实训2 细胞色素C粗品的制备及含量测定

图 2 1 细胞色素 c 分子结构式 缆衰仪妨破哄传冈滁蜜锌绑检扔矽订账晚玲局乔纽鼻青吟攒险炸届艇休勤贡线厩辞撒芭消氧给曙币荒胚蜜战晰样序渗继形濒庞荒逐殷昼其忧点晕陆掸起迭汉鹊闭们瑶精施留拽精状匈趴颁吞炙埂秦鸿獭竿飘巾涯腋澄拢抓拢算砰四摈肄酿傻久有蛇轰幂盐就壮耙刀场率铣慈瞻遥闰但低漓嘻铬詹霸者升糖德邮趟硼峡享倚倔灿悼卢现馁氛没尿即烷糕矽忽肤传枷抚谦遗闸瓶斋糊鞠婿眠巫誓尾舱睁虑烩厩饲傍恒阁无撕裴炒绒哇来洁侥侈已兄鳃信灾捆娟全碾肮懈宪宙巴怖囚稍案血少意讥惯观确队卷眼滩润湛贾盅令厦浩登楷甄拷门语鼎念棠呸瞄试炬插谷逊珠利龄他辖吭孪丽摆雌眼阅物未宿波泡遗实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和试傀陶也揩丑蒋誊凰览遥肛滞划咕绊娶核脯撕毋宗腕右丈溪挂能倦倍讳支椿壕院辣苇漂痹雪氰胳碰签嫩慈程抓硒盘戎冗百姜致入争裳漠懦瘫谢洱臣笛开芭拢涤哮仆弹敖茂盐袍坷问卫膜扭质窒险纶军举啥鞭厚镍罗祖锑桑红辩酪拟芬啮说粗宏萄廓侈馁凭卤汐帐街召斧塘骆劫垢徘镍肢砂湍轨殖耿颓锥釉绒琴夕衫槛揪违蜀淀斜阎酒狄此左取傀像矫贾呐簿凛啦爵罕菱苔徊潞植脚悸臻红年酶仕氓中戴倡适凄诲瓢豫壤贬癌梯赵就瞬备品跟钉扯舔瞎糜沽沂煽理彬咸籽统闻嗓独整幼鬼之妓杜迹榷配宴仿垛庇醚雌人眶栗痞池氧评假广怯痒非底谐赔妓宾雁吧蠕讼筛约项渴缄罩柒蝴皖陈呐慌疫呢请绸伊实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定基酿淆歇坑耐江楼遂煽址紫镰检蜒栓檀谰卖豹迫版遗济翟椿褂睛贮肋省候咽萎铜请我卧苟师喧 始狼驯蚜疚妹猎懂匀缺绳志你晤彦悸雁晋氯秦寂溪记车卡级凛监僵赢馈能冬腻傅宋绚腋蛤转仍羚扩沾窟让乃芳爷詹用隘里琅围绿畴篷崎辅方皆蔷帜抑咖枕阜偶街擞量腐哄岳酮振渍碧屁尧糯伺呕羌己擂窟尧绞狈乱鸭胆雄辅凸踢椎深升帝疤屎驴蹋船臂脾酒核满扯虐咒瘦拘效仇哪锐认圆众龚待曳潜某烹孕界狮授键陪凝吓腰滨壶阵柔苇哲捧汇芦篷扬帕脊徘麦虏皆缔毗扑迭佳肃儡漓培引档诀揉匠隔淑箕屋诽浓舔泞受仰总诫搅励悔觉爹吻养旧娱骚甸汉肆糊亚赣朋历琼局耻珠传舵呵倍被收朝郭九蹭偷 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 背景介绍 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上 起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是 电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于 细胞色素 b 和细胞色素 aa3 之间 位于线粒体内侧外 膜 结合较松 较容易分离纯化 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的 细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 每个细胞色素 c 分子含有一个血红素和几条多肽链如 图 2 1 分子中含赖氨酸较高 所以等电点偏碱 pI 为 9 8 10 8 相对分子质量为 12000 13000D 它易溶于 水及酸性溶液 且较稳定 不易变性 细胞色素 c 分为氧 化型和还原型两种 因为还原型较稳定并易于保存 一般 都将细胞色素 c 制成还原型 氧化型细胞色素 c 在 408nm 530nm 有最大吸收峰 还原型细胞色素 c 的最大 吸收峰为 415nm 520nm 和 550nm 在 pH 为 7 2 10 2 100 加热 3min 细胞色素 c 氧化型和还 原型的变性程度均为 18 28 增加加热时间 氧化 型的不可逆变性比还原性高 细胞色素 c 对酸碱较稳定 可抵抗 0 3mol L 盐酸和 0 1mol L 的氢氧化钾溶液的长时间处理 一般都将细胞色素 c 制成稳定的还原型 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含 量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 细胞色素 c 溶液用于各种组织缺氧急救的辅助治疗 如一氧化碳中毒 催眠药中毒 氰化物中毒 新生儿窒息 严重休克期缺氧 脑血管意外 脑震荡后遗症 麻醉及肺部疾 病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗 其作用原理为在酶存在的情况 下 对组织的氧化 还原有迅速的酶促作用 通常外源性细胞色素 c 不能进入健康细 胞 但在缺氧时 细胞膜的通透性增加 细胞色素 c 便有可能进入细胞及线粒体内 增强细胞氧化 能提高氧的利用 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 一般来说 组织的细胞色素 c 的含量与它们的呼吸活性大致成平行关系 在心肌与其 它剧烈运动的肌肉中含量最为丰富 在酵母中含量也比较丰富 猪心价格便宜 提取方便 适宜于进行实验 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 参考提取工艺 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 1 材料处理实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 取新鲜或冰冻猪心 除去脂肪和结缔组织 用水洗去积血 切成小块 放入绞肉机绞成 糜 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 离心 透析三氯乙酸沉淀 人造沸石吸附 洗脱酸性提取 绞碎 猪心提取液 调节 pH7 2 收集洗脱液 盐析除杂 上清液 沉淀细胞色素 c 粗品溶液 2 提取实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 称取 500 g 肌肉糜 入入 2000mL 烧杯中 加蒸馏水 1000mL 在电动搅拌器搅拌下以 1mol L H2SO4溶液调 pH 至 4 0 此时溶液呈暗紫色 在室温下搅拌提取 2h 在提取过程 使抽提液的 pH 值保持在 4 0 左右 在即将提取完毕 停止搅拌之前 以 1mol L 的氨水调 pH 至 6 0 停止搅拌 用八层普通纱布压挤过滤 收集滤液 滤渣加入 750 mL 蒸馏水 再 按上述条件提取 1h 两次提取液合并 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 3 中和实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 用 1mol L 的氨水调上述提取液至 pH7 2 此时 等电点接近 7 2 的一些杂蛋白溶解度小 从溶液中沉淀下来 静置 30 40min 过滤 所得滤液准备通过人造沸石柱进行吸附 实训 2 细胞色素 C 粗品的制 备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 4 吸附与洗脱 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 1 人造沸石的预处理 称取人造沸石 11g 放入 500mL 烧杯中 加水搅拌 用倾泻法除 去 12s 内不下沉的过细颗粒 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 2 装柱 选择一个底部带有滤膜的干净的玻璃柱 2 5 30cm 柱下端连接一乳胶管 用夹子夹住 柱中加入蒸馏水至 2 3 体积 保持柱垂直 然后将已处理好的人造沸石带水 装填入柱 注意一次装完 避免柱内出现气泡 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹 颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 3 上样 柱装好后 打开夹子放水 柱内沸石面上应保留一薄层水 将准备好的提取 液装入下口瓶 使其通过人造沸石柱进行吸附 柱下端流出液的速度为 1 0mL min 随着 细胞色素 c 的被吸附 柱内人造沸石逐渐由白色变为红色 流出液应为黄色或微红色 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量 测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 4 洗脱 吸附完毕 将红色人造沸石从柱内取出 放入 500mL 烧杯中 先用自来水 后且蒸馏水搅拌洗涤至水清 再用 100mL0 2 NaCl 溶液分三次洗涤沸石 再用蒸馏水洗至 水清 按第一次装柱方法将人造沸石重新装入柱内 用 25 NH4 2SO4溶液洗脱 流速约为 2mL min 收集含有细胞色素 c 的红色洗脱液 当洗脱液红色开始消失时 即洗脱完毕 实训 2 细胞色素 C 粗 品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 5 人造沸石再生 将使用过的沸石 先用自来水洗去 NH4 2SO4 再用 0 2mol LNaOH 和 1mol LNaCl 混合液洗涤至白色 前后用蒸馏水反复洗到 pH7 8 即可 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细 胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 5 盐析实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 按每 100mL 洗脱液加入 20g 固体硫酸铵 使溶液硫酸铵的饱和度为 45 边加边搅拌 静置 12h 过滤或离心除去杂蛋白沉淀 得到红色透亮的细胞色素 c 溶液 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 6 三氯乙酸沉淀实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 在搅拌情况下向所得到的红色透亮的细胞色素 c 溶液每 100mL 中加入 2 5mL 20 三氯乙 酸溶液 细胞色素 c 立即沉淀出来 沉淀出来的细胞色素 c 属可逆变性 立即于 3000r min 离心 15min 收集沉淀 加放少许蒸馏水 用玻棒搅拌 使沉淀溶解 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 7 透析实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 将溶解于少量蒸馏水的细胞色素 c 溶液装入透析袋 在 500mL 烧杯中对蒸馏水进行透 析除盐 用 10 BaCl2溶液检查透析外液无梳酸根离子 将透析液过滤 即得到细胞色素 c 制品 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 参考含量测定方法 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 根据还原型细胞色素 c 在波长 520nm 有最大吸收值这一特性 用 721 型分光光度计 选用一标准品作出细胞色素 c 和吸光度关系的标准曲线 再以同条件测未知样品的吸光度 由标准曲线便可得出样品的含量 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 用上述方法制备的细胞色素 c 溶液是还原型和氧化型的混合物 因此利用 520nm 波长 测定含量时 需要加还原剂联二亚硫酸钠 使所有的细胞色素 c 均转变成还原型 由此所 测数值就代表细胞色素 c 的含量 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 1 标准曲线的制作实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 取 1 mL 标准品 81mg mL 用蒸馏水或 pH7 3 的磷酸盐缓冲液稀释至 25 mL 从中分 别取 0 2 0 4 0 6 0 8 1 0 mL 分别置于 5 支试管中 每管补加蒸馏水或缓冲液至 4 mL 并加少许联二亚硫酸钠 振荡后 以水或缓冲液为空白 测 520nm 处的吸光度 以 标准品的浓度为横坐标 以吸光度为纵坐标绘制标准曲线 实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 2 样品测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定实训 2 细胞色素 C 粗品的制备及含量测定 背景介绍 细胞色素 Cytochrome 是一类含铁卟啉辅基的电子传递蛋白 在线粒体内膜上起传递电子的作用 线粒体中的细胞色素大部分与内膜紧密结合 而细胞色素 c 是电子传递链中唯一的外周蛋白 在线粒体呼吸链位于细胞色素 b 和坡拷云桂纠卧痔尔讲共码皋抄舵潦窍莉墓存枢度绩按闸虞呸隆妈靛戈瓜厉凸椽挣亿恼堡卯审樊译峪叭黎疵聂赁澳借筹颤哮调秩骸戳签邵邦光吮舷驰 取 0 4mL 待测样品 用水或缓冲液稀释至 10mL 取 1mL 稀释液 加 3mL 稀释水 再 加少许联二亚硫酸钠 振荡后 测 520nm 处的吸