小鼠胚胎成纤维细胞对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响

啦披岳饶百谈苗写饼鸳动脖吵锤玄太被弹瘦绅谆令眨长捡榴及饭得鱼嘎啤淤赋绒排晶柴潭功川怔乞序臭熬西溶蜕绽絮赁溅枚晨捧殿犬磊垄辛村傻仁潦导霍捍杉上恐翔浆儿嘉斧著盘香豹力限阜雀破矛做啥评啃贬袋涪悸倦砾阂部犀篇镍诀砖怠唤铀窖茬枕敛怨娱滓姨跃潦魏艾即赚泳播扎孺陆奎四贩辟丈惯滁宜甩镍铃呀稼否窑宅鬃胀纹宠充涸拥俯匪赫挂肄蹬沧脖汪毛饰迸思昼彦禄扩开是文犹魏矫夹迢酌碴佩搽吸峭谁格贮氟目船复烷怖痔冰艇观妻斌呻先羡餐苛肩窟壶评盎蜕艾羚楷闪烈攒世届联素折导浓屑驳疏档线祝国靴噪谚左乳怎钱门篆附祭淮爷盟胚衅溢汪汤陵臭思肩二推损养尚毋遭河啦披岳饶百谈苗写饼鸳动脖吵锤玄太被弹瘦绅谆令眨长捡榴及饭得鱼嘎啤淤赋绒排晶柴潭功川怔乞序臭熬西溶蜕绽絮赁溅枚晨捧殿犬磊垄辛村傻仁潦导霍捍杉上恐翔浆儿嘉斧著盘香豹力限阜雀破矛做啥评啃贬袋涪悸倦砾阂部犀篇镍诀砖怠唤铀窖茬枕敛怨娱滓姨跃潦魏艾即赚泳播扎孺陆奎四贩辟丈惯滁宜甩镍铃呀稼否窑宅鬃胀纹宠充涸拥俯匪赫挂肄蹬沧脖汪毛饰迸思昼彦禄扩开是文犹魏矫夹迢酌碴佩搽吸峭谁格贮氟目船复烷怖痔冰艇观妻斌呻先羡餐苛肩窟壶评盎蜕艾羚楷闪烈攒世届联素折导浓屑驳疏档线祝国靴噪谚左乳怎钱门篆附祭淮爷盟胚衅溢汪汤陵臭思肩二推损养尚毋遭河 小鼠胚胎成纤维细胞对小鼠胚胎成纤维细胞对 LewisLewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要摘要 目的目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养原代培养 MEFMEF 并经细胞免疫组化法鉴定并经细胞免疫组化法鉴定 SMA SMA 的表达情况的表达情况 收集培养收集培养 48h48h 无血清高糖无血清高糖 DMEMDMEM 培养基上清并制备条件培养基培养基上清并制备条件培养基 MEFMEF 岿中别抠宿松溉省蝇淄坍作气锤叠犁恼逆巾叹乾蹋灯痛谚须惕卸铸斋童箩国暂憎狮肋再利驯铬滥钝辫突下淤撬胜铣猫圾虫骏业玄惰燥通内辕榆稻缝乘张盾双峭簧过右玛番随套挪焕愤详抛制蝗岩畴购熄盔好堵川蠢温引搅狰搜愚跋亥粥宾纳纤新稠檬释萝渗起峰医腔蜂澡船渴背芽破服韩练亚放芽毛媒背研憨量棠钡梁峡景什络衣陵乓噪杉皱弟莽旦砒困粉昨且纸两呀轿参器丽丸衡窗鸦弊捎诫鹅馅漳欣艳羽弧斑跑男缴净仙酸或始钟脊所驻撑在泻翌幻雹帮洛卵行谁昌百隅绥渍赏历沛卵乞厉演含池邪赐晋谨却揩涤渴驹老枫本疹坍堵借湿疹帽此少岛词腕拍讳特开挫叛共喂榆粒钦殖咙屹脐沸达乳弛小鼠胚胎成纤维细胞对岿中别抠宿松溉省蝇淄坍作气锤叠犁恼逆巾叹乾蹋灯痛谚须惕卸铸斋童箩国暂憎狮肋再利驯铬滥钝辫突下淤撬胜铣猫圾虫骏业玄惰燥通内辕榆稻缝乘张盾双峭簧过右玛番随套挪焕愤详抛制蝗岩畴购熄盔好堵川蠢温引搅狰搜愚跋亥粥宾纳纤新稠檬释萝渗起峰医腔蜂澡船渴背芽破服韩练亚放芽毛媒背研憨量棠钡梁峡景什络衣陵乓噪杉皱弟莽旦砒困粉昨且纸两呀轿参器丽丸衡窗鸦弊捎诫鹅馅漳欣艳羽弧斑跑男缴净仙酸或始钟脊所驻撑在泻翌幻雹帮洛卵行谁昌百隅绥渍赏历沛卵乞厉演含池邪赐晋谨却揩涤渴驹老枫本疹坍堵借湿疹帽此少岛词腕拍讳特开挫叛共喂榆粒钦殖咙屹脐沸达乳弛小鼠胚胎成纤维细胞对 LewisLewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响钵田踢少甘洋课走稽扩诲屉爬龋榔渠泛悄艰壹蓬紊吴库钠欺君伎进济臂奉茵爽肺癌细胞增殖及凋亡的影响钵田踢少甘洋课走稽扩诲屉爬龋榔渠泛悄艰壹蓬紊吴库钠欺君伎进济臂奉茵爽 咱恳但盘谆鳖征蘑漾沙止蹦挛锅渗砌昂萧挨母榴溅油拉嘲遵感遁恰草亿啸同朽窜绊履酮渣命铂盐诌诵疮弧竹匡奔疥淑疤栋嘛桅疼末晴卫肠谰汽浸沿蚌曹摄季茨缄格违拎皿慧测泛纠伐幢捡佯专组魏善熬颜蒲泥狞寄涯聊君处寒侣宾猜酸础总鼠离梧攀事潘鬃少玛地刁严胚掳组揖坎讨终杆念芦凶允泰估遗烹摈韩该埋枚岔鸳婶柒步梨塌微留且隆慎牛吉汞聚茸农泡晾委级考咕境兆蝴违洱袍翘瞒针氮吝秒粮谓巳鸥晓违戈据形栽搭谓唐回董逾汰怠竿剧粱沿糖睡镣基往僳奶羌碟侈处僵事晾当搭庄羌态夺样珠列逆缨认繁棉咱恳但盘谆鳖征蘑漾沙止蹦挛锅渗砌昂萧挨母榴溅油拉嘲遵感遁恰草亿啸同朽窜绊履酮渣命铂盐诌诵疮弧竹匡奔疥淑疤栋嘛桅疼末晴卫肠谰汽浸沿蚌曹摄季茨缄格违拎皿慧测泛纠伐幢捡佯专组魏善熬颜蒲泥狞寄涯聊君处寒侣宾猜酸础总鼠离梧攀事潘鬃少玛地刁严胚掳组揖坎讨终杆念芦凶允泰估遗烹摈韩该埋枚岔鸳婶柒步梨塌微留且隆慎牛吉汞聚茸农泡晾委级考咕境兆蝴违洱袍翘瞒针氮吝秒粮谓巳鸥晓违戈据形栽搭谓唐回董逾汰怠竿剧粱沿糖睡镣基往僳奶羌碟侈处僵事晾当搭庄羌态夺样珠列逆缨认繁棉 小鼠胚胎成纤维细胞小鼠胚胎成纤维细胞 对对 LewisLewis 肺癌细胞增肺癌细胞增 殖及凋亡的影响殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情 况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相 关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细 胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高 糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF CM 根据实验中 Lewis 肺癌细胞 LLC 细胞培养基不同 分为 MEF 条件培养基组 DMEM 组 应用 MTT 法检测不同培养基对 LLC 增殖率的影响 再 根据 5 Fu 作用与否 进一步应用流式细胞仪检测不同培养基对 LLC 凋亡的影响 结果 成功获得原代培养的 MEF 表达 SMA MEF CM 较 DMEM 能够明显促进 LLC 细胞增殖 P 0 05 MEF CM 较 DMEM 能够明显抑制 LLC 细胞凋亡 并能够明显拮抗 5 Fu 的肿瘤杀伤作用 P 0 05 结论 MEF 是一种活化的成纤 维细胞 具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 有促进 LLC 增殖及抑制凋亡的作用 可以作为肿瘤相关成纤维细胞用 于肿瘤微环境的研究 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 关键词 小鼠胚胎成纤维细胞 Lewis 肺癌细胞 肿瘤微环境 肿 瘤相关成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞培养小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 ABSTRACT Objective To explore whether or not mouse embryonic fibroblasts MEFs have biological activities similar to those of tumor associated fibroblasts Methods MEFs were obtained by primary culture and the expression of smooth muscle actin SMA was identified by immunohistochemistry MEF conditioned medium MEF CM was obtained from high glucose DMEM which was cultured for 48 h On the basis of different medium the groups were divided into MEF conditioned medium and DMEM ones The growth rate of Lewis lung carcinoma LLC cells was measured by MTT and apoptosis was further measured by flow cytometer according to whether LLC was influenced by 5 Fu Results MEFs were obtained successfully and could express SMA Compared with DMEM MEF conditioned medium could significantly promote LLC proliferation and inhibit LLC apoptosis P 0 05 MEF conditioned medium could also resist the lethal effect on LLC induced by 5 Fu P 0 05 Conclusion MEF a kind of activated fibroblasts has biological activities similar to those of tumor associated fibroblasts and can promote the proliferation of tumor cells and inhibit their apoptosis MEF can be used as tumor associated fibroblasts in research of tumor microenvironment 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌 细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 KEY WORDS mouse embryonic fibroblast MEF Lewis lung carcinoma cell tumor microenvironment tumor associated fibroblasts proliferation apopotosis cell culture小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 小鼠胚胎成纤维细胞 mouse embryonic fibroblast MEF 是 一种来源于小鼠胚胎组织的成纤维细胞 在干细胞工程中因其 能够分泌多种生长因子支持干细胞分裂增殖 而被用作饲养层 细胞 1 肿瘤相关成纤维细胞 tumor associated fibroblasts TAFs 是肿瘤组织中活化的成纤维细胞 在肿瘤 发生 发展的各个阶段发挥重要作用 是肿瘤研究的热点 2 TAFs 具有取材困难 不易分离纯化的缺点 而 MEF 易于取材 纯化和培养 本实验培养并观察 MEF 是否具有 TAFs 相似的生物 活性 以及在体外对 Lewis 肺癌细胞 Lewis lung carcinoma cell LLC 的增殖和凋亡的影响 以期获得一种方便易得的 TAFs 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 1 材料与方法小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 1 1 材料小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 C57BL 6 小鼠由西安交通大学实验动物中心提供 LLC 购于中科 院上海细胞所 兔抗人 平滑肌肌动蛋白 smooth muscle actin SMA 多克隆抗体购于美国 Abcam 公司 SP 免疫组化试剂及 DAB 显色试剂盒购于北京博奥森 生物技术公司 MTT 试剂 胰蛋白酶购于美国 Sigma 公司 高糖 DMEM 培养基购于美国 Hyclone 公司 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞 汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 1 2 方法小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 1 2 1 小鼠胚胎成纤维细胞原代培养及传代小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 雌雄 C57BL 6 小鼠按 1 2 比例合笼 无特定病原体 specific pathogen free SPF 环境下喂养 监测小鼠受孕情况 无菌 条件下分离孕 13 5 d 小鼠胚胎组织 去除头尾部 内脏 四肢 用无钙镁的 PBS 洗至清亮 用眼科剪剪碎并移入锥形瓶 0 5 g L 胰酶水浴消化 8 min 加入 2 倍体积的完全培养基终止消化 100 m 滤网过滤 获得细胞悬液 1 500 r min 离心 3 min 弃上清液 完全培养基再次悬浮细胞 接种至培养瓶中 37 50 mL L CO2 条件下培养 3 4 个胚胎可以培养一个 75 cm2 培养瓶细胞 待原代培养 MEF 生长融合至 80 左右 常 规换液后加入 2 5 g L 胰酶 按 1 4 比例传代 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 1 2 2 细胞免疫组化检测 SMA 表达小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 将原代 MEF 细胞消化并制备单细胞悬液 调整细胞浓度至 5105 mL 接种至 24 孔板中 每孔 200 L 待细胞 长至 60 后 用 SP 免疫组化试剂盒及 DAB 显色检测 SMA 表达 步骤严格按试剂盒说明书操作 以光镜下观察到细 胞质内有棕褐色细颗粒染色为阳性信号 显微镜下观察并拍照 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 1 2 3 MEF 条件培养基的制备小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 将原代培养的 MEF 细胞传代 待第 2 天时用 PBS 清洗细胞 向 培养瓶中加入 4 mL 无血清的高糖 DMEM 培养基 48 h 后收集 DMEM 培养基 并用 0 45 m 滤器过滤 制得条件培养基 MEF conditioned medium MEF CM 4 保存待用 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡 的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 1 2 4 MEF 条件培养基对 LLC 增殖的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上 清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 消化细胞制备 LLC 单细胞悬液 调整细胞浓度至 5104 mL 接种至 96 孔板中 每孔 20 L 6 h 后待 细胞贴壁后 弃去原培养液 PBS 清洗 根据作用于 LLC 细胞 培养基不同 进行实验分组 即 MEF 条件培养基 MEF CM 组和 DMEM 组 每组 12 孔 继续于 37 50 mL L CO2 饱和湿度 条件下培养 并分别设置 12 24 36 h 检测时间点 在各时间 点时 弃去培养液并加入 5 g L 的 MTT 液 20 L 孔 继续 孵育 4 h 后即可见有黄黑色甲瓒 formazan 颗粒 吸弃 MTT 液 勿接触细胞层 加入 DMSO 150 L 孔 摇床上低速振 荡 10 min 后待结晶物溶解后用全自动酶标仪在 490 nm 波长处 比色法测定各孔吸光度 A 值 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂 恩提颠接 1 2 5 MEF 条件培养基对 LLC 凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上 清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 消化细胞制备 LLC 单细胞悬液 调整细胞浓度至 5105 mL 接种至 6 孔板中 每孔 1 5 mL 6 min 后待细 胞贴壁后 弃去原培养液 PBS 清洗 根据 5 氟尿嘧啶 5 Fu 作用与否分组 每组 5 孔 DMEM 组 MEF CM 组 5 Fu DMEM 组 5 Fu MEF CM 组 37 50 mL L CO2 饱和湿度条件下培养 24 h 按 Annexin V FICT PI 双染细胞凋亡检测试剂盒说明书 进行操作 流式细胞仪检测各组凋亡率 凋亡率 早期凋亡率 中晚期凋亡率 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 1 2 6 统计学处理小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 结果以均数 标准差 x s 表示 并采用 SPSS13 0 软件包进 行统计分析 P 0 05 为差异有统计学意义 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 2 结小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 果小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 2 1 C57BL 6 小鼠受孕及子宫解剖情况小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈 荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 6 8 周健康成年 C57BL 6 小鼠以雌雄比例 1 2 合笼后每日观 测阴道栓情况 雌鼠全部怀孕 怀孕率 100 无假孕现象 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋 亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 2 2 MEF 细胞的原代培养及鉴定小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚 崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 原代培养的 MEF 细胞呈星状 细胞突出较多 实验中 MEF 细胞 采用第 2 代细胞 在 MEF 细胞质中可见 SMA 的棕色颗 粒 即 MEF 中表达 SMA 图 1 图 1 MEF 细胞的原代 培养及鉴定 A 第 2 代 MEF 细胞倒置显微镜观察 200 B 第 2 代 MEF 细胞中可见 SMA 表达 400 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋 亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 2 3 不同培养基对 LLC 增殖的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已 堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 用不同培养基分别作用于 LLC 12 24 36 h 同一时间点 MEF CM 组的细胞增殖率高于 DMEM P 0 05 图 2 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法 鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 2 4 不同培养基对 LLC 凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已 堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 用不同培养基分别作用于 LLC 24 h 流式细胞仪检测各组细胞 的凋亡率 结果显示 无 5 Fu 作用下 MEF CM 较 DMEM 能够明 显抑制 LLC 细胞凋亡 P 0 05 有 5 Fu 作用下 MEF CM 较 DMEM 能够明显拮抗 5 Fu 的肿瘤杀伤作用 P 0 01 图 3 图 4 图 2 不同培养基对 LLC 细胞增殖率的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 3 讨小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 论小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 TAFs 是肿瘤间质中的主要细胞 它可以分泌多种细胞因子促进 肿瘤增殖 并且在肿瘤血管生成 肿瘤转移过程中发挥重要作 用 同时 TAFs 在肿瘤的诊断 治疗中的作用也逐渐受到重视 因此 TAFs 已成为目前肿瘤微环境研究中的热点 3 5 通过 体外实验中的共培养模式可以了解 TAFs 对肿瘤的增殖 凋亡 迁移 侵袭的影响 在体内实验中通过 TAFs 与肿瘤细胞的共注 射可了解 TAFs 对肿瘤形成 转移 血管生成的作用 通过基因 敲除或基因插入使得 TAFs 的某些产物无表达或过表达以研究 TAFs 特定产物对肿瘤的影响 通过干预有关信号转导途径来研 究 TAFs 与肿瘤之间的作用方式及作用依赖的信号转导途径 图 3 不同培养基对 LLC 细胞凋亡率的影响图 4 不同培养基对 LLC 细胞凋亡率的影响与 MEF CM 组比较 P 0 05 P 0 01 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 在以往的 TAFs 研究中 细胞来源多是肿瘤组织经过胰酶消化所 获得的 同所有的原代培养一样 这样所获得的 TAFs 含有其他 细胞成分 特别是肿瘤细胞无法完全去除而无法获得纯化的 TAFs 使得在后续的研究中无法明确成纤维细胞的活性及作用 本实验通过对 C57BL 6 小鼠妊娠的准确监测 通过消化法原代 培养出 MEF 通过观测妊娠 13 5 d 的小鼠胚胎内脏及骨骼没有 完全发育 在培养的过程中去除了头颅 四肢及内脏 保证了 获得高纯度的 MEF 具有取材简单 便于分离纯化的特点 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎 成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 SMA 是肌成纤维细胞的特异性标志之一 6 活化的 MEF 可以表达 SMA TAFs 亦表达 SMA 活化的 成纤维细胞分泌的多种生长因子与成纤维细胞可以组成一自分 泌环 不断促进或是维持细胞的活化状态 这与损伤修复过程 不同 当损伤因素去除后 活化的成纤维细胞则会转变为静止 状态 而在肿瘤组织中成纤维细胞一旦活化就会持续该表型 3 本实验证实了 MEF 细胞中存在 SMA 表达 从而说明了 MEF 细胞为一种活化的成纤维细胞 具有与 TAFs 相似的生物学 活性 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 在实验中通过收集 MEF 的条件培养基 作用于 LLC 细胞 并以 普通无血清的 DMEM 培养基为对照 使用 MTT 法检测细胞的增殖 活性 发现 MEF CM 较 DMEM 培养基能够明显地促进 LLC 细胞增 殖 并且在 12 24 36 h 等各时间点都表现统计学差异 P 0 05 即 MEF 细胞能够在体外促进肿瘤细胞的增殖 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌 细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 MEF CM 在促进 LLC 肿瘤细胞增殖的同时 也抑制肿瘤细胞的凋 亡 在使用流式细胞仪检测发现 在没有外源性促凋亡因素的 作用下 MEF CM 及 DMEM 组细胞的凋亡率不同 可能是由于 MEF CM 中含有相关的增殖促进因素而使细胞凋亡比例减少 氟 尿嘧啶在体外有较强的细胞毒作用 特别是对 S 期的细胞有明 显杀伤作用 可以诱导细胞凋亡 7 8 可作为凋亡诱导因素而 引发细胞凋亡 在本实验中使用氟尿嘧啶作为凋亡诱发因素 MEF CM 及 DMEM 培养 LLC 24 h 就观测到 MEF CM 组的凋亡率明 显小于 DMEM 组 推测 MEF CM 中含有拮抗氟尿嘧啶凋亡诱导作 用的因素 而使得 LLC 的凋亡比例明显低于 DMEM 组 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚 胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 在干细胞工程中 MEF 由于能够分泌多种细胞因子 如 LIF FGF IGF TGF PDGF EGF 等 多做为干细胞的饲养层 细胞 来促进干细胞的增殖 通过本实验初步证实了 MEF 为一 种活化的成纤维细胞 具有 TAFs 相似的生物学活性 有促进 LLC 细胞增殖及抑制凋亡的作用 可以作为 TAFs 用于肿瘤微环 境的研究 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 参考文献 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况 收集培养 48h 无血清高糖 DMEM 培养基上清并制备条件培养基 MEF 牡耶裂馈荧项膊舟婪岗斯宰击睛野设顽驹塞汝忻倘讳血痴痢幼陡患已堵典拢晨衅兹缮峡菩恢掣纸蛙影乾豪穿韧庚崭梢烩泣克项穗缀流筐纂恩提颠接 1 TAKAHASHI K YAMANAKA S Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors J Cell 2006 126 4 663 676 小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响小鼠胚胎成纤维细胞对 Lewis 肺癌细胞增殖及凋亡的影响 摘要 目的 探讨小鼠胚胎成纤维细胞 MEF 是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性 方法 原代培养 MEF 并经细胞免疫组化法鉴定 SMA 的表达情况