临床本科11病原体检测

第九章,常见病原体检测,第一节 标本采集运送,原则：无菌操作、防止污染。不接触消毒剂和抗菌药、立即送检。,1、血液标本,在病人发热初期、高峰期间采集，且在应用抗菌药前。SPS无菌瓶怀疑败血症、毒血症、脓毒血症，在发热期间24小时内多部位多量采血,2、尿液标本,杂菌多，要求晨起中段尿或导尿管无菌操作。,3、呼吸道标本 痰液和鼻咽拭子均要求晨起清水漱口后采集4、粪便标本 取粘液脓血部位送检，怀疑2号病用碱性蛋白胨保养送检。5、脑脊液应及时送检或床边接种，同时做血培养。体腔积液，采量多，做血培养。,6、泌尿生殖系标本 在无菌操作下采样7、创伤、组织、脓肿标本 注意防止皮肤表面污染菌混入，脓肿可穿刺采样。,二、常用检查方法,1、直接显微镜检查 标本直接或离心浓缩沉淀后涂片染色用显微镜观察形态,2、抗原抗体检测 见免疫学检查3、核酸检查（PCR、基因芯片）,4、细菌分离培养,依据可疑细菌培养特性，选择合适的培养基进行培养或分离培养；根据菌落形态、生化反应、染色作出鉴定，有时进一步做药物敏感试验,第二节 病原体耐药性检测,耐药机制（略）药敏试验 药敏试验是测定抗生素在体外抑制细菌生长能力的试验，目的是选择最佳抗生素便于治疗,将含有定量药物的纸片贴在接种测试菌的琼脂平板上孵育24h，根据抑菌圈大小判定是否敏感或耐药。,1、KB纸片琼脂扩散法,药敏结果为临床提供参考意见 “敏感”或“中度敏感” 、“耐药” 选择？药敏试验须先进行细菌培养、分离纯化，时间长。医生可先试用一些药，,注意事项,耐甲氧西林金葡菌MRSA、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌MRSCoN是目前院内感染的重要病原菌。早期进行细菌培养。PCR检测耐药基因,二、耐药菌监测试验,第三节 感染性病原体检测 （自学） 第四节 病毒性肝炎血清学标志检测,病毒性肝炎有7型：HAV HBV HCV HDV HEV HGV TTV甲、丙、丁、戊四型肝炎均会产生特异抗体，IgM型抗体阳性示急性感染或病毒在复制；IgG型抗体阳性示继往感染，传染性降低。抗HAVIgG属保护性抗体，可终生阳性。,抗HCV：输血后肝炎,抗HDV检测须依赖乙肝病毒存在戊肝抗体检查,肝炎病毒和病毒性肝炎的特征 病毒特征 肝炎特征类型 直径(nm) 核酸 所致肝脏病 感染途径 潜伏期 急肝死亡率甲型肝炎 27-32 RNA 急性肝炎 经口 30天 0.1-0.2%乙型肝炎 42-47 DNA 急性肝炎 非经口 60-70天 约1% 慢性肝炎 肝硬化。肝癌丙型肝炎 30-60 RNA 同上 非 经口 50天 不到1%丁型肝炎 35-37 RNA 同上 非经口 70天 1-2%戊型肝炎 27-34 RNA 急性肝炎 经口 40天 1-2%,乙肝血清学标志,HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb HBcAb即“二对半”,HBsAg（+）示急慢性乙肝或携带者，具有传染性 ? ?HBsAb（+）示继往感染，现已恢复。HBsAb属保护性抗体 有中和作用。HBeAg（+）示病毒在复制，有强传染性。且可胎传。HBeAb（+）示病毒复制减少，传染性降低。一般认为HBeAb无保护性。HBcAb（+）示病毒感染且复制，具有传染性（特别是IgM阳性）。HBcAb无保护性。,“大三阳”即HBsAg（+）HBeAg（+）HBcAb（+），“小三阳”即HBsAg（+）HBeAb（+）HBcAb（+）。乙肝标志在不同病程中呈现不同的变化。抗原阴转、表面抗体阳性示为好现象。,HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-Hbe 抗-HBc 临床意义 过去和现在均未感染HBV + 曾感染HBV，急性感染恢复期 + + 同上 + HBV感染已康复 + + + 既往感染，急性HBV感染恢复期 + 同上 + + 急性HBV感染，慢性携带者 + + + 急性HBV感染，趋向恢复 + + + 急性或慢性乙肝，传染性强 + 急性HBV感染早期 + 急性HBV感染早期 + + 同上 + + + 急性感染中期 + + + + 急性感染趋向恢复 + + 同上 + 同上 + + HBV感染已恢复,第五节 STD病原体检测 P437/458,病原体：衣原体、支原体、梅毒螺旋体、 淋球菌、HIV、HPV、真菌、原虫,WHO列入20余种（含病毒性肝炎）,我国列入的STD有8种：梅毒、淋病、艾滋病、生殖器疱疹、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、软下疳、性病性肉芽肿、,1、艾滋病,AIDS定义：病死率高目前无特效药，无预防疫苗,26,HIV检测：病毒标志检测：分离病毒组分免疫标志检测：抗HIV-1.2、P24非特异性检测：CD4、T细胞亚群,27,28,初筛（ELISA、IFA、RIA） 确证：免疫印迹试验,至少同时测两种抗体(P24、gp120)阳性,方可判断HIV感染,HIV抗体确认实验结果,典型的HIV-2血清阳性反应,初筛检测阳性标本,两种初筛试剂,阴性报告,阴性报告,阴性反应,一阴一阳,阳性反应,免疫印迹法WB-1/2混合型,复核,报告HIV-2血清学阳性反应,必要时测核酸,阴性反应,可疑反应,HIV-2 阳性反应,免疫印迹法WB-2,阴性报告,出现gp36,阴性反应,可疑反应,HIV-1 阳性报告,HIV-1 阳性反应,每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性,HIV抗体确认实验流程图,2、梅毒,病原体为螺旋体，传播途径也是性接触、血液、母婴。血清学检查 有RPR、USR、TRUST、TPPA等。阳性为梅毒感染，须用TPPA或暗视野螺旋体检查进行确定,3、淋病,病原体为G-双球菌，传播途径为性接触和胎传。直接涂片或厌氧分离培养找到G- 双球菌可确诊为淋病PCR快速特异,第十章 其它检测包括基因诊断、流式细胞术、染色体检查,基因诊断定义 以DNA、RNA为原料，检查目标基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断 常用技术有： 核酸分子杂交、PCR、限制性片段长度多肽性分析、DNA测序等,应用范围 感染性疾病：乙肝、丙肝、结核菌、淋菌基因突变 ： 如血友病、血红蛋白分子肿瘤相关基因：