第三章+药物的杂质检查.pptVIP

第三章药物的杂质检查 药物分析 Contents 特殊杂质的检查 4 第一节药物的杂质与限量 一 药物的杂质与纯度 1 纯度 Purities 药物的纯净程度 2 杂质 Impurities 药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效 甚至对人体健康有害的物质 简言之 任何影响药品纯度的物质 3 药物纯度与试剂纯度 共同点 均规定所含杂质的种类和限量 不同点 药物纯度从用药安全 有效和对药物稳定性等方面考虑 只有合格品和不合格品 试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定 它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用 化学试剂 一般分为4个等级 基准试剂 优级纯或特种试剂 光谱纯 色谱纯 农药残留检测级 分析纯和化学纯 化学试剂不能代替药品 二 杂质的来源 杂质的来源 生产过程 储藏过程 合成过程中 原料不纯或反应不完全 中间体 副产物在精制中未除尽制剂过程试剂 溶剂 还原剂残留异构体 多晶体使用的金属器皿 装置 工具引入的金属杂质 在温度 湿度 日光 空气等外界条件影响下 或因微生物的作用 引起药物发生水解 氧化 分解 异构化 晶型转变 聚合 潮解和发霉等变化 生产过程中引入杂质例子 双氯非那胺 主要用于治疗各型青光眼 开角型 闭角型及继发性青光眼 尤其适用于对乙酰唑胺有耐药性的患者 7 例 阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得 乙酰化不完全水杨酸 杂质 8 贮藏过程中引入的杂质例子 麻醉乙醚在日光 空气及湿气作用下 易氧化分解为醛及有毒的过氧化物 CH3CH2OCH2CH3 CH3CHO CH3CH OH O O CH OH CH3 二羟乙基过氧化物 药典规定 起封后24小时内使用 易发生水解反应的结构 酯 内酯 酰胺 卤代烃 苷类等 易发生氧化反应的结构 醚 醛 酚羟基 巯基 亚硝基 双键等 生产 贮藏过程中都引入的杂质例子 抗甲状腺药卡比马唑 自然界分布广泛 在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质 它们含量的高低与生产工艺水平密切相关 所以也常称为信号杂质 是指在特定的药物生产和贮藏过程中引入的杂质 也称有关物质 这类杂质随药物不同则不同 三 杂质的种类 如重金属 砷盐 一般无毒 但其含量的多少可反映出药物的纯度情况 四 杂质的限量 LimitTest 药物中所含杂质的最大允许量 通常用百分之几 或百万分之几 ppm 限量检查法 操作 平行试验 比较两比色管的颜色或浊度 判断杂质限量是否符合规定 管2 对照管 管1 样品管 取限度量被检杂质的对照溶液 与一定量供试品溶液在相同条件下处理 比较反应结果 判断供试液中所含杂质限度是否符合规定 对照法 注意单位统一 限量计算公式 若用ppm表示杂质限量则 注意 单位是否统一 供试品是否有稀释 表示方法 或ppm 在供试品溶液中加入试剂 在试验条件下反应 不得出现正反应 灵敏度法 比较法 取一定量供试品 在规定条件下测定待检杂质的参数 与规定限量比较 判断供试品中杂质限量 示例一茶苯海明中氯化物检查 取本品0 30g置200ml量瓶中 加水50ml 氨试液3ml和10 硝酸铵溶液6ml 置水浴上加热5min 加硝酸银试液25ml 摇匀 再置水浴上加热15min 并时时振摇 放冷 加水稀释至刻度 摇匀 放置15min 滤过 取续滤液25ml置50ml纳氏比色管中 加稀硝酸10ml 加水稀释至50ml 摇匀 在暗处放置5min 与标准氯化钠溶液 10 gCl ml 1 5ml制成的对照液比较 求氯化物的限量 C 10 g ml V 1 5ml S 示例二肾上腺素中酮体的检查 取本品0 2g 置100ml量瓶中 加盐酸溶液 9 2000 溶解并稀释至刻度 摇匀 在310nm处测定吸光度不得超过0 05 酮体的百分吸收系数为435 求酮体的限量 V样品 100ml C酮体 S样品 0 2g 示例三对乙酰氨基酚中氯化物的检查 取对乙酰氨基酚2 0g 加水100mL加热溶解后冷却 滤过 取滤液25mL 依法检查氯化物 发生的浑浊与标准氯化钠溶液5 0mL 每1mL相当于10 g的Cl 制成的对照液比较 不得更浓 求氯化物的限量是多少 示例四谷氨酸钠中重金属的检查 取本品1 0g 加水23mL溶解后 加醋酸盐缓冲液 pH3 5 2mL 依法检查 与标准铅溶液 10 gPb 1mL 所呈颜色比较 不得更深 重金属限量为百万分之十 求所取标准铅溶液多少mL 习题一磷酸可待因中吗啡的检查 取本品0 10g 加盐酸溶液 9 1000 使溶解成5ml 加亚硝酸钠试液2ml 放置15min 加氨试液3ml 所显颜色与吗啡试液 取无水吗啡2 0mg 加盐酸溶液 9 1000 使溶解成100ml 5 0ml用同一方法制成的对照液比较 不得更深 问限量是多少 习题二苯巴比妥钠中重金属的检查 取本品2 0g 加水32ml 溶解后缓缓加入1mol L盐酸溶液8ml 充分振摇 静置数分钟 滤过 取滤液20ml 加酚酞指示液1滴与氨试液恰显粉红色 加醋酸盐缓冲液 pH3 5 2ml与水适量成25ml 依法检查 含重金属不得超过10ppm 试计算应取得标准铅溶液 每1ml相当于10 gPb 的体积 一 杂质的研究规范 一 有机杂质在质量标准中的项目名称1 以杂质的名称作为项目名称 25 中国药典 2010 收载硝苯地平有关物质中杂质 杂质 26 2 以某类杂质的总称作为项目名称杂质结构不明确 如硝酸毛果芸香碱中的 其他生物碱 3 以检测方法作为项目名称杂质结构未知 也没有具体类别 如杂质吸光度 溶液透光率 27 二 杂质检查项目的确定由质量研究和稳定性研究中检出的 并在批量生产中出现的杂质和降解产物 根据其起始原料 生产工艺及稳定性情况确定 28 三 杂质限度的确定 29 30 31 二 杂质的常用检查法 二 色谱方法 一 化学方法 三 光谱方法 四 其他方法 1 显色反应 杂质与一定试剂反应产生颜色 生产原料 杀鳗剂 灭螺剂 重氮化 偶合反应 芳伯氨基 2 沉淀反应 杂质与一定试剂反应产生沉淀 盐酸肼屈嗪中游离肼的检查 生成沉淀 治疗高血压 心力衰竭 水杨醛 腙 3 生成气体或者滴定法 生成气体 NH3滴定法 如硫酸亚铁中的高铁盐检查 碘的显色 36 1 薄层色谱法 TLC 2 高效液相色谱法 HPLC 3 气相色谱法 GC 色谱法是杂质检查的首选方法 37 根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析能力不同 Rf值的差异 加以分离和检查 1 薄层色谱法 TLC 38 我国药典2005年版增加了TLC系统适用性试验 1 检测灵敏度 对照品溶液稀释若干倍 应显示清晰的斑点 2 比移值 供试品主斑点与对照品溶液主斑点 3 分离效能 39 薄层色谱法应用 1 杂质对照法 取供试品溶液和一定浓度杂质对照品溶液 分别点样于同一薄层板上展开 进行斑点定位 将杂质斑点进行对应比较判断 2 供试品溶液自身稀释法 将一定浓度供试品溶液进行稀释并作为对照溶液 然后与供试品溶液在同一板上展开比较 3 杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法 4 对照药物法 采用与供试品相同药物作为对照 比较斑点 颜色 并进行对比控制 40 根据供试品与杂质的对照品保留时间相同测定各杂质峰面积 2 高效液相色谱法 HPLC 41 1 外标法 有对照品杂质 2 加校正因子的主成分自身对照法3 不加校正因子的主成分自身对照法 无杂质对照品 4 峰面积归一化法 粗略测量杂质的含量 42 3 气相色谱法 GC 检查方法 同高效液相色谱法 用于药物中挥发性杂质的检查 如药物中残留溶剂 农药残留量等 标准溶液加入法 P110 43 4 毛细管电泳法 检查方法 同高效液相色谱法 用于酶类药物中酶类杂质的检查 44 1 可见 紫外分光光度法2 红外分光光度法3 原子吸收分光光度法 45 紫外分光光度法 利用药物和待检杂质对光选择吸收性质的差异进行 46 例 肾上腺素中肾上腺酮的检查 规定 A310nm 0 05 47 红外分光光度法 主要用于药物中无效或低效晶型的检查 某些多晶型药物由于其晶型结构不同 一些化学键的键长 键角等发生不同程度的变化 从而导致红外吸收光谱中某些特征峰的频率 峰形和强度出现显著差异 48 在程序控制温度的情况下 测定物质的物理 化学变化与温度关系的一类仪器分析方法 1 1热重分析法1 2差示热分析法1 3差示扫描量热法 1 热分析法 1 热重分析法 TGA 应用热天平在程序控温的条件下测量物质的质量随温度变化的热分析技术 可计算出样品在相应温度范围内减失质量的百分率 特点 分析样品用量少 适用于贵重药材或在空气中容易氧化药物干燥失重测定 灵敏度高 可达1 g以下测定速度快可用于判断结晶水或吸附水 并推断结晶水含量 2 差热分析法 DTA 在程序控制温度下 测量供试品和惰性参比物 常用石英砂 煅制MgO 之间的温度差与温度 或时间 关系的热分析技术 DTA用途 1 熔点测定 2 定性和纯度检定 根据峰的数目 形状 位置对供试品进行纯度判别 草酸钙 CaC2O4 H2O 的热重曲线 三个失重峰 相应产生两个吸热峰和一个放热峰 3 差示扫描量热法 DSC 测量保持供试品和惰性参比物的温度相同 系统所需输给供试品或参比物的能量差随温度 或时间 变化的热分析技术 用于待测物质的鉴别 晶型鉴别 纯度检查以及熔点和水分等的测定 更适合于测量物质在物理变化或化学变化中焓的变化 应用热分析法检查药物纯度的条件样品纯度在98 0 以上杂质不与主成分反应杂质不与主成分形成共晶或固熔体杂质与熔融试样有化学相似性药物在熔融过程中化学性质稳定药物如存在多晶现象则必须全部转变成某一晶型 58 药品检验操作标准 规定1 遵循平行操作原则 1 仪器的配对性如纳氏比色管应配对 刻度线高低相差不超过2mm 砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致 2 对照品与供试品的同步操作2 正确的取样及供试品的称量范围 1g不超过 2 1g不超过 1 3 正确的比色 比浊方法4 检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份 第三节一般杂质的检查方法 59 1 原理利用氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应 生成氯化银白色浑浊液 与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较 判定供试品中氯化物是否符合限量规定 一 氯化物检查法 供试品 稀HNO310ml H2O AgNO31ml 标准溶液 稀HNO310ml H2O AgNO31ml 暗处放置5min 避免AgCl分解 条件 硝酸酸性条件 稀硝酸10ml 反应试剂 硝酸银试液1 0ml杂质对照 NaCl 10 g ml 灵敏度范围 50 80 g 50ml 可避免弱酸银盐 如碳酸银 磷酸银及氧化银沉淀的干扰 且可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊 讨论 选择稀硝酸反应条件的意义 比浊方法 同置于黑色背景上 自上向下观察 平行操作原则 3 若供试品有色 需经处理后方可检查 注意 干扰及排除 1 外消色法 2 内消色法 倍量法 供试品有色处理方法 供试品溶液如带颜色 可按中国药典附录所规定的方法处理 即取两份供试品溶液 于其中一份中先加入硝酸银试液 摇匀 放置10min 如显浑浊 可反复滤过 至滤液澄清 即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液 再在其中加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml 作为对照溶液 另一份中加入硝酸银试液与水适量使成50ml 作为供试溶液 将两液在暗处放置5min后比较 即可消除颜色的干扰 此法又称为内消色法 外消色法 加入一定的有色物 如稀焦糖等 或经处理降低色度 不干扰测定 如高锰酸钾中氯化物的检测 可先加乙醇适量 使其还原褪色后再依法检查 65 碘化物 溴化物中氯化物的检查 66 a溶于水的有机药物 直接检查 b不溶于水的有机药物 d杂质中卤素原子连接于苯环上 先进行有机破坏 使分解后再检查 有机药物中氯化物的检查 二 硫酸盐检查法 浓度范围0 1mg 0 5mgSO42 50ml 硫酸钾溶液0 1mg ml 68 1 反应需在盐酸酸性条件下进行 且以50mL供试溶液中含稀盐酸2mL为宜 盐酸酸性条件防止BaCO3 BaPO4沉淀生成 pH约 1 2 供试液和对照液稀释后 再加氯化钡溶液 使生成白色浑浊而不是白色沉淀 3 比浊方法 同置于黑色背景上 自上向下观察 4 供试液带色应先处理 测定条件 三 铁盐检查法 1 硫氰酸铁法 Ch P和USP采用 红色 原理 铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配离子 与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较 供试品 显色 立即与同法制成的对照溶液比较 既可氧化供试品Fe2 变成Fe3 同时可防止由于光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 比色方法 同置于白色背景上 自上向下观察 最佳比色浓度a 仪器分析线性范围5 90 gFe3 50mlb 目视比色浓度范围10 50 gFe3 50ml 2 巯基醋酸法 BP采用 红色 枸橼酸的作用 使枸橼酸与铁离子形成配位离子 以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉淀 巯基醋酸 还原剂本法灵敏度较高 但试剂较贵 74 重金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用呈色的金属 重金属存在影响药物的稳定性及安全性 铅易在体内积蓄中毒 以Pb为代表 四 重金属检查法 重金属检查法 1 第一法硫代乙酰胺法 黄色至棕黑色混悬液 硫代乙酰胺在弱酸性 pH3 5醋酸盐缓冲液 条件下水解 产生H2S 与微量重金属离子 以Pb2 为代表 生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液 与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较 不得更深 77 操作方法 样品管 对照管 78 标准铅溶液浓度 硫代乙酰胺试液 溶液的pH 供试品溶液有颜色时的处理 干扰物的排除方法 讨论 79 标准铅溶液浓度 适宜目视比色的浓度范围Pb2 标准溶液10 g ml1 2ml 80 硫代乙酰胺试液 H2S试液 恶臭和毒性 不稳定 易被空气氧化而析出硫 浓度难以控制 改用硫代乙酰胺为显色剂 硫代乙酰胺在实验条件下水解产生H2S 与重金属离子反应 81 pH在3 0 3 5时 呈色较完全 酸度增大 呈色变浅甚至不呈色 溶液的pH对于金属离子与硫化氢呈色影响较大 溶液的pH 82 供试品溶液有颜色时的处理 a 外消色法b 内消色法 稀焦糖溶液调节 指示剂调节 83 干扰物的排除方法 干扰 弱酸性溶液中Fe3 氧化H2S析出S 产生混浊影响检查 a 供试品中微量高价Fe3 存在 如 葡萄糖酸亚铁中重金属的检查 排除 加入抗坏血酸或盐酸羟胺使Fe3 还原为Fe2 84 b 药物本身能生成不溶性硫化物 加入掩蔽剂消除干扰 加掩蔽剂KCN 使锑 锌形成稳定的配合物后 用第三法检查 如 葡萄酸锑钠中重金属的检查 1 原理供试品先炽灼破坏后 使有机结合的重金属游离 再按第一法检查 2 第二法炽灼后的硫代乙酰胺法 86 2 操作 缓缓炽灼放冷H2SO40 5 1 0ml供试品炭化加热HNO3500 600 H2SO4除尽放冷完全灰化蒸干HCl2ml水15ml中性按第一法检查蒸干氨试液 注意 做空白试验 3 第三法硫化钠法 原理 在碱性介质中 以Na2S为显色剂 使Pb2 与S2 作用生成PbS的混悬液 与一定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比较 不得更深 88 适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性溶液的药物中重金属的检查 如 磺胺类与巴比妥类药物 注意 Na2S对玻璃有腐蚀性 久置产生絮状物 应临用新配 4 第四法微孔滤膜法 当重金属含量低 2 5 g 时 在比色管中难于目视观察 采用本法 原理 同第一法使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上 铅斑 提高检查的灵敏度 90 2 白田道夫法 1 古蔡氏法 3 Ag DDC法 4 次磷酸法 五 砷盐检查法 一 古蔡氏法 Gutzeit 黄色 棕色 黑色 溴化汞试纸 1 原理 进而促进AsH3不断生成 古蔡氏法检砷器 8cm 有孔玻璃旋塞 导气管 AsH3发生瓶 溴化汞试纸 醋酸铅棉花 60mg HClZn粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液 生成砷斑 吸收硫化氢气体 a KI的作用 还原剂 As5 As3 b 酸性SnCl2的作用 还原剂 表现在3方面 将五价砷还原为三价砷 As5 As3 94 将KI被氧化生成的I2再还原为I SnCl2与Zn粒表面形成Zn Sn齐 起去极化作用 使氢气均匀而连续地发生 95 c PbAc2棉花的作用 排除硫化物的干扰 1mgS2 注意事项 砷斑不稳定 应干燥 避光 立即比较 有机结合态的砷应破坏后检查 加酸或碱 但温度应低于600 C 供试品若为铁盐 能消耗碘化钾和氯化亚锡 可加酸性氯化亚锡 使高铁离子还原后检查 供试品 硫化物 亚硫酸盐 硫代硫酸盐 若在酸性条件下生成硫化氢或二氧化硫 与溴化汞试纸作用生成黑色硫化汞和金属汞 可先用硝酸处理 使其氧化为硫酸盐 锑盐含量较多时 可改用白田道夫 Bettendorff 法检查砷 二 白田道夫法 对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法 需用白田道夫法 特点 优点 不受Sb干扰 缺点 灵敏度低 20 gAs2O3 10ml加入少量HgCl2 灵敏度提高至2 gAs2O3 1 5 gAs 10ml 99 三 二乙基二硫代氨基甲酸银法 Ag DDC法 USPsilverdiethyldithiocarbamate 本法不仅用于砷盐的限量检查 而且可用作微量砷盐的含量测定 100 原理 101 AsH3 6Ag DDC As DDC 3 6Ag 红色 3HDDC 用有机碱吸收反应产生的HDDC有利于反应的进行 USP用吡啶 灵敏但试剂恶臭 ChP用三乙胺 灵敏度低 本法适用于含Sb量小于500 g的供试品 102 Ag DDC法的特点 a灵敏度高0 5 gAs 30mlb可仪器测定 还可定量 cSb干扰小 500 g 103 四 次磷酸法BP 原理在盐酸酸性溶液中 次磷酸还原砷盐为棕色的游离砷 与标准砷溶液同法处理后比较颜色 NaH2PO2 HCl H3PO2 NaCl3H3PO2 H3AsO3 3H3PO3 2As 棕色 104 特点 不受S2 SO32 Sb干扰 灵敏度较古蔡氏法低 六 干燥失重干燥失重 药品在规定的条件下 经干燥后所减失的量 用于检查药物中的水分及其他挥发性物质 恒重 供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0 3mg以下 干燥至恒重的第二次及以后每次称重都应在规定的条件下继续干燥1h后进行 七 水分测定法 A 供试品消耗的Fisher试液的体积B 空白消耗的Fisher试液的体积F 每1mlFisher试剂相当于水的重量 mg W 供试品的重量 催化剂 硫酸吡啶 不稳定 氢碘酸吡啶 甲基硫酸氢吡啶 稳定 指示终点方法 Fisher试液颜色淡黄色 红棕色 催化剂 忘记加甲醇了 起稳定作用 八 炽灼残渣 Residueonignition 系指有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后 高温炽灼所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐 0 1 0 2 1 2mg 残留溶剂 在合成原料药 辅料或制剂生产的过程中使用的 但在工艺中未能完全除去的有机溶剂 九 易炭化物检查法 十 残留溶剂