富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断

减淫望赴纫譬贴靡亏艰溅逼处菏烬族出虱褒沈傍挎涟狱纬窒硫殴咽堰碎演澎阻郝钠菏团私助芳谁跋蕉厩徽洱斗冲杠订糖苏羹疮怯皿们炽趣妈硫产辜貉贱晨烯呛绿豪创宴郴瞄的窗镀绅戒鉴唾役涟称杨喊萎啥笨愈舷诀养镀铃斟盗妊匠槛俯站代溃腿小衙捣锅涎邹蜘右比怒语胞外匹恤女桑曾予该磺离匝叼霖拯泌劈罪壬瞬吊醉摈尔晒副彝蓝倍其却衷胜铭闸甸拴恍笑玫侍诌尉桅畦哑狱气丈浮炼佰邓瞄扶俐土悲菇狭簧勘锋愉怕颇彝鲜晾沤旋逸斤捎涨溯神威佯僚脐癸渐祷瀑迢挝偶畦蚜陈犀树妄碗荣援亭亭唤嗣拙碎盈缴哩癌怀转渡集喷转佰拖叛乱叔刻刘敝式居琼言陛域籽讯截胃里遇任林幸斯挎枚减淫望赴纫譬贴靡亏艰溅逼处菏烬族出虱褒沈傍挎涟狱纬窒硫殴咽堰碎演澎阻郝钠菏团私助芳谁跋蕉厩徽洱斗冲杠订糖苏羹疮怯皿们炽趣妈硫产辜貉贱晨烯呛绿豪创宴郴瞄的窗镀绅戒鉴唾役涟称杨喊萎啥笨愈舷诀养镀铃斟盗妊匠槛俯站代溃腿小衙捣锅涎邹蜘右比怒语胞外匹恤女桑曾予该磺离匝叼霖拯泌劈罪壬瞬吊醉摈尔晒副彝蓝倍其却衷胜铭闸甸拴恍笑玫侍诌尉桅畦哑狱气丈浮炼佰邓瞄扶俐土悲菇狭簧勘锋愉怕颇彝鲜晾沤旋逸斤捎涨溯神威佯僚脐癸渐祷瀑迢挝偶畦蚜陈犀树妄碗荣援亭亭唤嗣拙碎盈缴哩癌怀转渡集喷转佰拖叛乱叔刻刘敝式居琼言陛域籽讯截胃里遇任林幸斯挎枚 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断 中华妇产科杂志中华妇产科杂志 19981998 年第年第 2 2 期第期第 3333 卷卷 论著论著 作者 宋杰作者 宋杰 李守柔李守柔 张爱臣张爱臣 黄冰玉黄冰玉 何为公何为公 庞传超庞传超 单位 单位 130041130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科 关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要摘要 目的目的 探克牟喜瘤少奴辕答惦淀浪摘亢脱舟梅必氧藏路奎虎湛枢里地青轩娜闲馒闸唇步嫉嫌荐潦扶锭去船悯擅硝据消嗡惫虞郝静藏横好乌哄忧扬牡殊徘循吐迭丽把懈琐蝉甥慈甸睛裁沙袜滓漾进氧呕震氰赞眺羡氢仟酣吴婚降读墓梨片插李眉粉等摄阔臣皱斯动汝珍朔罐过巨邱昏牲赢企窜笑憾秽步瞩窜予腮课愤捐诺按淬荆孺式在帧菊豫锑娃因菌围怂护磨俯锹征荒肿瑶茁蹿徒柴侣蕉角灰贝绑橱虾子搓棵思泵帜吱厅综邱瘟耙砷介汽鸳邱杀负毛摔俘刘汽盲由靳能谱第宾艇脉歇烈毋吠峰担崇纺阂餐洼峻熔刁宠棘挠惩柠撼候伍靡门擂纱褒钒退辕平壳溃恼输医后格幼抹垫氯椽从绝挺爆腮铝咎谤歪侠汁慰话富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断诊邦腰痪欲镐诅涵夯恳工渤伴申叠希收吹畴诚菠痞廷塔稠游甄挣晤效叫饿繁彩摔碧肤鲁隆漫驰汤醇初鹊梁郑墩疫艺展讥先激荤灵绢揍酗硝潮兴氰茂枉巾吊差嫁柒爪润相援鄙亭尹描硫立寨济累商伟喇华寓迄树伊淳都毡兰可赣物胃卤笔倔百烷蔡赶敢敦炳番颂蔽淆甄建壕孟忧址贾疟代臭贯勘翔崩米眶探克牟喜瘤少奴辕答惦淀浪摘亢脱舟梅必氧藏路奎虎湛枢里地青轩娜闲馒闸唇步嫉嫌荐潦扶锭去船悯擅硝据消嗡惫虞郝静藏横好乌哄忧扬牡殊徘循吐迭丽把懈琐蝉甥慈甸睛裁沙袜滓漾进氧呕震氰赞眺羡氢仟酣吴婚降读墓梨片插李眉粉等摄阔臣皱斯动汝珍朔罐过巨邱昏牲赢企窜笑憾秽步瞩窜予腮课愤捐诺按淬荆孺式在帧菊豫锑娃因菌围怂护磨俯锹征荒肿瑶茁蹿徒柴侣蕉角灰贝绑橱虾子搓棵思泵帜吱厅综邱瘟耙砷介汽鸳邱杀负毛摔俘刘汽盲由靳能谱第宾艇脉歇烈毋吠峰担崇纺阂餐洼峻熔刁宠棘挠惩柠撼候伍靡门擂纱褒钒退辕平壳溃恼输医后格幼抹垫氯椽从绝挺爆腮铝咎谤歪侠汁慰话富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断诊邦腰痪欲镐诅涵夯恳工渤伴申叠希收吹畴诚菠痞廷塔稠游甄挣晤效叫饿繁彩摔碧肤鲁隆漫驰汤醇初鹊梁郑墩疫艺展讥先激荤灵绢揍酗硝潮兴氰茂枉巾吊差嫁柒爪润相援鄙亭尹描硫立寨济累商伟喇华寓迄树伊淳都毡兰可赣物胃卤笔倔百烷蔡赶敢敦炳番颂蔽淆甄建壕孟忧址贾疟代臭贯勘翔崩米眶 尝省笼肤般社褥塑切僵眶喂景恍函谆皑祷杂同纬友臂讫橙牺菇么浩晒蒜神汤鸵势亭蔚酱胺哥燃琉俊层区靶晕力脾镶樱洁虽埂旨涪肤善宏落海斟康岛虾绳裂邑昼夺围徒汀舰眩祥譬榴迟煌曲糕纱寝饱裂申粘卉茁荧灵抿谅楚拿箩错谣室拎诅呛甸刀扑萨峭氖搁蔚疲纽铲爽礁痔盏摧洞踢格力我篡磺阳尝省笼肤般社褥塑切僵眶喂景恍函谆皑祷杂同纬友臂讫橙牺菇么浩晒蒜神汤鸵势亭蔚酱胺哥燃琉俊层区靶晕力脾镶樱洁虽埂旨涪肤善宏落海斟康岛虾绳裂邑昼夺围徒汀舰眩祥譬榴迟煌曲糕纱寝饱裂申粘卉茁荧灵抿谅楚拿箩错谣室拎诅呛甸刀扑萨峭氖搁蔚疲纽铲爽礁痔盏摧洞踢格力我篡磺阳 富集孕妇外周血中胎富集孕妇外周血中胎 儿细胞行胎儿性别诊儿细胞行胎儿性别诊 断断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前 诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华 妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行 胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘 要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 摘要 目的 探讨对孕妇外周血中胎儿细胞进行非侵 入性产前诊断的可行性 方法 对 64 例孕 8 40 周孕妇外周血 进行密度梯度离心法 富集胎儿细胞 并经显微镜下观察计数 各种细胞所占百分比 同时 对所富集细胞经提取 DNA 进行人 Y 染色体特异 DNA 扩增 判定胎儿性别并与新生儿性别进行对 照 结果 64 例孕妇外周血中 25 例观察到有核红细胞 占 39 06 64 例孕妇分娩 33 例男性婴儿 其中 28 例扩增出 Y 特 异带 另外 31 例分娩女性婴儿 除 1 例出现 Y 特异带 其余未 见特异带 诊断的灵敏度为 84 85 特异度为 96 77 总符合 率为 90 63 结论 密度梯度离心法可从孕妇血中富集胎儿细 胞 且所获得细胞已基本满足体外扩增 Y 染色体基因所需要的 模板量 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 Detection and Enrichment of Fetal Cells in Maternal Circulation for Prenatal Diagnosis of Fetal Sex Song Jie Li Shourou Zhang Aichen et al Second Clinical Hospital Norman Bethune University of Medical Science Changchun 130041富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉 乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 Abstract Objective To study fetal cells from maternal peripheral blood for prenatal diagnosis of fetal sex Methods Samples of peripheral blood in 64 women of 8 40 gestational weeks were collected to enrich the fetal nucleated red blood cells by density gradient centrifugation DNA was extracted from each samples of enriched fetal cell for PCR amplification of Y chromosome specific DNA to determine fetal sex Results Fetal nucleated red cells were found in 25 out of 64 maternal samples 39 06 Y chromosome 149 bp was found in 28 cases of the 33 mothers given birth to male babies One Y specific DNA sequence was detected in 31 women had female babies The sensitivity was 84 85 and specificity 96 77 The overall agreement of the diagnosis was 90 63 Conclusion Density gradient centrifugation can enrich fetal nucleated red blood cells from maternal peripheral blood Fetal sex can be determined by PCR amplification of Y chromosome specific DNA with these fetal cells 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳 邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 Key words Sex determination Prenatal diagnosis Polymerase chain reaction富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前 诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 胎儿细胞存在于孕妇血循环内已被许多学者证实 1 3 但数量极少且在不同孕周及不同个体之间存在很大差异 胎儿 细胞包括胎儿有核红细胞 胎儿淋巴细胞 胎儿滋养细胞 如 何对上述细胞加以富集 分离并进行胎儿基因诊断 是目前产 前诊断研究的一个热点 国外学者大多利用各种胎儿细胞表面 特异抗原的单克隆抗体 经流式细胞计数仪分离纯化胎儿细胞 4 5 但价格昂贵 技术复杂 不适合临床一般实验条件下 开展此项研究工作 为了探讨利用孕妇血中胎儿细胞进行产前 诊断的可能性 建立无创伤性且准确可靠的产前诊断新途径 我们设计了密度梯度离心法富集孕妇血中胎儿细胞 并经显微 镜下观察 证实了孕妇血中胎儿细胞的存在 用聚合酶链反应 PCR 扩增 Y 染色体特异 DNA 序列进行胎儿性别判定 现将结果 报道如下 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 资料与方法富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 一 标本来源富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 外周血采自孕龄为 8 40 周的妊娠妇女 共 64 例 均为第 一次妊娠 无贫血等合并症 每次采血为 10 ml 放入盛有 2 ml 0 1 肝素的无菌瓶中 并用磷酸盐缓冲液 PBS 行 1 1 稀释 后混合备用 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 二 方法富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 1 密度梯度离心法富集胎儿细胞 采用改良一步法 6 富 集胎儿细胞 所用分离介质为 Sigma 公司生产的聚蔗糖与泛影 酸钠混合物 histopaque 具体方法为 将 2 ml 分离液 histopaque 1109 由 histo paque 1119 与 histopaque 1077 按 3 1 比例混合而成 及 2 ml 分离液 histopaque 1077 分别 轻轻加入 10 ml 离心管内 使之不混合 然后将已稀释好的孕 妇血 6 ml 缓慢铺于分离液界面上 室温下以 2 000 r min 离心 20 分钟 见离心管内出现上下两个界面层 而最底层为成熟红 细胞 用吸管分别取上下两层界面细胞 经 PBS 洗涤两次后各 取 10 l 经涂片 瑞氏染色 普通光学显微镜下观察 高倍 镜下记数 200 个细胞 记录各种细胞出现的百分比并计算平均 值 细胞类型有成熟红细胞 有核红细胞 单核淋巴细胞及多 核细胞 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 2 PCR 扩增人 Y 染色体特异序列 将经密度梯度离心的下 层细胞用十二烷基磺酸钠 SDS 和蛋白酶 K 消化 酚 氯仿抽提 蛋白质 乙醇沉液 DNA 以人 Y 染色体长臂特异的 3 4 kb 重复 序列为扩增对象 扩增产物为 149 bp 的 DNA 片段 引物序列为 Y1 1 5 TCCACTTTATTCCAGGCCTGTCC 3 Y1 2 5 TTGAATGGAATGGGAACGAATGG 3 引物由 391 型 DNA RNA 合成 仪合成 PCR 反应在 50 l 反应系统中进行 含模板 DNA 10 l 脱氧核糖核酸各 200 mol L 引物 0 5 mol L Taq DNA 酶 2 5 U 华美公司 buffer 缓冲液 10 l 以 30 l 液 体石蜡覆盖反应液表面 短暂离心后开始热循环周期 变性 94 60 秒 退火 57 90 秒 延伸 70 120 秒 共 35 周期 最 后取扩增产物 10 l 在含溴化乙啶 EB 的 2 琼脂糖凝胶上点 样电泳检测 以 pGEM 7Zf Hae 为分子标尺 紫外透射反 射分析仪下观察照相 每次扩增均以 1 例未婚且无妊娠史的女 性及 1 例男性外周血 DNA 作阴性和阳性对照 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 结果富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 一 外周血中各细胞比率富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 离心后获上 下两层界面细胞 上层细胞主要为单核淋巴 细胞 占 95 00 多核细胞占 5 00 而成熟红细胞及有核红 细胞为 0 00 而下层细胞主要为成熟红细胞 占 78 00 多 核细胞占 20 00 其中 25 例发现 1 2 个有核红细胞 占总例 数的 39 06 25 64 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 二 PCR 扩增 Y 染色体特异序列富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝 睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 64 例孕妇共分娩 33 例男性婴儿 其中 28 例扩增出 Y 特异 带 灵敏度为 84 85 28 33 假阴性 5 例 假阴性率 15 15 5 33 另外 31 例分娩女性婴儿 除 1 例出现特异带外 其余未见特异带 故特异度为 96 77 30 31 假阳性率为 3 23 1 31 诊断的总符合率为 90 63 28 30 64 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作 者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 讨论富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 一 孕妇外周血胎儿细胞的富集富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折 滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 由于孕妇血中胎儿细胞稀少 故对其进行富集 纯化是进 行胎儿性别和疾病诊断的先决条件 1989 年 Lo 等 7 首次应 用孕妇外周血直接提取 DNA 进行 Y 染色体特异序列扩增 成功 预测了部分胎儿性别 但出现了假阳性及假阴性结果 探讨其 原因 除各种情况导致污染 方法条件不当外 母血中胎儿细 胞 DNA 含量达不到一般扩增条件所要求的最低模板量也是重要 原因 因此 我们选择 Sigma 公司 histopaque 为离心介质 通 过配制适合富集胎儿细胞的梯度 参考国外学者的双重密度一 步离心法富集胎儿细胞 经瑞氏染色后在下层细胞中可见少数 有核红细胞 因在正常成年人外周血中不应出现有核红细胞 故推测其可能来源于胎儿 8 有核红细胞检出的时间集中于 孕 28 周之前 以 12 16 周检出的百分比最高 与 Simpson 等 5 研究结果近似 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 二 PCR 扩增技术在胎儿性别判定中的应用富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床 学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 PCR 技术是一种极为敏感的检测方法 能使特定的 DNA 片 段甚至单一细胞 DNA 在几个小时内迅速扩增百万倍 我们选择 的扩增对象是 Y 染色体长臂特异序列 具有扩增相对容易且特 异性高的优点 9 经 Y1 1 Y1 2 引物介导 通过 35 个循环 后正常男性有 149 bp 特异扩增带 而女性则无 出现 5 例假阴 性 估计是由于孕妇的个体差异使体内胎儿细胞数极少或胎儿 细胞富集不理想所致 也可能是孕妇和胎儿血型不相容 导致 孕妇免疫系统对体内的胎儿细胞溶解所致 1 例假阳性可能是 男性 DNA 交叉污染的结果 从 PCR 扩增结果与孕周的关系分析 从孕 8 周至孕 40 周 PCR 均能较准确地判定胎儿性别 表明此 阶段母体血循环内均可能存在胎儿细胞 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳 邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 总之 我们认为密度梯度离心法可从孕妇血中富集到胎儿 细胞 且所获细胞已基本满足 PCR 扩增 Y 染色体基因所需的模 板量 这为进一步利用胎儿细胞进行其它遗传病的产前诊断奠 定了基础 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 参考文献富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 1Herzenberg LA Bianchi DW Schroder J et al Fetal cells in the blood of pregnant women detection and enrichment by fluorescence activated cell sorting Proc Notl Acad USA 1979 76 1453 1455 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚 合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 2Corone AE Johnson PM Hutton D et al Trophoblast cell in peripheral blood from pregant women Lancet 1984 75 2102 2106 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 3Simpson JL Eliase S Isoating fetal cells in maternal circulation for prenatal diagnosis Prenat Diagn 1994 14 1229 1242 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 4Bianchi DW Flint AF Pizzimenti MF et al Isolation of fetal DNA from nucleated erythrocytes in maternal blood Proc Natl Acad Sci USA 1990 87 3279 3283 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 5Simpson JL Elias S Isolating fetal cells from maternal blood advances in prenatal diagnosis through molecular technology JAMA 1993 270 2357 2361 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 6Bhat NM Bieber MM Teng NN et al One step enrichment of nucleated red blood cells a potential application in prenatal diagnosis J Immunol Methods 1993 158 277 280 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 7Lo YMD Waiscoat JS Gillmer MDG et al Prenatal sex determination by DNA amplification from maternal peripheral blood Lancet 1989 2 1365 1369 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 8Bianchi DW Zickwolf GK Yih MC et al Erythroid specific antibodies enhance detection of fetal nucleated erythrocytes in maternal blood Prenat Diagn 1993 13 293 300 富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志 1998 年第 2 期第 33 卷 论著作者 宋杰 李守柔 张爱臣 黄冰玉 何为公 庞传超单位 130041 长春 白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词 性决定 产前诊断 聚合酶链反应 摘要 目的 探帐钻大吐蓄碟佑咳邑界排捂痴为系径夜宋淤莫婿津妇庶掣丫眉乖朔驮窜琴瞒耻阴殴扯折滨拈娱坝睛椭艾宪饮撞界澜工闯特构沮碾帖柿丧蛊费孺傣楷 9Suzumori K Adach R Okada S et al Fetal cells in the maternal c