一。本实验采用薄层色2 / 6谱及高效液相色谱对天胡荽药材中槲皮素进行定性与定量研究，为控制天胡荽药材的质量提供简便、有效的方法。1 仪器与试药Agilent1100 型高效液相色谱仪(自动进样品)，二极管阵列检测器(DAD)； AB104-N 型电子天平(德国Mettler-Toledo Group 公司)；薄层色谱硅胶 G；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸镏水；槲皮素对照品；10 批天胡荽药材样品采自贵州各地，经笔者鉴定为伞形科植物天胡荽 Hydrocotyle sibthorpioides Lam.和破铜钱 Hydrocotyle sibthorpioides - Shan 的干燥全草。2 方法与结果定性鉴别供试品溶液的制备取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约 3 g，精密称重，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液(41)提取液75 ml，置水浴中加热回流 1 h，滤过，将滤液水浴蒸干，用适量蒸馏水溶解，移至分液漏斗中，加醋酸乙酯 30 ml萃取，合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇 3ml 使溶解，取上清液作为供试品溶液。对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品 mg，置 50 ml 的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。3 / 6薄层色谱法4照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及槲皮素对照品溶液各 10 l 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G 薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，置盐酸蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。HPLC 测定色谱条件色谱柱为 Dikma 公司 Diamonsil C18；流动相为乙腈- %磷酸；流速 ml/min。检测波长 370 nm，柱温 25。进样量 10 l。理论塔板数按槲皮素计算，应不低于 5 000。在此色谱条件下，槲皮素对照品、天胡荽药材的 HPLC图谱见图 12。对照品溶液的制备精密吸取“”项下的槲皮素对照品溶液 1ml，置25ml 的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。供试品溶液的制备取干燥至恒重的天胡荽药材粉末约 g，精密称重，置 50 ml 具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液(41)提取液 25 ml，称定重量，置水浴中加热回流 1 h，放冷，称4 / 6重，用提取液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液 5 ml 至 25 ml 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜( m) 滤过，取续滤液,即得供试品溶液。线性关系考察精密吸取槲皮素对照品溶液， ， ， ， ， l，进样，测定峰面积，以色谱峰面积为纵坐标， 槲皮素进样量为横坐标，进行线性回归分析，线性回归方程: Y=6 5，r= 8，结果表明槲皮素在 88 8 g 进样量与峰面积的线性关系良好。精密度实验吸取对照品溶液 10 l，连续进样 5 次，记录色谱图，结果槲皮素峰面积的 RSD 为%。稳定性实验取同一供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8，10 h进样，记录色谱图，结果槲皮素峰面积的 RSD 为%。表明供试品溶液在 10 h 内稳定。重复性实验取同批药材 5 份，精密称定，按“”项下供试品溶液制备方法制备并测定，槲皮素平均含量为%，RSD 为%。加样回收率实验取已知含量天胡荽粉末 5 份，每份约 g，精密称定，分别精密加入一定量的槲皮素对照品溶液，按“”项下方5 / 6法制备并测定，结果回收率平均值为%，RSD 为%。样品含量测定精密吸取对照品溶液与 10 批天胡荽药材供试品溶液各 10 l，按上述色谱条件测定，测定峰面积积分值,按外标法计算槲皮素的含量。结果见表 1。表 1 样品中槲皮素的含量3 讨论通过实验发现，在槽内先加入展开剂，再在展开缸内用小烧杯盛上盐酸，然后进行薄层板预饱和 30min，再展开，其色谱斑点圆而集中，分离度较好。天胡荽药材除了含有槲皮素外，还有多种黄酮苷，以盐酸和硫酸作为水解酸进行了比较，还对水解酸的浓度、溶剂和提取时间进行了考察。结果所用的条件较好。曾对甲醇-水、甲醇-%磷酸、乙腈- 水等流动相进行考察，发现上述条件不够理想。采用乙腈- %磷酸作为流动相，槲皮素色谱峰能够达到基线分离，峰形对称、尖锐。1990 年版广西中药材标准收载天胡荽和破铜钱为天胡荽药材的来源品种，而 XX 年版贵州省中药材、民6 / 6族药材质量标准只收载天胡荽为天胡荽药材的来源品种，同时槲皮素的含量测定结果表明，天胡荽和破铜钱两种植物在成分含量上有明显的差异。因此，天胡荽和破铜钱两种植物的干燥全草能否同时作为天胡荽药材使用有待商榷。在广西中药材标准1990 年版与贵州省中药材