工艺控制的复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的影响

1 / 6工艺控制的复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的影响作者：黄琳，林青，肖晓丽，方泰惠【摘要】目的控制工艺条件制备了有效成分含量不同的复方丹参片，观察其对麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的影响。方法结扎麻醉犬冠脉复制心肌缺血模型。观察给药后 ST 段偏移总和、ST 段抬高2mV 以上的个数和乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶(CK)的变化。通过 TTC 染色，观察心脏梗塞范围。结果工艺 A、B、C 组均可显著减少冠脉结扎所致的 -ST 抬高和 N-ST 增加，工艺 A 组和工艺 B 组可减少血清中 LDH 和 CK 的释放，缩小心肌梗塞范围。结论 复方丹参片能明显减轻心肌缺血程度。工艺参数的调整影响复方丹参片有效成分的含量，有效成分含量越高持续作用时间越长。 【关键词】 复方丹参片； 麻醉犬； 心肌缺血复方丹参方是中国药典方, 主要由丹参、三七、冰片 3 味药组成。其中丹参为君,三七为臣,冰片为佐使药,具有活血化瘀、理气止痛的功能,用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛；冠心病心绞痛见上述证候者。采用麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的动物模型，研究工艺相同，调整工艺参数进行制备的复方丹参片抗心肌缺血的作2 / 6用效果。1 材料与仪器药物与试剂工艺 A：浅褐色粉末，实验时用蒸馏水配制成所需浓度。工艺 B：棕褐色粉末，实验时用蒸馏水配制成所需浓度。工艺 C：浅褐色粉末，实验时用蒸馏水配制成所需浓度。工艺 A 组复方丹参片：8090下提取、浓缩、干燥，加热时间总计 65 h，含丹参酮A mg/g，丹酚酸 B mg/g；工艺 B 组复方丹参片：7080下提取、浓缩、干燥，加热时间总计 30 h，含丹参酮 A mg/g，丹酚酸 B mg/g；工艺 C 组复方丹参片：8090下提取、浓缩、干燥，加热时间总计 80 h，含丹参酮A mg/g，丹酚酸 B mg/g。所有供试品药粉，每克相当于丹参原生药 g，三七生药 g。为实验统一给药剂量，稀释为人用量 g/d，相当于原生药 g/d，由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供，丹参批号 0601002、三七粉批号 C6C001、冰片批号0604007。动物杂种犬，体质量 710 kg，雌雄兼用，均由南京中医药大学动物中心收购自市郊的杂种犬，试验前在该中心驯养，经检疫及驱虫后，用于该项实验。仪器 RM-6000 八道生理记录仪及其附件，日本NIHON KOHDEN 公司产品；DH140 人工呼吸器，浙江医科大学医学仪器实验厂产品；BT01-100 型恒流泵，保定兰格恒3 / 6流泵有限公司产品；日立 7020 全自动生化分析仪，苏州日立电器有限公司产品。2 方法1实验分组与剂量取杂种犬 25 只，随机分为 5 组，每组 5 只动物, 雌雄兼用。分别为：假手术组；蒸馏水组；工艺 A 组；工艺 B 组；工艺 C 组。将各组动物所用药物溶于蒸馏水中，给药容积为 1 ml/ kg。采用组间 t 检验法与蒸馏水组进行统计学比较。实验过程试验犬由前肢小隐静脉用 3戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉后，背位固定于手术台上。将针状电极插入犬四肢皮下，记录心电图(ECG)。分离气管并插入气管插管。分离左侧股静脉插入静脉插管，缓慢恒速输入蒸馏水(约 1 ml/min)；于左侧第四、五肋间开胸，暴露心脏，并接人工呼吸机。打开心包膜，缝于胸壁，做成荷包摇篮。用 0 号丝线结扎左冠状动脉前降支中下 1/3 处，假手术组只穿线不结扎。于梗塞区附近 12 个标测点缝置心外膜电图电极，并在远离梗塞区选 1 对照点，手持绝缘金属点状电极按标测点顺序进行标测，经传感器、放大器，用八道生理记录仪记录心外膜电图。结扎 15 min 后经十二指肠给药，记录结扎前、结扎后 15 min 和给药后30，45，60，90，120，150，180 min 的 EECG。统计各标测点 EECG 的 ST 段偏移 -ST，以及 ST 段抬高2mV 以上4 / 6的个数 N-ST。各组分别于结扎前，结扎 15 min，给药 60 min 后股静脉取血，用试剂盒测定血清 CK、LDH 值。实验结束后，立即取出心脏，用蒸馏水洗去血液后，称取全心重和心室重量，并把心室横切成 5 片，置于 37 1TTC 溶液中染色 15 min，剪去各心肌片被染色的非梗塞区，把未染色的梗塞区心肌称重，除以全心重或心室重分别得到梗塞范围占全心重或占心室重的百分率。 统计学处理数据以s 表示。所有数据采用student-t 检验。3 结果对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞 -ST 的影响复方丹参片工艺 A、工艺 B、工艺 C 组可降低冠脉结扎所致心肌梗塞麻醉犬 -ST，部分时间点与蒸馏水组比较差异显著(P 对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞 N-ST 的影响复方丹参片工艺 A、工艺 B、工艺 C 组可降低冠脉结扎所致心肌梗塞麻醉犬 N-ST，部分时间点与蒸馏水组比较差异显著(P 对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞的血清 CK、LDH 的影响复方丹参片工艺 A、工艺 B 组可减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞后血清中 CK,LDH 的释放，与蒸馏水组比较差异显著(P 对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞范围的影响复方丹参片工艺 A、工艺 B 组可减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞范围，5 / 6与蒸馏水组比较差异显著。结果见表 4。表 4 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞范围的影响4 讨论复方丹参片的有效成分主要分为水溶性和脂溶性两部分，分别以丹酚酸 B、丹参酮A 为代表，均为对热敏感的化合物。工艺 A、B、C 组所用复方丹参片为不同工艺参数下制备，主要是控制提取、浓缩、干燥等加热步骤的时间。加热时间短、温度低，所得丹参酮A、丹酚酸 B 为代表的有效成分含量较高。其中工艺 A 组复方丹参片含丹参酮A mg/g；丹酚酸 B mg/g，工艺 B 组含丹参酮A mg/g、丹酚酸 B mg/g；工艺 C 组含丹参酮A mg/g、丹酚酸 B mg/g。心外膜电图 ST 段电压变化幅度的改变是反映心肌缺血损伤程度的可靠指标，缩小心电图心肌缺血程度和范围是评价抗心肌缺血药物的主要治疗指标。较多临床及基础研究发现，LDH、CK 既是评价心肌缺血损害程度较客观的指标，也是判断细胞从可逆到不可逆的损伤的一个重要标志。在定量组织学方法测定心肌梗塞范围的研究中，多采用梗6 / 6塞区占心室或全心百分比来反映梗塞范围的大小。TTC 染色法能较明显地区分心肌梗塞区域2 。复方丹参片对EECG(-ST、 N-ST)、LDH、CK、心肌梗塞范围等指标的改善作用表明其对麻醉犬冠状动脉左前降支结扎所致急性心肌缺血具有保护作用，且有效成分含量越高持续作用时间越长。对比 3 种工艺的复方丹参片，均有较好的抗心肌缺血作用，其效应与剂量有关，即复方丹参片水溶性和脂溶性有效成分含量越高，抗心肌缺血的作用越好。经测定考察，市售各厂家的复方丹参片有效成