高中生物选修一速简笔记

1 高中化学选修 1 速简笔记 适于加强记忆 配套课本使用 5 1 DNA 粗提取 鉴定粗提取 鉴定 1 1 DNA 在 0 1mol LNaCl 溶液中溶解度最大 2mol L 溶解度最小 DNA 不溶不溶于酒精溶液酒精溶液 某些蛋白质能溶 进一步分离 2 DNA 在 80 C 以上以上变性 多数蛋白质不能忍受 60 80 C 洗涤剂洗涤剂瓦解细胞膜 对 DNA 无影响 蛋白酶蛋白酶水解蛋白质 3 DNA 二苯胺二苯胺 沸水浴沸水浴 蓝色蓝色 2 1 选取 DNA 含量较高的生物组织 2 动物 加蒸馏水 搅拌 过滤 收集滤液 植物 切碎 加洗涤剂 食盐洗涤剂 食盐 搅拌研磨 过滤 收集滤液 3 纯化 DNA 控制 NaCl 浓度 2mol L 过滤不溶物质 0 14mol L 析出 DNA 过滤 溶液中杂质 2mol L 溶解 DNA 直到丝状物不再增加为止 滤液中加嫩肉粉嫩肉粉 木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶 滤液 60 75 C 恒温水浴箱恒温水浴箱保温 严格控制温度范围 4 析出鉴定 过滤 加与滤液体积相等 冷却体积相等 冷却的 95 酒精溶液酒精溶液 静置 白色丝状物白色丝状物 用玻璃棒沿一个方向沿一个方向搅拌卷起 滤纸吸去水分 2mol LNaCl 溶液溶解 二苯胺试剂 混合均匀 沸水加热 冷却 变蓝 3 1 血液 加柠檬酸钠柠檬酸钠 防止凝固 2 加洗涤剂时 轻缓 柔和 否则容易产生大量泡沫 加入酒精 搅拌 以免加剧 DNA 分子破裂 不能形成絮状沉淀 3 二苯胺试剂现配现用现配现用 溶于冰醋酸 加浓硫酸 棕色瓶保存 临用前加 2 乙醛溶液 4 提取高纯度 DNA CTAB SDS 吐温 吐温 4 1 蒸馏水使鸡血细胞破裂 低渗液体 水分进入细胞胀破 搅拌加速细胞膜 核膜破 裂 2 洗涤剂 离子去污剂 溶解细胞膜 有利于 DNA 释放 食盐 有利于 DNA 溶解 尼龙布过滤 3 研磨目的 破碎细胞壁 使核物质容易溶解在 NaCl 溶液中 不充分 DNA 提取量减少 导致看不到鉴定效果 4 滤液中含核蛋白多糖 RNA 5 反复溶解析出 DNA 能除去与 DNA 溶解度不同的多种杂质 6 方案原理 一 DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同 二蛋白酶分解蛋白质 三蛋白质 DNA 变性温度不同 5 2 多聚酶链式反应多聚酶链式反应 1 1 分析细胞内参与 DNA 复制的各种组成成分与反应条件 2 DNA 羟基末端 3 端 磷酸基团末端 5 端 DNA 合成方向 从子链从子链 5 端向端向 3 端延伸端延伸 3 变性 80 100 C 双链解体 4 条件 DNA 模板模板 两种引物两种引物 四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸 TaqDNA 聚合酶聚合酶 控制温度反复进行 5 一般经历三十多次循环 步骤 94 C 变性变性 55 C 复性复性 72 C 延伸延伸 6 循环之前进行一次预变性预变性 增加大分子模板 DNA 彻底变性的概率 7 两种引物使 DNA 聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的 DNA 序列 使这段固定 长度的序列呈指数扩增指数扩增 8 微量离心管 0 5mL 微量移液器 PCR 仪或三个恒温水浴锅来回转移 2 2 1 使用前高压灭菌 避免外源 DNA 因素的污染 2 缓冲液和酶分装 20 C 储存 使用前在冰块上缓慢融化 3 每吸取一次 移液器枪头必须更换 盖严离心管后 用手指轻轻弹击侧壁 使混合均匀 离心机 使反应液集中在离心管底部 4 DNA 在 260nm 紫外线波段紫外线波段有一强烈吸收峰 DNA 含量鉴定 50 倍稀释 蒸馏水对照 波长 260nm 处 紫外分光光度计读数调零 加入比色杯中 测定 光吸收值 计算含量 50 标准厚度 1cm 比色杯中 OD206 为 1 相当于 50 g mL 双链 DNA DNA 含量 含量 g mL 50 读数读数 稀释倍数稀释倍数 5 PCR 突出优点 快速 高效 灵活 易于操作 5 3 血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离 1 1 凝胶色谱法凝胶色谱法 分离蛋白质 相对分子质量 凝胶 多孔球体 多糖类化合物多糖类化合物 葡聚葡聚 糖糖 琼脂糖琼脂糖 较小的易进入通道 路程长 速度慢 较大的在外部移动 短 快 洗脱 2 一定范围内 缓冲溶液缓冲溶液 维持 PH 基本不变 1 2 种缓冲剂溶解于水 调节使用比例 体外溶液 PH 与体内基本一致 3 电泳 带电粒子在电场作用下发生迁移 生物大分子一定 PH 下带上正负电 向着与所带电荷相反相反的电极移动 带电性质不同 分子大小 形状不同 产生不同迁移速不同迁移速 度度 4 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 测定蛋白质分子量 SDS 聚丙烯酰胺电泳聚丙烯酰胺电泳 迁移率取决于所带净电荷的多少净电荷的多少以及分子的大小分子的大小 加入 SDS 消除净电荷对迁移率的影响 使蛋白质发生完全变性变性 解聚成单条 测定结果只是单条肽链单条肽链的分子量 SDS 负电荷大大超过原有分子量 电泳迁移率完全取决于分子大小分子大小 2 蛋白质的提取和分离 样品处理样品处理 粗分离粗分离 纯化纯化 纯度鉴定纯度鉴定 1 血液中 90 是血红蛋白 四条肽链 两条两条 肽链肽链 两条两条 肽链肽链 每条环绕一个亚铁血红素集团亚铁血红素集团 携带一分子氧或二氧化碳 含有血红素呈红色 2 红细胞洗涤洗涤 去除杂蛋白 有利于分离纯化 采集的血样及时分离红细胞 低速短时间离心 胶头吸管吸出上层透明黄色血浆上层透明黄色血浆 下层暗红色红细胞液体下层暗红色红细胞液体倒入烧杯 五倍体积 0 9 生理盐水生理盐水 搅拌 离心 重复三次 直至上清液不再呈现黄色上清液不再呈现黄色 表明已经洗涤干净 3 血红蛋白释放 加蒸馏水蒸馏水至原体积 40 甲苯甲苯 磁力搅拌器磁力搅拌器 红细胞破裂 4 分离血红蛋白溶液 离心管离心管 2000r min 4 层层 从上到下 无色透明甲苯甲苯层 白色薄层 固体 脂溶性物质脂溶性物质沉淀层 红色透明液体 血红蛋白水溶液血红蛋白水溶液 其他杂质暗红色沉淀物暗红色沉淀物 滤纸过滤过滤 除去脂溶性物质 分液漏斗分液漏斗 静置 分出下层红色透明液体 5 透析透析 透析袋 20mmol L 磷酸缓冲液磷酸缓冲液 pH 为 7 0 6 凝胶色谱柱凝胶色谱柱 打孔 刀切出凹穴 移液管上部不得超出橡皮胶凹穴底面 尼龙网 圆片 100 目尼龙纱 下端出口部连接尼龙管 螺丝夹控制开关 收集器 7 装填装填 垂直固定 根据色谱柱内体积计算所需的凝胶量凝胶量 交联葡聚糖凝胶交联葡聚糖凝胶 G 凝胶交联程度 膨胀程度 分离范围 75 凝胶得水值 蒸馏水充分溶胀蒸馏水充分溶胀 凝胶悬浮液 尼龙管打开 一次性缓慢一次性缓慢倒入 轻轻敲动轻轻敲动 使装填均匀 不能有气泡存在不能有气泡存在 有气泡须重装 完成后 立即连接缓冲液洗脱瓶洗脱瓶 50cm 操作压 20mmol L 磷酸缓冲液磷酸缓冲液 充分洗涤平衡 使装填紧密 8 样品加入洗脱 打开流出口 缓冲液缓慢下降缓慢下降到与凝胶面平齐平齐 关闭出口 3 吸管吸管 1mL 样品加到顶端 不要破坏凝胶面 打开出口 渗入凝胶床内 样品完全进入完全进入 关闭出口 20mmol L 磷酸缓冲液磷酸缓冲液 适当高度 缓冲液洗脱瓶 打开出口 洗脱洗脱 待红色蛋白质接近底端红色蛋白质接近底端 试管收集试管收集流出液 每 5mL 一管 连续收集 3 1 洗涤次数过少 无法除去血浆蛋白 离心速度过高 时间过长 使白细胞等一同沉淀 达不到分离效果 2 加速凝胶膨胀 加洗脱液湿凝胶洗脱液湿凝胶 沸水浴加热沸水浴加热 逐渐升温至接近沸腾接近沸腾 节省时间 除去微生物 排除胶粒内的空气 3 气泡会搅乱蛋白质的洗脱次序 降低分离效果 不能发生洗脱液流干 露出凝胶颗粒 4 蛋白质分离时 红色区带在洗脱过程均匀一致地移动红色区带在洗脱过程均匀一致地移动 说明色谱柱制作成功 1 1 果酒果醋制作果酒果醋制作 1 1 果酒 酵母菌酵母菌 异养型 兼性厌氧型兼性厌氧型 发酵温度 18 25 C 真菌 真核 出芽生殖 有氧时 有氧呼吸 大量繁殖 20 C 无氧时 酒精发酵 C6H12O6 2C2H5OH 2CO2 2 葡萄酒自然发酵 附着在葡萄皮上的野生型酵母菌附着在葡萄皮上的野生型酵母菌 色素进入发酵液 呈深红色 3 缺氧 酸性缺氧 酸性发酵液中 酵母菌可繁殖生长 大多数不适应 4 秋季生长繁殖 冬季休眠 春夏旺盛 土壤土壤 传播到葡萄上 2 1 果醋 醋酸菌醋酸菌 异养型 好氧型好氧型 30 35 C 原核生物 二分裂生殖 2 对氧气的含量特别敏感敏感 氧气 糖源充足 糖分解为醋酸 缺糖源时 乙醇分解为乙醛乙醛 变为醋酸 C2H5OH O2 CH3COOH H2O 3 挑选葡萄 冲洗 榨汁 酒精发酵 果酒 醋酸发酵 果醋 4 带盖的瓶子 12h 拧松拧松一次 放出 CO2 拧紧 产生酒精后 打开 盖纱布纱布 醋发酵 5 充气口 醋酸发酵 连接充气泵 排气口 排出 CO2 防止爆裂 长而弯曲的胶管 防止空气微生物污染 出料口 取样取样 制酒时关闭充气口 制醋时 输入氧气 先通气后密封 有氧呼吸大量繁殖 无氧呼吸酒精发酵 3 1 选择新鲜的葡萄 冲洗 除去枝梗除去枝梗 2 防止发酵液污染 榨汁机清洗干净 晾干 发酵瓶 70 酒精酒精消毒 装入后封闭充气口 3 留有 1 3 的空间 暂时储存 CO2 控制好温度 发酵时间 4 重铬酸钾重铬酸钾检测酒精 酸性呈灰绿色灰绿色 5 先冲洗再除去枝梗 避免除去枝梗时葡萄破损 被杂菌污染 1 2 腐乳制作腐乳制作 1 1 毛霉毛霉 异养型 好氧型好氧型 15 18 C 丝状真菌 真核 孢子生殖 2 发达白色菌丝 蛋白酶蛋白酶分解蛋白质 脂肪酶脂肪酶分解脂肪为甘油和脂肪酸 2 1 毛霉生长 含水量含水量 70 豆腐豆腐 笼屉 空气中的毛霉孢子 现代严格无菌严格无菌 避免其他杂菌污染 保证产品质量 2 加盐腌制加盐腌制 分层分层整齐排放瓶中 逐层加盐 层数加高增加盐量 接近瓶口表面铺厚接近瓶口表面铺厚 加盐 析出水分 使其变硬 不会过早酥烂 抑制微生物生长 避免变质 3 配制卤汤卤汤 酒 香辛料酒 香辛料 加酒 12 抑制微生物生长 使具有独特香味 香辛料 调制风味 防腐杀菌 4 密封腌制密封腌制 3 1 控制好材料用量 盐浓度过低 不足以抑制微生物生长 过高影响口味 2 酒含量过低 不足以抑制 过高成熟时间延长 3 防止杂菌污染 玻璃瓶洗刷干净 沸水消毒沸水消毒 4 装瓶迅速小心 胶条封口 最好将瓶口先通过酒精灯火焰通过酒精灯火焰 防止瓶口被污染 4 1 盐可防止杂菌污染 避免豆腐腐败 2 含水量过高豆腐不易成型 3 皮是前期发酵时表面生长的匍匐菌丝 使腐乳成形 对人体无害 4 越接近瓶口 杂菌污染越有可能 铺厚可防止杂菌污染 5 品质影响因素 菌种 杂菌 温度 发酵时间 调味品 1 3 泡菜制作泡菜制作 1 1 乳酸菌乳酸菌 异养型 厌氧型厌氧型 原核 二分裂生殖 无氧时分解葡萄糖为乳酸 2 亚硝酸盐亚硝酸盐 白色白色粉末 易溶易溶于水 食物添加剂 0 3 0 5g 中毒 3g 死亡 绝大部分随尿排出 特定条件下 亚硝胺亚硝胺 致癌致癌 致畸 致变异 3 选择原料 处理 称取食盐 配制盐水 泡菜盐水 加入调味料 装坛 发酵 成品 测定亚硝酸盐含量 4 清水 盐清水 盐 4 1 配制盐水 煮沸冷却煮沸冷却 新鲜蔬菜混合均匀 装到半坛半坛 香辛料香辛料 盐水没过全部菜料盐水没过全部菜料 盖好 坛盖边沿水槽注满水坛盖边沿水槽注满水 保证无氧环境 经常向水槽中补充水补充水 发酵时间由室内温度室内温度决定 5 盐酸盐酸酸化 亚硝酸盐 对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸 重氮化反应重氮化反应 N 1 萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐 形成红色染料红色染料 与已知浓度的标准显色液标准显色液 目测目测比较估算含量 2 1 泡菜坛泡菜坛火候好 无裂纹 无砂眼 坛沿深 盖子吻合好盖子吻合好 检查 坛口向上压入水中坛口向上压入水中 有无渗水 2 控制好腌制时间 温度 食盐用量腌制时间 温度 食盐用量 温度过高 用量过低 时间过短 细菌大量繁殖 亚硝酸盐增加 10d 后 亚硝酸盐含量开始下降下降 3 测定亚硝酸盐含量 1 配制溶液 4mg mL 对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液 对氨基苯磺酸 20 盐酸 2mg mL N 1 萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐 溶于水 避光保存 5 g mL 亚硝酸盐溶液亚硝酸盐溶液 水溶解 定容 提取剂提取剂 氯化镉 氯化钡 溶于蒸馏水 浓盐酸调 PH 为 1 氢氧化钠乳液氢氧化钠乳液 2 5mol L 氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 2 制备标准显色液标准显色液 刻度移液管 0 20 0 40 0 60 0 80 1 00 1 50mL 亚硝酸盐溶液亚硝酸盐溶液 1 2 3 4 5 7 5 g 亚硝酸盐 50mL 比色管 空白对照 2 0mL 对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液 混匀 静置 1 0mL N 1 萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐 蒸馏水 混匀 观察颜色梯度变化颜色梯度变化 3 制备样品处理液样品处理液 3 坛泡菜 标记 泡菜 榨汁机粉碎粉碎 过滤过滤 汁液 转移到容量瓶 蒸馏水蒸馏水 提取剂提取剂 摇床振荡振荡 氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液 蒸馏水定容蒸馏水定容 过滤过滤 转移 氢氧化钠乳液氢氧化钠乳液 定容 过滤 溶液变得无色透明无色透明 4 比色 吸取滤液 对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液 N 1 萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐 定容 静置 比较 找出最相近最相近 记录计算 每 2d 测一次 4 1 含有抗生素牛奶不能发酵成酸奶 杀菌 2 少吃腌制蔬菜 过久变质 硝酸盐被微生物还原成亚硝酸盐 危害人体 3 泡菜坛内一层白膜 产膜酵母繁殖 2 1 微生物实验室培养微生物实验室培养 1 1 培养基 液体培养基 固体培养基 琼脂琼脂 微生物表面生长 形成肉眼可见的菌 落 合成培养基 天然培养基 成分不明 选择培养基 鉴别培养基 5 水 碳源 氮源 无机盐水 碳源 氮源 无机盐 pH 特殊营养物质 氧气 特殊营养物质 氧气 单质碳不能作为碳源单质碳不能作为碳源 只有固氮微生物才能利用只有固氮微生物才能利用 N2 乳酸杆菌 维生素 霉菌霉菌 酸性酸性 细菌细菌 中性或碱性中性或碱性 厌氧微生物 无氧环境 2 纯净培养物 关键 防止外来杂菌入侵防止外来杂菌入侵 无菌技术 空间 衣着 手消毒消毒 器皿 接种用具 培养基灭菌灭菌 实验操作必须在酒精灯火焰附近进行酒精灯火焰附近进行 避免避免与周围物品相接触相接触 3 消毒 较温和较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分部分微生物 煮沸煮沸消毒法 100 C5 6min 巴氏巴氏消毒法 不耐高温不耐高温液体 70 75 C 煮 30min 80 C15min 75 酒精酒精消毒双手 氯气氯气消毒水源 灭菌 强烈强烈理化因素杀死物体内外所有所有微生物 芽孢 孢子 灼烧灼烧灭菌 酒精灯火焰充分燃烧层酒精灯火焰充分燃烧层 迅速彻底迅速彻底 干热干热灭菌 干热灭菌箱干热灭菌箱 160 170 C 耐高温 需保持干燥耐高温 需保持干燥的物品 高压蒸汽高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅 水加热煮沸加热煮沸 冷空气排出 密闭 100kPa 121 C 紫外线紫外线照射 喷洒消毒液消毒液 石炭酸 酶酚皂溶液 2 1 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算计算 100mL 称量称量 准确 牛肉膏黏稠 玻璃棒挑取玻璃棒挑取 称量纸称量纸 牛 蛋白胨吸潮吸潮 迅速迅速 及时盖上瓶盖 溶化溶化 牛肉膏 称量纸一同放入一同放入烧杯 少量水 加热 分离 玻璃棒取出纸 蛋白胨 氯化钠蛋白胨 氯化钠 搅拌 溶解 琼脂琼脂 加热熔化 搅拌 防止琼脂糊底烧杯破裂 蒸馏水蒸馏水至 100mL 灭菌灭菌 培养基培养基 转移到锥形瓶锥形瓶 棉絮 牛皮纸 皮筋勒紧 高压灭菌锅高压灭菌锅 培养皿培养皿 旧报纸旧报纸包紧 干热灭菌箱干热灭菌箱 倒平板倒平板 冷却冷却到 50 C 左右左右 酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近 培养皿放好 右手锥形瓶右手锥形瓶 左手拔棉絮左手拔棉絮 右手锥形瓶 瓶口迅速通过火焰瓶口迅速通过火焰 左手打开培养皿左手打开培养皿 稍大于瓶口的缝隙 右手倒入培养基右手倒入培养基 左手立即盖上左手立即盖上 平板冷却凝固冷却凝固 倒过来放置倒过来放置 皿盖下皿底上 2 纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌 平板划线法平板划线法 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 使聚集在一起的微生物分散成单个细菌 在培养基表面形成单个菌落 以便纯化菌种 平板划线法 接种环灼烧冷却接种环灼烧冷却 火焰旁打开菌液试管棉塞 试管口通过火焰试管口通过火焰 接种环沾取一环沾取一环 试管口通过火焰盖上试管口通过火焰盖上 左手打开培养皿缝隙左手打开培养皿缝隙 右手接种环右手接种环迅速伸入 划三到五条平行线三到五条平行线 盖上 不要划破培养基 灼烧接种环冷却灼烧接种环冷却 第一区域划线末端往第二划线 三四五 最后一区不要与第一区相连最后一区不要与第一区相连 平板倒置平板倒置 培养箱培养箱培养 稀释涂布平板法 系列稀释系列稀释 各 9mL 水水 6 试管 灭菌灭菌 101 106编号编号 移液管移液管 1mL 菌液菌液 注入 101 移液管吹吸三次吹吸三次 充分混匀 从 101吸取吸取 1mL 注入 102 重复 移液管灭菌移液管灭菌 火焰附近 1 2cm 处操作 涂布平板涂布平板 涂布器涂布器 浸入 70 酒精酒精 取少量菌液少量菌液 不超过 0 1mL 滴加培养基培养基上 沾有少量酒精沾有少量酒精涂布器 引燃引燃 酒精燃尽后 冷却冷却 均匀涂布均匀涂布表面 可转动培养皿转动培养皿 取出时让多余酒精滴尽滴尽 再引燃 不要将过热涂布器放入酒精不要将过热涂布器放入酒精 以免引燃酒精 接种后 未接种 37 C 恒温箱恒温箱 3 菌种保藏 临时保藏临时保藏 固体斜面培养基固体斜面培养基 4 C 冰箱冰箱 每 3 6 个月 转移转移到新鲜 保存时间不长 菌种容易被污染或产生变异 6 长期保存长期保存 甘油管藏甘油管藏 3mL 甘油瓶甘油瓶 1mL 甘油甘油 灭菌灭菌 1mL 菌液 混匀 20 C 冷冻箱冷冻箱 3 1 灭菌冷却 用手触摸锥形瓶 感觉温度下降到刚好不烫手刚好不烫手时 开始倒平板 2 瓶口通过火焰 灼烧灭菌灼烧灭菌 防止瓶口微生物污染培养基 3 平板冷凝后 皿盖上会凝结水珠 凝固后的培养基表面湿度也比较高 平板倒置 使培养基表面水分更好地挥发 防止皿盖上水珠落入培养基造成污染 4 培养基溅在皿盖和皿底之间 空气中的微生物可能在这里滋生 最好不再使用 5 第一次灼烧接种环 避免可能存在的微生物污染培养基 每次划线前灼烧 杀死上次划线后残留的菌种 使下次划线菌种直接来源于上次划线末端 从而通过划线次数增加 每次划线时菌种数目减少 以便得到单个细菌菌落 划线结束后灼烧 杀死残留菌种 以免污染周围环境 感染操作者 6 灼烧冷却再划线 以免温度太高 杀死菌种 7 从末端开始划线 线条末端细菌数目少 能使每次划线菌种数目随着划线次数增多而减 少 最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落 8 应从各个细节保证无菌 所有操作在酒精灯附近进行 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管头不要接触其他任何物体 吸管要放在酒精灯附近 9 营养是指生物摄取 利用营养物质的过程 营养物质是指维持机体生命活动 保证发育 生殖所需的外源物质 人及动物的营养物质 水 无机盐 糖类 脂质 蛋白质 维生素六类 植物的营养物质 矿质元素 水 二氧化碳等三类 微生物的营养物质 水 无机盐 碳源 氮源及特殊营养物质五类 10 将未接种的培养基在恒温箱中保温 1 2 天 无菌落生长 说明培养基的制备是成功的 否则需要重新制备 2 2 土壤细菌分离与计数土壤细菌分离与计数 1 1 寻找目的菌株时 必须根据它对生存环境的要求对生存环境的要求 到相应的环境中寻找 微生物筛选微生物筛选 人为提供有利于有利于目的菌株生长的条件 同时抑制或阻止抑制或阻止其他微生物生长 选择培养基选择培养基 碳源 葡萄糖 尿素 氮源 尿素 只有能合成脲酶能合成脲酶的微生物才能生长 2 统计菌落数目统计菌落数目 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 统计样品活菌数目 稀释度足够高稀释度足够高 一个菌落来源于一个活菌 统计平板上的菌落数平板上的菌落数 推测 选择菌落数为 30 300 统计的菌落数往往比活菌实际数目低低 统计结果用菌落数表示统计结果用菌落数表示 血球计数板计数法血球计数板计数法 显微镜显微镜直接计数 不能区分死活 不适于运动细菌 个体微小看不到 3 设置对照设置对照 排除实验组中非测试因素对实验结果的影响 提高可信度 2 1 土壤取样土壤取样 70 90 细菌 酸碱度接近中性中性的潮湿潮湿土壤 3 8cm 土壤层 铲去表层铲去表层 土土 2 样品稀释样品稀释 稀释程度直接影响菌落数目稀释程度直接影响菌落数目 一定稀释范围一定稀释范围的样品液进行培养 保证菌落数在 30 300 之间 便于计数 测定细菌数量 104 105 106 放线菌 103 104 105 真菌 102 103 104 3 微生物培养观察培养观察 细菌 30 37 C1 2d 放线菌 25 28 C5 7d 霉菌 25 28 C3 4d 每隔 24 小时统计一次 选取数目稳定时数目稳定时的为结果 防止因培养时间不足而遗漏菌落数目 同种微生物一定条件下 稳定的菌落特征稳定的菌落特征 形状 大小 隆起程度 颜色 表格表格 形态 标点状 圆形 丝状 不规则状 假根状 纺锤状 突起 扁平 隆起 凸透镜状 垫状 脐突状 边缘 完整 波状 裂片状 啮蚀状 丝状 卷曲状 7 3 1 无菌无菌操作 铁铲 信封使用前灭菌灭菌 火焰旁称取土壤 倒入锥形瓶 塞好 全部操作在火焰旁火焰旁进行 2 做好标记标记 标记培养皿 培养基种类 培养日期 平板上培养样品的稀释度 3 耗时太长 事先制定计划事先制定计划 提高工作效率 4 每克样品中的菌株数每克样品中的菌株数 C V M C 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V 涂布平板时所用稀释液体积 mL M 稀释倍数 2 3 分解纤维素微生物分离分解纤维素微生物分离 1 1 纤维素纤维素 棉花棉花中含量最高 复合酶复合酶 C1酶 酶 CX酶 葡萄糖苷酶酶 葡萄糖苷酶 前两种分解纤维素为纤维二糖纤维二糖 第三种分解纤维二糖为葡萄糖葡萄糖 滤纸条滤纸条 醋酸醋酸 醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液 纤维素酶纤维素酶 70 80U mL 振荡振荡 140r min 滤纸完全分解完全分解 2 刚果红染色法刚果红染色法 筛选纤维素分解菌纤维素分解菌 颜色反应颜色反应 刚果红刚果红 CR 染料 纤维素纤维素 红色复合物红色复合物 不不和纤维二糖 葡萄糖发生这种反应 形成以纤维素分解菌为中心的透明圈以纤维素分解菌为中心的透明圈 2 土壤取样土壤取样 选择培养选择培养 梯度稀释梯度稀释 涂布鉴别涂布鉴别培养基上 挑选挑选产生透明圈菌落 发酵培养发酵培养 1 土壤取样 富含纤维素环境 多年落叶腐殖土多年落叶腐殖土 多年积累枯枝败叶多年积累枯枝败叶 滤纸滤纸埋在土里 2 选择培养 液体液体培养基 碳源碳源 纤维素纤维素 对照 牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 土样 30mL 选择培养基选择培养基 锥形瓶 摇床 振荡振荡 直至培养液变混浊变混浊 吸取 转移 新鲜新鲜选择培养基 振荡变混浊 吸取 稀释涂布稀释涂布 鉴别培养基鉴别培养基 3 刚果红染色法 长出菌落 1mg mLCR 溶液 倒去 CR 1mol LNaCl 溶液溶液 倒掉 NaCl 10mg mLCR 溶液 灭菌灭菌 培养基 200 1CR 溶液加入 混匀 倒平板倒平板 长出菌落 4 发酵培养 纤维素酶纤维素酶 液体发酵 固体发酵液体发酵 固体发酵 测定方法 纤维素酶分解滤纸后产生的葡萄糖定量测定葡萄糖定量测定 3 1 富含纤维素环境 生物与环境的相互依存关系 纤维素分解菌含量相对较高 获得目的微生物几率较高 2 滤纸埋在土壤中 使纤维素分解菌相对聚集 人工设置生存环境 深 10cm 腐殖土壤 3 两种染色法比较 优点 颜色反应基本为纤维素分解菌 缺点 操作繁琐 使菌落之间混杂 优点 操作简单 不存在混杂 缺点 含淀粉物质 假阳性反应 有些微生物降解色素 不易区分 4 选择培养浓缩所需微生物 选择培养条件下 能适应这种营养条件的微生物迅速繁殖 不适应的被抑制 3 1 菊花组织培养菊花组织培养 1 1 细胞分化细胞分化 个体发育 形态 结构 功能 稳定性差异 2 离体离体植物组织或细胞 分裂 愈伤组织愈伤组织 排列疏松无规则排列疏松无规则 高度液泡化高度液泡化 无定形无定形 薄壁细胞薄壁细胞 脱分化脱分化 再分化再分化 3 植物材料的选择植物材料的选择直接关系到实验的成败 年龄 保存时间的长短 菊花 未开花植株的茎上部新萌生的侧枝未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 4 MS 培养基培养基 液体液体 大量元素 微量元素 有机物 甘氨酸 维生素 蔗糖蔗糖 植物激植物激 素素 生长素 细胞分裂素生长素 细胞分裂素 启动细胞分裂 脱分化 再分化关键性激素 加强加强趋势 用量比例用量比例影响植物细胞的发育方向发育方向 生 细 根分化 生 细 芽分化 生 细 愈伤组织 8 pH 5 8 左右 温度 18 22 C 每日日光灯照射 12h 2 1 制备制备 MS 培养基培养基 4 C 保存 培养基母液培养基母液 配制母液 大量元素浓缩大量元素浓缩 10 倍倍 微量元素浓缩微量元素浓缩 100 倍倍 常温常温保存 激素 维生素 用量较小的有机物 1mg mL 根据浓缩倍数计算计算用量 配制培养基 1L 培养基 琼脂琼脂 加 800mL 蒸馏水蒸馏水 加热熔化加热熔化 蔗糖蔗糖 母液母液依次加入 蒸馏水定容蒸馏水定容 调节 pH 分装分装 锥形瓶 50mL 或或 100mL 菊花茎段培养比较容易 不必添加植物激素不必添加植物激素 灭菌 培养基 器械 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 2 外植体消毒外植体消毒 生长旺盛的嫩枝生长旺盛的嫩枝 流水冲洗流水冲洗 少许洗衣粉少许洗衣粉 软刷轻轻刷洗轻轻刷洗 冲洗冲洗 无菌吸水纸吸干无菌吸水纸吸干表面 70 酒精酒精 摇动摇动 2 3 次 立即取出 无菌水清洗无菌水清洗 吸干吸干 放入 0 1 氯化汞溶液氯化汞溶液中 取出 清洗清洗 3 次 漂净消毒液漂净消毒液 考虑消毒效果 植物耐受能力消毒效果 植物耐受能力 3 接种接种 70 酒精酒精 擦拭擦拭工作台 点燃酒精灯点燃酒精灯 酒精灯旁进行 火焰灼烧灭菌 锥形瓶左侧锥形瓶左侧 经消毒的菊花茎段 无菌培养皿无菌培养皿 切成小段切成小段 左手锥形瓶左手锥形瓶 右手拉开绳子右手拉开绳子 右手手心攥封口膜右手手心攥封口膜 避免封口膜接触瓶口一面被污染 左手瓶 瓶口旋转通过火焰瓶口旋转通过火焰 右手镊子右手镊子 夹取茎段 插入插入培养基 注意方向 不要倒插不要倒插 每瓶 6 8 块块 重新扎好扎好 4 培养培养 无菌箱无菌箱 定期消毒定期消毒 18 22 C 日光灯照射 12h 5 移栽移栽 生根生根 打开封口膜 培养间培养间 流水清洗清洗根部 消过毒蛭石或珍珠岩蛭石或珍珠岩 长壮 土壤土壤 6 栽培栽培 记录生长情况 3 1 MS 培养基中 大量元素 微量元素提供所需无机盐 蔗糖提供碳源 维持细胞渗 透压 有机物满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求 微生物培养基以有机营养有机营养为主 MS 培养基以大量无机营养大量无机营养为主 2 进行无性繁殖无性繁殖的植物 容易进行组织培养 3 2 月季花药培养月季花药培养 1 1 被子植物 雄蕊雄蕊 花丝 花药花丝 花药 花药囊状结构囊状结构 花粉花粉 花粉母细胞减数分裂花粉母细胞减数分裂 单倍体的生殖细胞单倍体的生殖细胞 花粉发育 小孢子四分体时期小孢子四分体时期 单核期单核期 双核期双核期 1 个小孢子母细胞个小孢子母细胞 减数分裂减数分裂 小孢子四分体时期 4 个单倍体细胞个单倍体细胞连在一起 单核期 彼此分离分离 4 个单细胞核花粉粒个单细胞核花粉粒 浓厚原生质浓厚原生质 核位于细胞中央中央 单核居中期单核居中期 长大 核由中央移向一侧由中央移向一侧 单核靠边期单核靠边期 分裂分裂 1 个生殖细胞核 个生殖细胞核 1 个花粉管细胞核个花粉管细胞核 形成两个细胞两个细胞 1 个生殖细胞 个生殖细胞 1 个营养细胞个营养细胞 生殖细胞生殖细胞再分裂分裂一次 2 个精子个精子 2 成熟花粉粒两类两类 二核花粉粒二核花粉粒 花粉管细胞核 生殖细胞核 精子在花粉管花粉管中形成 三核花粉粒三核花粉粒 成熟前成熟前生殖细胞分裂分裂两个精子 两个精子核 一个花粉管核 营养核 同一生殖细胞分裂形成的 2 个精子基因组成完全相同基因组成完全相同 3 绿色开花植物 双受精双受精 种子胚珠 胚乳受精极核 个极核 精子 胚受精卵 精子 卵细胞 N3 2 N2 母本体细胞 珠被 种皮 子房 果实 子房壁 果皮 4 产生花粉植株两种途径两种途径 胚状体胚状体阶段发育 诱导培养基形成愈伤组织愈伤组织 诱导分化 没有绝对的界限没有绝对的界限 取决于激素的种类及其浓度配比激素的种类及其浓度配比 细胞胚细胞胚 胚状体 体细胞体细胞转变 形态形态上与合子非常相似 发育过程发育过程与合子胚类似 9 花粉胚花粉胚 单倍体性细胞单倍体性细胞产生 也可发育 单倍体植株 5 主要影响因素 材料的选择 培养基的组成材料的选择 培养基的组成 同一种 亲本植株的生理状况生理状况 花期早期的花药更容易 月季初花期初花期 五月初到五月中旬五月初到五月中旬 选择合适的花粉发育时期 某一时期对离体刺激敏感对离体刺激敏感 单核靠边期单核靠边期 成功率最高 单核期之前质地幼嫩 极易破碎 之后花瓣松动 消毒困难 选择完全未开放的花蕾完全未开放的花蕾 亲本的生长条件 材料的低温预处理 接种密度 2 1 材料选取材料选取 镜检镜检 确定是否处于合适的发育期 醋酸洋红法醋酸洋红法 焙花青焙花青 铬矾法铬矾法 花粉细胞核不易着色植物花粉细胞核不易着色植物 蓝黑色蓝黑色 醋酸洋红法 花药 载玻片载玻片 一滴一滴 1 醋酸洋红醋酸洋红 捣碎捣碎花药 盖玻片盖玻片 显微镜显微镜检查 醋酸洋红 45 醋酸 煮沸 洋红 加热回流 冷却至 50 C 过滤 焙花青 铬矾法 花药 卡诺氏固定液卡诺氏固定液 固定 取出 载玻片载玻片 焙花青焙花青 铬矾溶液铬矾溶液 显微镜显微镜 卡诺氏固定液 无水酒精 冰醋酸 3 1 混匀 焙花青 铬矾 铬钾矾 蒸馏水 焙花青 混匀 加热至沸腾 冷却 过滤 蒸馏水定容 2 材料消毒消毒 花蕾 70 酒精浸泡酒精浸泡 取出 无菌水清洗无菌水清洗 无菌吸水纸无菌吸水纸 0 1 氯化汞溶液氯化汞溶液 无菌水冲洗无菌水冲洗 3 接种培养接种培养 无菌无菌条件下 除去萼片 花瓣除去萼片 花瓣 花药接种接种 培养基 剥离花药时 尽量不损伤花药尽量不损伤花药 否则接种后容易从受伤部分产生愈伤组织 彻底去除花丝彻底去除花丝 与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 每瓶 7 10 个个 25 C 不需要光照不需要光照 幼小植株才需要光照幼小植株才需要光照 花药开裂开裂 愈伤组织或胚状体愈伤组织或胚状体 愈伤组织及时转移愈伤组织及时转移 分化培养基分化培养基 再生植株 胚状体胚状体 尽快将幼小植株分开尽快将幼小植株分开 分别移植分别移植 培养基 花粉培养 特别是通过愈伤组织愈伤组织形成的花粉植株 染色体组数目常会发生变化染色体组数目常会发生变化 鉴定筛选鉴定筛选 4 1 果胶酶果汁生产果胶酶果汁生产 1 1 果胶果胶 植物细胞壁细胞壁和胞间层胞间层的组成成分 半乳糖醛酸半乳糖醛酸聚合 高分子化合物高分子化合物 不溶于水不溶于水 影响出汁率 使果汁浑浊浑浊 2 果胶酶果胶酶 瓦解植物细胞壁和胞间层 分解果胶为可溶性可溶性的半乳糖醛酸 澄清澄清 总称总称 3 酶的活性活性 酶催化催化一定化学反应的能力 反应速度反应速度 单位时间单位时间内 单位体积单位体积中反应物的减少量反应物的减少量或产物的增加量产物的增加量 温度 温度 pH 酶的抑制剂 酶的抑制剂 4 控制好酶的用量酶的用量 使果胶酶得到充分的利用 节约成本 苹果泥苹果泥 2 1 一恒定温度设置 pH 梯度梯度 一恒定 pH 设置温度梯度温度梯度 30 35 40 45 50 55 60 65 70 C 5 6 7 8 9 2 搅拌搅拌制苹果泥 分装分装苹果泥 果胶酶 恒温水浴保温恒温水浴保温 设置梯度梯度 加果胶酶酶 过滤过滤果汁 3 碘液碘液检测 是否变蓝 酶是否具有活性 苹果汁体积苹果汁体积 果汁澄清程度果汁澄清程度 4 果胶酶的最适用量最适用量 酶用量增加 过滤到得果汁体积体积增加 则酶用量不足 当酶用量增加到某个值时 再增加 体积不再改变 则酶用量足够 3 1 先将苹果切成小块切成小块 放入榨汁机 加适量水 搅拌 橙子 不必去掉橙皮不必去掉橙皮 2 不同 pH 体积分数 0 1 NaOH 溶液和盐酸溶液和盐酸调节 3 用果胶酶处理果泥 玻璃棒不时搅拌反应混合物玻璃棒不时搅拌反应混合物 使果胶酶能充分地催化反应 4 分装恒温处理 保证底物和酶混合时的温度是相同的 避免果泥和酶混合影响混合物的 温度 进而影响酶的活性 5 大规模生产果汁 水果 榨汁 瞬间高温灭菌瞬间高温灭菌 90 C 冷却冷却 酶处理 45 C1 3h 离心处理离心处理 过滤 浓缩浓缩 瞬间高温灭菌 包装 制品 体积 温度或 pH 10 4 2 加酶洗衣粉洗涤效果加酶洗衣粉洗涤效果 1 1 加酶洗衣粉 酶制剂酶制剂 蛋白酶 脂肪酶 淀粉酶 纤维素酶蛋白酶 脂肪酶 淀粉酶 纤维素酶 复合酶复合酶 应用最广泛 效果最明显 碱性蛋白酶 碱性脂肪酶碱性蛋白酶 碱性脂肪酶 碱性蛋白酶 大分子蛋白质 血渍 奶渍 水解水解为可溶性氨基酸 小分子肽 2 酶活性影响因素 温度 酸碱度 表面活性剂温度 酸碱度 表面活性剂 3 普通普通洗衣粉中含磷磷 微生物 藻类大量繁殖 水体污染水体污染 加酶洗衣粉 降低降低表面活性剂 三聚磷酸的用量 基因工程基因工程 耐酸 耐碱 忍受表面活性剂 较高温度 特殊水溶性水溶性物质包裹 隔离层隔离层 2 1 有效控制变量有效控制变量 大烧杯 固定水量 固定大小的新布 玻璃棒搅拌洗涤玻璃棒搅拌洗涤 洗衣粉用量 天平称量 污渍污染程度保持一致污渍污染程度保持一致 滴加污染物量控制滴加污染物量控制 2 探究过程中 考虑理论层面 日常生活中的具体情况日常生活中的具体情况 30 40 50 C 3 不同类型加酶洗衣粉的洗涤效果 污染物蛋白酶洗衣粉复合酶洗衣粉普通洗衣粉 油渍 汗渍 血渍 4 3 酵母细胞固定化酵母细胞固定化 1 1 葡萄糖异构酶葡萄糖异构酶 高果糖浆高果糖浆 42 生产 葡萄糖转化为果糖葡萄糖转化为果糖 稳定性好稳定性好 持续发挥作用 酶溶解溶解于葡萄糖溶液 无法回收无法回收 2 固定化酶技术固定化酶技术 固定 颗粒状载体颗粒状载体 反应柱反应柱 柱子底端 筛板筛板 酶颗粒无法通过无法通过筛板 反应溶液自由出入自由出入 葡萄糖溶液上端注入 下端流出 反应柱连续使用半年半年 降低生产成本 提高果糖的产量和质量 3 固定化酶 固定化细胞技术固定化酶 固定化细胞技术 包埋法包埋法 细胞 化学结合法化学结合法 物理吸附法物理吸附法 酶 细胞个体大 酶个体小细胞个体大 酶个体小 个大的细胞难以被吸附或结合 个小的酶容易从包埋材料中漏出 固定的是一种酶一种酶 物理吸附法最容易最容易 对细胞活性影响最小影响最小 发酵过程变成连续酶反应 包埋法 反应物大分子物质 化学结合法 4 包埋法固定细胞 均匀包埋 不溶于水不溶于水的多孔性多孔性载体 海藻酸钠海藻酸钠 包埋酵母细胞 2 1 酵母细胞活化活化 缺水时休眠 重新恢复正常的生活状态 称量 干酵母干酵母 蒸馏水蒸馏水 玻璃棒搅拌 混合均匀 成糊状糊状 放置 2 配制 CaCl2溶液溶液 0 05mol L 无水 CaCl2 蒸馏水蒸馏水 充分溶解溶解 3 配制海藻酸钠溶液海藻酸钠溶液 海藻酸钠 水水 酒精灯加热酒精灯加热 边搅拌搅拌 调成糊状糊状 直至完全溶化完全溶化 蒸馏水定容定容 加热时用小火小火 或间断加热间断加热 4 结合结合 海藻酸钠溶液海藻酸钠溶液 冷却冷却至室温 已活化酵母细胞已活化酵母细胞 搅拌搅拌 混合均匀 注射器注射器 5 固定化固定化酵母细胞 固定速度缓慢固定速度缓慢滴加到 CaCl2溶液溶液 液滴在溶液中形成凝胶珠凝胶珠 浸泡浸泡 6 发酵发酵 凝胶珠 蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗 10 葡萄糖溶液葡萄糖溶液 锥形瓶 25 C 无菌无菌 7 海藻酸钠溶解速度较慢较慢 加热促进溶解加热促进溶解 小火间断加热 加热 取下冷却 高温会杀死酵母细胞 搅拌 加热 加热过快 海藻酸钠会发生焦糊焦糊 8 检验凝胶珠质量 用力挤压挤压不容易破裂 用力摔打摔打容易弹起 质量合格 9 凝胶珠颜色过浅 海藻酸钠偏低 固定数目较少 形状不是圆形或椭圆 偏高 10 发酵会产生酒精酒精 会看到有气泡生成 有酒味 6 1 植物芳香油的提取植物芳香油的提取 1 1 天然香料的来源 植物 动物植物 动物 不同植物的根 茎 叶 花 果实 种子根 茎 叶 花 果实 种子 2 芳香油的提取方法 蒸馏 压榨 萃取蒸馏 压榨 萃取等 11 芳香油的性质 挥发性强挥发性强 成分复杂 以萜类化合物及其衍生物萜类化合物及其衍生物为主 2 1 水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法 水蒸汽可将挥发性较强的芳香油携带出来形成油水混合物油水混合物 冷却冷却后 水油分层分层 水中蒸馏水中蒸馏 沸水沸水中加热蒸馏 水上蒸馏水上蒸馏 隔放在沸水上加热蒸馏 水汽蒸馏水汽蒸馏 利用外来高温水蒸气高温水蒸气加热蒸馏 适用于提取玫瑰油 薄荷油玫瑰油 薄荷油等挥发性强挥发性强的芳香油 不足 有些原料不适宜于水中蒸馏 如柑橘 柠檬等易焦糊 有效成分容易水解 2 压榨法压榨法 通过机械压缩力机械压缩力将液相物液相物从液固两相混合物中分离分离出来 适用于柑橘 柠檬柑橘 柠檬等易焦糊易焦糊原料的提取 3 萃取法萃取法 芳香油易溶易溶于有机溶剂 溶剂挥发溶剂挥发后得到芳香油 如石油醚 酒精 乙醚石油醚 酒精 乙醚等 原料浸泡在溶剂中 得到浸泡液 有机溶剂挥发 芳香油 适用范围广 要求原料的颗粒要尽可能细小尽可能细小 能充分浸泡充分浸泡在有机溶液中 不足 有机溶剂中的杂质影响芳香油的品质 所有仪器必须事先干燥事先干燥 保证无水无水 左边的部分通过加热进行蒸馏 中部将蒸馏物冷凝 右边的部分用来接收 安装仪器一般都按照自下而上 从左到右自下而上 从左到右的顺序 拆卸仪器的顺序 与安装时相反相反 1 固定热源 酒精灯 2 固定蒸馏瓶 使其离热源的距离适当 并且保持 蒸馏瓶轴心与铁架台的水平面垂直 3 安装蒸馏头 使蒸馏头的横截面与铁架台平行 4 连接冷凝管 保证上端出水口向上 下端进水口 向下 5 连接接液管 或称尾接管 6 将接收瓶瓶口对准尾接管的出口 常压蒸馏一般 用锥形瓶而不用烧杯作接受器 接收瓶应在实验前称重 并做好记录 7 将温度计固定在蒸馏头上 使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限处在同一水平 线上 在蒸馏瓶中加几粒沸石沸石 防止液体过度沸腾防止液体过度沸腾 打开水龙头 缓缓通入冷水 然后开始加热 加热时可以观察到 蒸馏瓶中的液体逐渐沸逐渐沸 腾腾 蒸气逐渐上升 温度计读数也略有上升略有上升 当蒸气的顶端达到温度计水银球部位时 温 度计读数急剧上升急剧上升 在整个蒸馏过程中 应保证温度计的水银球水银球上常有因冷凝作用冷凝作用而形成 的液滴液滴 控制蒸馏的时间和速度 通常以每秒每秒 1 2 滴滴为宜 分液漏斗的使用方法如下 1 首先把活塞擦干 为活塞均匀涂上一层润滑脂 切勿将 润滑脂涂得太厚或使润滑脂进入活塞孔中 以免污染萃取液 2 塞好活塞后 把活塞旋转几圈 使润滑脂分布均匀 并 用水检查分液漏斗的顶塞与活塞处是否渗漏 确认不漏水 3 将分液漏斗放置在大小合适的 并已固定在铁架台上的 铁圈中 关好活塞 将待分离的液体从上部开口处倒入漏斗 中 塞紧顶塞 注意顶塞不能涂润滑脂 4 取下分液漏斗 用右手手掌顶住漏斗顶塞并握住漏斗颈 左手握住漏斗活塞处 大拇 指压紧活塞 将分液漏斗略倾斜 前后振荡 开始振荡时要慢 5 振荡后 使漏斗口仍保持原倾斜状态 左手仍握在漏斗活塞处 下部管口指向无人处 用拇指和食指旋开活塞 使其释放出漏斗内的蒸气或产生的气体 以使内外压力平衡 这 一步操作也称做 放气 6 重复上述操作 直至分液漏斗中只放出很少的气体时为止 再将分液漏斗剧烈振荡 2 3