蒲公英中阿魏酸的含量测定

1 / 5蒲公英中阿魏酸的含量测定作者：李喜凤，余云辉，郝哲，邱天宝，杜云锋【摘要】目的建立蒲公英中阿魏酸含量的测定方法。方法色谱柱为 Hypersil ODS2 C18 ( mm250 mm，5 m)，流动相为甲醇-冰乙酸-水(30268)，流速为 ml/min，柱温为 30，检测波长为 322 nm。结果阿魏酸在 24 5 g 范围内峰面积与进样量呈良好线性关系，平均加样回收率为%。结论该方法简便、准确、专属性强、重复性好，可作为蒲公英的质量控制标准。 【关键词】 蒲公英； 阿魏酸蒲公英为菊科植物蒲公英 Taraxacum mongolicum Hand-Mazz碱地蒲公英 Taraxacum sinicum Kitag或同属数种植物的干燥全草，具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋之功效。临床用于乳痈、瘰疬、目赤、咽痛、肺痈、肠痈、热淋涩痛等症1 。蒲公英中含有多种成分，主要有倍半萜烯内酯、三萜类、酚酸类、黄酮类、类固醇等，而其中以咖啡酸、绿原酸、阿魏酸为主的酚酸类化合物含量最丰富。药理研究表明阿魏酸具有抗菌消炎、抗肿瘤、抗突变、抗血小板凝集和血栓、增加免疫功能等作用 2 。但有关蒲公英中阿魏酸的含量测定，研究报道较少。本实验采用 RP-HPLC 法对蒲公英中阿魏酸进行含量测定，以期2 / 5为蒲公英药材及中成药制剂的质量控制提供依据。1 仪器与试药DIONEX 高效液相色谱仪包括 DIONEX P-680 泵、ASI-100 自动进样器、PDA-100 检测器、CHROMELON 工作站(美国 DIONEX 公司)；YUPING FAXXb 型电子天平；型低速自动平衡微型离心机。阿魏酸对照品(批号：0773-9809)中国药品生物制品检定所提供。蒲公英药材为 2016-04 采集于河南省内不同地区，经河南中医学院生药学科陈随清教授鉴定为菊科植物蒲公英 Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.的干燥全草。甲醇为色谱纯(天津四友)，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。2 方法与结果色谱条件色谱柱为 Hypersil ODS2 C18 分析柱( mm250 mm，5 m)，(大连依利特科学仪器有限公司)；流动相为甲醇-冰乙酸-水(30268)；流速 ml/min；检测波长 322 nm；柱温 30 ；进样量：10 l。对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品 5 mg 于5 ml 容量瓶中,用 70%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取 1 ml，置 25 ml 量瓶中，加 70%的甲醇至刻度，摇匀，3 / 5即得。对照品色谱图见图 1。供试品溶液的制备取本品粗粉 1 g，精密称定，置50 ml 具塞锥形瓶中,加 1% NaOH 溶液 20 ml,密塞，摇匀，避光，放置 48 h。离心，取上清液，用 1 mol/L 的盐酸调pH 35，有沉淀生成。离心，取上清液，用乙醚萃取 3 次，每次 10 ml。干燥沉淀，加乙醚振摇 3 次，每次 10 ml，滤过，合并滤液，避光，低温干燥，用 70%甲醇定容至 10 ml，过 m 的滤膜，即得。供试品色谱图见图 2。线性关系考察 取上述对照品溶液，分别进样 2，5，10，15，20，25 l 测定阿魏酸的峰面积，以阿魏酸的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=,r= 9，阿魏酸在 24 5 g 范围内具有良好的线性关系。精密度实验精密吸取对照品溶液 10 l，重复进样6 次，记录峰面积。结果阿魏酸峰面积的 RSD 为%，表明精密度良好。重复性实验称取同一产地的蒲公英药材粉末 6 份，每份 1 g，精密称定，按“”项下的方法制备 6 份供试品溶液，按上述色谱条件测定，测得样品中阿魏酸峰面积的 RSD为%。 稳定性实验按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，4 / 5于 0，2，4，6，8，12 h 分别进样 10 l，依照上述选择的色谱条件测定，结果阿魏酸峰面积的 RSD 为%，表明样品在室温下 12 h 内稳定。加样回收率实验精密称取样品 1 g，共 6 份，各精密加入阿魏酸对照品溶液适量，按“”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果见表 1。表 1 蒲公英中阿魏酸的加样回收率测定结果样品的含量测定精密称取河南省内不同产地的蒲公英药材粉末 1 g， 按“”项下的方法分别制备供试品溶液，进样 10 l，按上述色谱条件测定，记录色谱图，用外标法进行计算样品中阿魏酸的含量。结果见表 2。表 2 蒲公英中阿魏酸的含量测定结果3 讨论提取溶剂的选择有文献报道3用 5%的甲酸甲醇作溶剂超声提取阿魏酸。但由于蒲公英中阿魏酸含量较低，采用上述溶剂阿魏酸含量迅速降低且杂质较多，易污染色谱柱，难以获得准确的测定结果。该实验分别用水、5%的甲酸甲醇溶液、1%氢氧化钠溶液对药材提取，考察不同溶剂对阿魏酸含量的影响。结果：用水作溶剂提取，阿魏酸含量较低，用 5%的甲酸甲醇溶液作溶剂提取，杂质含量较大，而采用 1%氢氧化钠溶液作溶剂提取，杂质较少，阿魏5 / 5酸的含量最高。故本实验选用 1%氢氧化钠溶液作为该样品的提取溶剂。流动相的选择实验中曾采用