脑脊液常规操作规程

常规分析项目 ZDFYJYK SOP A 02 2013 第 1 版 第 0 次修 改 1 7 第 1 页 共 7 页 1 1 检验目的检验目的 指导脑脊液 CSF 常规测定 2 2 方法原理方法原理 2 1 脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔中的无色透明液体 由于脉络丛上皮细胞对血 浆 中各种物质的选择性分泌和超滤作用 血浆中各种成分对血脑屏障的通透性各有不 同 其中最易通过血脑屏障的是氯 钠 镁离子及乙醇 其次为清蛋白 葡萄糖 钙 离子 乳酸 氨基酸 尿素和肌酐 纤维蛋白原 补体 抗体 某些药物 胆红素 胆固醇则极难或不能通过 中枢神经系统任何部位发生器质性病变时 如感染 炎 症 肿瘤 外伤 水肿和阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变 通过对脑脊液理学 检查 显微镜检查 化学和免疫学检查及脑脊液病原学检查 可对疾病的诊断 治 疗和预后判断提供依据 2 2 脑脊液 CSF 常规测定内容包括 颜色 性状 有核细胞计数 红细胞计数 潘 氏试验 细菌等 2 3 潘氏 pandys 试验 CSF 中的球蛋白与苯酚结合 形成不溶性的蛋白盐而产生白 色混浊或沉淀 3 3 方法性能参数 如线性 检出限 测量区间 不确定度 准确性 精密度 灵敏度和方法性能参数 如线性 检出限 测量区间 不确定度 准确性 精密度 灵敏度和 特特 1 颜色 COLOR 6 中性粒细胞 NE 2 透明度 clearity 7 淋巴细胞 LY 3 凝固性 coagulability 8 单核细胞 MO 4 脑脊液有核细胞计数 CSF NUCL 9 潘氏试验 pandys test 5 脑脊液红细胞计数 CSF RBC 常规分析项目 ZDFYJYK SOP A 02 2013 第 1 版 第 0 次修 改 2 7 第 2 页 共 7 页 4 4 标本类型标本类型 4 1 标本类型 新鲜 CSF 4 2 标本拒收条件 拒收延迟室温 2h 冷藏 6h 未送达标本 4 3 标本保存与稳定性 一般室温 1h 内完成检验 久置可致细胞破坏 影响细胞计数 及分类检查 5 5 要求的容器 防腐剂或添加物 仪器 试剂或分析系统要求的容器 防腐剂或添加物 仪器 试剂或分析系统 5 1 标本容器 BD 无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管 5 2 试剂 5 2 1 试剂组分 生理盐水0 9 Nacl 溶液 白细胞稀释液1 冰乙酸 1ml 分析纯冰醋酸 蒸馏水至 100ml A 液 曙红 甲醇刘氏快速瑞氏染色液 B 液 亚甲蓝 潘氏试剂10 苯酚溶液 纯苯酚 10ml 蒸馏水至 100ml 5 2 2 试剂存储和有效期 试剂名称存储条件有效期开瓶有效期位置 生理盐水室温1 年1 年存货柜 血常规室操作台 冰乙酸室温2 年1 年药品柜 1 乙酸冷藏1 年1 年试剂冰箱 10 苯酚溶液室温1 年1 年药品柜 刘氏快速瑞氏染色液室温2 年6 个月药品柜 染色操作台 5 3 仪器 OLYMPUS 光学显微镜 血细胞计数板 6 6 校准程序校准程序 计量学溯源性 计量学溯源性 常规分析项目 ZDFYJYK SOP A 02 2013 第 1 版 第 0 次修 改 3 7 第 3 页 共 7 页 不适用 7 7 质量控制 控制品使用水平和频率 允许限的纠正措施质量控制 控制品使用水平和频率 允许限的纠正措施 不适用 8 8 程序步骤程序步骤 8 1 一般性状检查 轻轻混匀 CSF 观察量 颜色 有无凝块和透明度 一般细胞数 300 l 个时或蛋白增加可产生混浊 并记录 8 2 显微镜检查 8 2 1 细胞计数 无凝块标本 1 清或微混标本 a 混匀后直接冲入计数池 计数四角四大方格内细胞 总 数 包括 RBC NUCL b 用白细胞稀释液作 1 1 稀释 计数有核细胞数 c 红细胞数 细胞总数 有核细胞数 当白细胞数 30 个 l 时 在白细胞计数池中直接分类至少 50 个白细胞 2 混浊及以上标本 a 稀释标本 于清洁试管中按上表进行稀释 用以计数细胞总数 b 溶解 RBC 于清洁试管中按上表进行稀释 用以计数有核细胞数 c 冲池 计数 d 红细胞数 细胞总数 有核细胞数 8 2 2 有凝块或粘稠标本 1 用吸管旋转并挤压凝块 挤出里面的液体及细胞 2 2000rpm 5min 离心 分离上清液和沉渣 3 混匀沉渣 涂片 用高倍镜观察 NUCL RBC 4 报告每高倍镜视野的红细胞和有核细胞数 8 2 3 离心获取沉渣和上清液 将完成计数的 CSF 离心 2000rpm 5min 离心 吸出 上 清液于另一试管 并在试管上编号 8 2 4 瑞氏染色 当 NUCL 106 l 时进行操作 将沉渣混匀涂片 厚薄根据有核 外观稀释样本量稀释液 溶解剂 粉色 轻度混浊 1 2020 l380 l 红色 混浊 1 5010 l490 l 带血量极高 极度混浊 1 10010 l990 l 常规分析项目 ZDFYJYK SOP A 02 2013 第 1 版 第 0 次修 改 4 7 第 4 页 共 7 页 细 胞数而定 血性标本可考虑推片 待干后 瑞氏染色进行分类 分 100 个 NUCL 如见有不能分类细胞或怀疑有恶性细胞时 应请示 上级主管 由有经验的上级主管进行分析 并在报告时另行描述报 告 如脑膜白血病或肿瘤细胞等 8 3 潘氏试验 8 3 1 试验操作 取小试管一支 加入 10 的石碳酸水溶液约 5ml 用一次性吸管 加一滴 CSF 上清液立即在黑色背景灯照下观察结果 8 3 2 结果判定 阴性 清晰透明 弱阳性 微呈白雾状 在黑色背景下才能看到 阳性 灰白色云雾状 2 白色浑浊 3 白色浓絮状沉淀 4 白色凝块 9 9 计算结果原理计算结果原理 9 1 颜色 9 1 1 红色 常见于穿刺损伤或出血性病变 为区别蛛网膜下腔出血和穿刺损伤应注意 1 离心沉淀后 如上层液体呈黄色 隐血试验阳性 多为蛛网膜下腔 出 血 且出血时间已经超过 4 小时 如上层液体澄清无色 红细胞均 沉 管底 多为穿刺出血或因病变所致的新鲜出血 2 红细胞皱缩 不仅见于陈旧性出血 在穿刺损伤引起出血时也可看 到 因脑脊液渗透压较血浆高所致 9 1 2 黄色 可因陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血 椎管梗阻 化脓性脑膜炎 结核 性 脑膜炎 重症如核黄疸等引起 常规分析项目 ZDFYJYK SOP A 02 2013 第 1 版 第 0 次修 改 5 7 第 5 页 共 7 页 9 1 3 白色或灰白色 多因白细胞增加所致 常见于化脓性脑膜炎 9 1 4 褐色或黑色 常见于脑膜黑色素瘤 9 1 5 绿色 可见于绿脓假单胞菌 肺炎链球菌 甲型链球菌引起的脑膜炎 高胆 红 素血症和脓性脑脊液 9 2 透明度 脑脊液混浊程度与细胞数量有关 脑脊液中细胞数超过 300 10 L 时 可出 现 混浊 蛋白质含量增加或含大量微生物也可产生混浊 9 3 凝固性 结核性脑膜炎静置 12 24 小时后 标本表面有纤细的网膜形成 蛛网膜下腔 梗阻时 可产生黄色胶冻状 9 4 潘氏试验 有脑组织和脑脊髓膜疾患时常成阳性反应如化脓性脑脊髓膜炎 梅毒性中 枢神经系统疾病 脊髓灰质炎 流行性脑炎等 脑出血时多呈阳性反应 如外伤性血液混入脑脊液中 亦呈阳性反应 9 5 细胞分类 9 5 1 中枢神经系统病变的 CSF 细胞可增多 其增多的程度及细胞的种类与病变 的 性质有关 9 5 2 中枢神经系统病毒感染 结核性或霉菌性脑脊髓膜炎时 细胞数可中度增加 常以淋巴细胞为主 9 5 3 细菌感染时 化脓性脑脊髓膜炎 细胞数显著增加 以中性粒细胞为主 9 5 4 寄生虫病时 可见较多的嗜酸性粒细胞 9 5 4 脑室或蛛网膜下腔出血时 脑脊液内可见多数红细胞 10 10 生物参考区间生物参考区间 颜色 COLOR 无色透明度 clearity 透明 凝固性 coagulability 无凝块潘氏试验 pandys test 阴性 OR 弱阳性 有核细胞计数 CSF NUCL 成人 0 8 106 L中性粒细胞 NE 成人 0 6 常规分析项目 ZDFYJYK SOP A 02 2013 第 1 版 第 0 次修 改 6 7 第 6 页 共 7 页 正常脑脊液中白细胞主要为淋巴细胞 单核细胞 之比约为 7 3 可含极少中性粒 细 胞 11 11 警告值 危急值 适用时 警告值 危急值 适用时 12 12 检验结果可报告区间检验结果可报告区间 13 13 对超出可报告范围的结果的处理对超出可报告范围的结果的处理 13 1 如检到细菌时应建议培养确认 13 2 有不能分类细胞 应请示上级主管 并另行描述报告 如脑膜白血病或肿瘤细 胞 14 14 实验室解释实验室解释 15 15 安全防护措施安全防护措施 15 1 所有样品按具有潜在传染性的标本处理 15 2 测定完成后 上清液及沉渣试管于 2000mg L 有效氯消毒液浸泡 4 小时以上 倒 入 医疗废物下水槽 由医院统一消毒处理 塑料试管或容器等容器等医疗废弃物倒 入 黄色医疗垃圾袋 贴上标签并封口 由医院统一销毁处理 15 3 原液保存 48 小时或以上 倒入黄色医疗垃圾袋 贴上标签并封口 由医院统一 销 毁处理 并做记录 16 16 最常见的误差源 最常见的误差源 儿童 0 15 106 L 新生儿 0 30 106 L 新生儿 0 8 成人 40 80 成人 15 45 淋巴细胞 LY 新生儿 5 35 单核细胞 MO 新生儿 50 90 红细胞计数 CSF RBC 0 10 L 常规分析项目 ZDFYJYK SOP A 02 2013 第 1 版 第 0 次修 改 7 7 第 7 页 共 7 页 手工操作 主观性较强 细胞鉴别需要有经验 17 1