药物制剂质量研究

药物制剂质量研究方法选择与验证,山广志中国医学科学院 北京协和医学院医药生物技术研究所分析测试中心,2014.10 南京,药 物,、,方法学验证,产品考察,确定质量限度,检测方法选择,质量目标,是/否订入标准,QbD,终产品,工艺研究,放行标准,关键中间体质控,药物质量研究,药物研发的要求,杂质情况,主成分情况,方法选择与验证,好药,标准情况,质量标准中的项目及方法要求,【鉴别】,【检查】,【含量测定（效价）】,【性状】,UV、旋光、密度、熔点,化学、UV、IR、NMR、旋光,HPLC、GC、容量法、酶法、生物测定法,质量标准中常见检测方法,化学、比色、pH、HPLC、GC、TLC、IC、CE、溶出（释放）度、原子吸收、水分,检测方法选择和设置,任何分析测试的目的都是为了获得稳定、可靠和准确的数据今天你“QbD”了么？本品“仿质量”还是“仿标准”？质量标准是控制产品质量的基本手段和范围检测方法是质量标准的手段仿药典品种如何验证方法？三类药如何仿？进口注册标准国外药典我该用什么方法。？创新药的检测方法如何选择？,仪器有确定的技术指标，经过检测证实其适用于需要验证的方法,证明方法能够实现预期目的，按预期要求运行,证实系统运行能够达到预期目标，得到准确实验结果,证明样品分析结果的准确性,系统适用性试验,质量控制检查,分析仪器确认,分析方法验证,影响数据质量的因素,检测方法的选择,方法与技术的“更新换代”,方法能够满足实验室间方法传递的要求,方法能够充分反映质控目标,方法准确、灵敏、简便、易行,含量和杂质分析方法的选择,含量与杂质分析是否采用同一个条件HPLC or UHPLC or 2DLC or GC正相 or 反相 or HILICIC or CE or 离子对含量与杂质采用何种检测器UV检测器是否ok折光、ELSD、CAD、NQADCD 、EDMS？前处理方法是否有效？,药物有效性的基石-对照品,理化检测用国家药品标准物质系指用于药品质量标准中物理和化学测试用，具有确定特性，用以鉴别、检查、含量测定、校准设备的对照品。国家药品标准物质管理办法2011.10.1国家药品标准物质研制技术要求一级国家标准物质具有很好的质量特性，其特性量值采用定义法或其他精准、可靠的方法进行计量二级国家标准物质具有良好的质量特性，其特性量值采用准确、可靠的方法或直接与一级标准物质相比较的方法进行计量。,国家药品标准物质分类,国家药品标准物质,1. 含量测定用化学对照品：系指具有确定的量值，用于测定药品中特定成分含量的标准物质。2. 鉴别或杂质检查用化学对照品：系指具有特定化学性质，用于鉴别或确定药品某些特定成分的标准物质。3. 对照药材/对照提取物：系指用于鉴别中药材或中成药中某一类成分或组分的对照物质。4. 校正仪器/系统适用性试验用对照品：系指具有特定化学性质用于校正检测仪器或供系统适用性实验用的标准物质。,对照品的特点,药品标准物质研制管理机构,对照品（标准品）、工作对照品、杂质对照品,对照品用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质。标准品用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。一级对照品在特定的背景下具有适宜的质量、其量值不需要再与另外的标准物质进行对比的对照品二级对照品经与一级对照品对照而得来的对照品。确证的范围及检测的程度小于一级对照品。（亦称：工作对照品）杂质对照品,标准物质建立的要求,制备标定保存和分发质量标准中收载的标准物质需要具有可行性和适用性,可大量制备高纯物质方法专属性强稳定性良好质量标准合理、可靠,对照品标定程序及项目,标化方案起草,查阅各国质量标准原料的检验报告原料的稳定性数据及引湿性确定对照品用途，了解原料性质制定标化项目及要求形成初稿，负责人审核,标化项目无国家对照品的品种,性状（比旋度）鉴别（MS、IR、NMR、UV）检查 有关物质（国内外药典方法）水分/干燥失重残留溶剂炽灼残渣含量测定（对标、容量法）,标化项目有国家对照品的品种,性状&鉴别检查 有关物质水分/干燥失重含量测定（对标法）当国家对照品换批时，必须重新标定三个实验室的数据,对照品标定项目,首批UVIRNMRMS元素分析X-ray衍射官能团分析,常用HPLC（DAD）GCTLCCEDSC相容度法UV、IR、NMR容量法旋光度水分、残留溶剂、干燥失重,标化实验,如实记录实验过程中的现象溶解过程，溶液状态有关物质计算方式归一化法自身对照法外标法,HPLC有关物质：平行2份干燥失重：精密称定2份，每份称样量约1.0g水分：分装前平行3份；分装后取X支炽灼残渣 ：1份引湿性 ：DVS/药典附录引湿性含量测定：对照品和原料各平行2份，每份不低于20mg,分装,分装条件的确定引湿性用途使用方式分装记录温湿度数量分装后均匀性的考察水分有关物质,包装容器必须能够保证内容物的稳定性玻璃（塑料）安瓿主要用于易氧化及液体原料常规品种可采用西林瓶包装对于易于氧化或潮解的品种，必须控制分装间的湿度并在氮（氩）气氛围下分装最小包装单元的实际装量与标示的装量应符合规定的允差要求，固体原料的装量一般为标示量的10%,标化报告,（一）概述（二）原料的来源与检验（三）结论,标化报告,（一）概述 类别各国药典收载情况：EP、USP、JP 国内药品标准 结构式、分子式、分子量,（二）原料检验： 1. 性状 根据质量标准项下的描述判定质量的优劣；若没有质量标准，也要将样品实际性状记录下来 理化性质：比旋度、折光系数、引湿性等 2. 鉴别 结构确证：UV、IR、NMR、MS、元素分析、X衍射、HPLC/TLC/GC鉴别、关键官能团的专属性鉴别,标化报告,3. 检查纯度 TLC、HPLC、 GC、DSC干燥失重或者水分残留溶剂炽灼残渣4. 含量测定容量法UV法 HPLC法,标化报告,定值方法,高准确度的绝对或权威测量方法定值两种以上不同原理的已知准确度的可靠方法低值多实验室合作标定使用高精密度方法与已知的一级标准物质直接比较赋值原则质量平衡法量值（%）= 100.0水分炽灼残渣残留溶剂 色谱纯度 100 ChP、WHO、USP、EP,影响对照品准确定值的因素,HPLC纯度水分炽灼残渣残留溶剂引湿性稳定性,稳定性考察,先密后疏原则考察项目有关物质水分/干燥失重含量测定可接受的变化限度,对照品的使用的注意事项,使用方式本品使用前不需处理，可直接使用 X干燥3小时后使用使用时自测水分注意事项：开瓶后一次使用完毕仅供国家药品标准规定项下使用说明书网上下载，按说明书操作更换新批次后，根据品种监测情况，一般对上一批次设置3-6个月仍可使用的缓冲期,对照品局限性,尽管同一批对照品不同标定方法的含量有很好的相关性，但并不完全相同，有时差别会很大。如：头孢呋肟酯对照品，HPLC标定为96.9%，供含量测定用；UV为98.8%，供溶出度测定。中国药典凡例明确规定Chp对照品仅用于正文中所规定的分析方法。常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起问题！,效期和说明书,中国药品生物制品检定所提供的标准品大部分均无使用说明书和使用期限。大都沿用新的批号出现、旧的批号自动停止的管理方式。,二级对照品（工作对照品）的标定,一级对照品的规格小、价格高、购买周期长的缺点，对于实验室对照品用量大的企业来说，使用二级对照品成了实验室的首选。选定样品优质，高纯标定样品选择“合理”的方法标定13人、3样、3机。RSD应小于0.5%（HPLC法）标定2建议按照“新”对照品标定一次，与“对标”结果应相符。分装西林瓶，单次使用量，一次用完。效期1或2年（据稳定性数据），不超过样品效期储存28期间核查半效期,杂质对照品,是否需要设置杂质对照品外标法定量？自身对照行不行？加校正因子行不行？系统适用性（定位）？相对保留时间行不行？降解能否获得？是否有相似替代品？技术门槛？！杂质对照品的研制获得方式：定向合成、富集纯化、分离纯化结构确证纯度检查是否稳定，能否满足长期供应？,“量体裁衣”方法学验证,方法验证的步骤,USP规定实验室应采用试验方式进行方法验证：“应通过实验室的研究制定成一定的分析方法验证程序，证明方法的性能参数符合预期的分析应用要求。”验证过程应满足以下条件：易于使用；能够用计算机系统自动控制；每次分析的成本；样品能量；运行时间；以及环境、健康和安全要求,分析方法验证的法规要求,方法验证的目的证明所采用方法适合于相应检测项目的要求，能够真实反映产品质量，做到质量可控！新分析方法用于常规检测前必须验证方法转移到新的实验室后需要进行重现验证（或方法确认）新药申报，质量标准中的分析方法必须验证！生产工艺变更、制剂组分变更、分析方法修订时，质量标准中的分析方法必须验证！方法验证的指导原则中国药典2010年版二部附录XIX A（只有项目没有标准）ICH Q2（A/B）FDA cGMPs 211.165，211.194USP 通则, ,验证项目及内容,不同项目验证内容不同！以证明方法适用为根本目的！, 已有重现性验证，不需验证中间精密度。 如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。 视具体情况予以验证。,含量测定方法验证接受标准,容量分析法：原料药精制品（99.5%）或对照品考察精密度RSD0.2%；回收率99.7100.3%UV法：精制品考察精密度RSD1%；制剂回收率98102%；线性吸光度在0.20.7，r0.9999(n 5)，截距近于零。HPLC法：精制品考察精密度RSD2%；制剂回收率98102%；线性r0.999(n 5)，截距趋于零,方法验证的步骤,初步确定分析方法制定验证方案验证目的、验证项目、接受标准准备仪器设备、原料、对照品人员准备、文献材料调研开展验证收集实验记录和图谱提交验证报告评价方法是否通过验证,方法验证的筹备防止不必要的失误,用于测定关键验证参数的化学品，应具备足够的数量，足够稳定，并且按照技术指标核查其具有确切的成分和纯度。其他材料和消耗品也应符合要求。应选用新的并且符合色谱柱性能指标要求的色谱柱（防止材料导致的失败）分析设备应有明确的规定和良好的性能，并经过确认或校准，以确保其满足分析方法要求的功能和性能指标。应选择中等性能的设备，而不要选择性能最好的设备。否则，用不同设备进行中间精密度和重现性研究时可能会有问题，不容易满足标准限度的要求。操作人员应对技术和设备足够熟悉。这样，他们可以更容易地识别和诊断不可预见的问题，并且更加高效地完成整个过程。,分析方法验证顺序,没有标准程序！耗时最长的实验放在最后！专属性重复性（RT、Area）线性、定量限、检测限、范围准确度中间精密度（重现性）耐用性,部分数据可以套用！说法不一！斟酌考虑！,方法验证项目的要求保证分析方法能够用于在研药品的质量控制,专属性有其他成分（杂质、辅料等）存在时，拟定的方法能否准确（分离）测定出被测物；反映方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力；指用于复杂样品分析时是否受到相互干扰。分别分析加有杂质、降解产物等控制成分的样品和实际样品，比较两组测试结果空白无干扰主成分与有关物质完全分离（分离度r 1.5）峰纯度符合规定（ 980）考虑基质(辅料、水、食品等)对专属性的干扰，关注样品制备减少干扰的发生。,方法验证项目的要求专属性,鉴别与可能的共存物或结构相似物质相区别空白辅料、结构相似物以及其他组分均呈负反应含量测定、杂质检测提供代表性色谱图表明各组分（成分）位置分离度符合规定含量测定供试品中加入杂质，考察对测试结果的影响(杂质定位)杂质测定供试品加入杂质，考察杂质间的分离情况,降解试验以及降解途径的研究,降解条件选择酸、碱、氧化浓度、温度、时间高温、光照时间、光强分离条件的优化峰纯度分离度主要降解杂质鉴定降解程度控制降解1020%至少有一个条件降解与非降解品比较；体现考察摸索和研究的过程,方法验证项目的要求专属性,尝试选择合适的色谱柱或色谱条件获得方法的专属性评价目标色谱峰纯度（二极管阵列检测器、MS）当共洗脱化合物的光谱图非常接近时，紫外-可见二极管阵列检测器就有其局限性，这在代谢物及其母体化合物时极有可能发生,方法验证项目的要求专属性,当共洗脱化合物的光谱图非常接近时，采用MS检测器质谱通常比紫外光谱专属性更强，因此常用于色谱的选择性评价,方法验证项目的要求专属性,猪去氧胆酸+胆酸,胆酸,m/z=391.44猪去氧胆酸,m/z=407.43胆酸,m/z=407.38胆酸异构体？,胆酸,猪去氧胆酸,方法验证项目的要求系统适用性,系统适用性6份供试品溶液响应因子RSD 2.0 %主峰保留时间RSD 1.0%主峰拖尾因子2.0（0.951.05）主峰与杂质峰基线分离（ 2.0 ）理论板数符合规定,方法验证项目准确度,准确度测定结果与真实值或参考值接近的程度（百分回收率）绝对回收试验 空白辅料(B)+对照品(A)测定，测得量(M)= 100% （实测值/理论值）加样回收试验已准确测定含量(P)的真实样品+对照品(A)，测定，测得量(M)80%、100%、120%三种浓度，每浓度3个样品= 100% （实测值/加入值）98.0%102.0%；RSD2.0%（n=9）,方法验证项目准确度,原料药,利用已知纯度的对照品或样品进行测定与已建立准确度的另一方法测定结果进行比较（容量法！）,制剂,空白辅料+对照品制剂+对照品（无法获得空白辅料）,方法验证项目的要求精密度,精密度同一样品多次测定结果的接近程度重复性 6份供试液（100%浓度），含量RSD 2.0%（n=6）检测范围内，3水平，9样品测定（回收率结果）中间精密度 （与重现性“二选一”）6份供试液，双人双机分别测定，含量RSD 2.0%（n=12）人员、仪器、操作条件、试剂、色谱柱等因素影响重现性不同实验室，不同人员测定结果的精密度（方法通用性，方法转移）,方法验证项目的要求灵敏度（检测限）,检测限被测物能够被检测出的最低浓度或含量。限度指标，无需定量。目视法：能够可靠检出的被测物的最低浓度或含量(结果记录！)信噪比法：仪器分析法(计算基线噪音)，s/n 3标准差法(I)：A3 (n6) A:平均峰面积；：偏差标准差法(II)：空白=0：测背景噪音(n10)，计算标准差；计算标曲上3对应的浓度，即为检出限空白0：测背景噪音(n10)，计算标准差；计算标曲上(Y截距+3)对应的浓度，该浓度即为检出限空白0：测背景噪音(n10)，计算标准差；计算标曲上3对应的浓度，X截距+该浓度即为检出限,方法验证项目的要求灵敏度（定量限）,检测限被测物能够被定量测定的最低浓度或含量，结果应准确和精密。信噪比法：仪器分析法(计算基线噪音)，s/n 10标准差法：A10 (n6) A:平均峰面积；：偏差六份定量限溶液，主峰保留时间RSD 2.0%；主峰峰面积RSD 2.0%工作站计算信噪比，注意选取参比时间色谱图显示s/n,方法验证项目的要求线性,线性被测物浓度与结果之间呈正比关系的程度回归方程（最小二乘法；一次、二次、双对数）80%120%；定量限120%n6（至少五个点，均匀分布）r 0.998Y截距在100%响应值的2%内响应因子RSD 2.0%,方法验证项目的要求范围,范围达到一定精密度、准确度和线性下，测试方法使用的高、低浓度或量的区间根据分析方法具体应用和线性、准确性、精密度验证的结果和要求确定一般用与检测结果相同的单位表述（百分比、百万分之几）。含量测定：80%120%含量均匀度：70%130%杂质：报告值（定量限）限度120%溶出度：范围20%（下限-20%上限+20%）,方法验证项目的要求耐用性,耐用性实验条件略有变动，是否影响检测结果；衡量城规情况下实验结果的重现性；如方法易受影响，应着重注明！关注溶液稳定性影响（不同储存时间的样品和对照品溶液与新制备对照品溶液的比对结果分析）关注提取条件影响！常规考察：流动相比例变化(5%)、pH变化(0.2)、柱温变化(5)、流速变化(20% )、检测波长（2nm）色谱柱：同品牌不同批号每条件测试2次拖尾因子2.0主峰与杂质峰基线分离各条件含量数据 RSD2.0%,方法确认和转移,方法验证主要在产品开发阶段完成生产后的验证包括方法确认和方法转移方法确认本单位生产的产品是否符合变更后的国家标准或药典标准关注新旧方法的区别确认新方法的接受标准对实际样品和稳定性样品进行考察方法转移研发单位转移方法至接受单位（生产单位）,杂质谱分析,根据主成分及杂质的理化性质、化学结构、杂质的控制要求，采用适当手段将杂质的信号放大，易于辨认和定量。化合物结构特征、理化性质、剂型特征、工艺过程、标准要素综合设计、严谨研究、规范验证。专属、灵敏、准确、简捷。分析方法各有局限，注意不同原理分析方法间的相互补充和验证。杂质谱研究遵循原则：质量守恒！,杂质谱分析方法建立,方法的选择不同原理方法比较方法的最优化色谱系统选择杂交色谱（柱串联）二维色谱新技术应用（HILIC）检测器的选择UV、DAD/ ELSD、CAD、NQADIR / MS,杂质谱分析杂质比较与谱峰归属,比较方法图谱叠加平行列表逐峰比较结果报告新杂质（个数、单个最大、总量）单一新杂质量（0.1%？、0.2%？）新杂质总量所占比例,杂质谱分析阿奇霉素中可能的杂质：37种,原料：红霉素 A、红霉素 B、红霉素 C、红霉素D、红霉素 E、红霉素 F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F中间体：红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、红霉素 C肟（E）、9，11-亚胺醚、红霉素C 6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺 副产物：红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）- 3,4-去氢阿奇霉素、 O-甲苯磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8， 9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮,杂质研究关键点方法合理性,色谱方法（HPLC、TLC、GC）,HPLC：杂质是否有UV吸收(检测器的选择)、溶液是否稳定、方法本身是否引起药物降解TLC：固定相的选择显色方式（UV吸收的差异、显色剂灵敏度的差异）溶液是否稳定薄层固定相是否会引起药物的降解,检测手段,检测器DAD / UVELSD /CAD/ NQADIR /MS首选DAD 检测器，考虑”通用”检测器检出杂质的数与量干扰因素操作的便捷性除非GC，不建议衍生化,杂质研究关键点建立的方法能否有效检出所有杂质？,HPLC洗脱方法的选择-等度洗脱 or 梯度洗脱等度洗脱极性大的化合物可能被掩盖；极性小的化合物难以被洗脱，甚至保留在柱上梯度洗脱杂质研究中值得借鉴的手段；有效检出极性相差悬殊的系列杂质验证等度洗脱法对各类杂质的检出能力,原方法,新方法,分离方法的选择！,杂质研究关键点测定值是否真实反映杂质的含量？,申报资料中“HPLC检测波长的选择”问题 (a)直接将主药的最大吸收波长选作检测波长; (b)简单地套用含量测定的色谱条件。实际仍是以主药的最大吸收波长作为有关物质检测波长; (c)以样品进行破坏性试验（酸、碱、热、光照、氧化等）后的溶液做紫外扫描。由于未破坏主药所占比例较大，故破坏性试验后溶液的最大吸收波长一般仍为主药的最大吸收波长。若盲目地将主药的最大吸收波长确定为检测波长，则杂质在此波长下的吸收可能偏低；某些杂质甚至无吸收，这样会造成对杂质含量的低估甚至漏检，从而不能反映产品的真实质量。无紫外吸收或检测波长处吸收相差较大的多种化合物，有时在单一检测波长处不能检出,检测方法的选择！,杂质研究关键点测定值是否真实反映杂质的含量？,HPLC波长选择解决方案对产品中可能存在的杂质（合成原料、中间体、副产物以及降解产物）的紫外吸收特性进行研究。已知杂质的紫外吸收特性可采用对其流动相溶液直接进行扫描的方法考察;未知杂质（如未知降解产物等）可通过二极管阵列检测器考察其紫外吸收情况。根据各主要杂质及主成分的紫外吸收特性，选取响应值基本一致的波长作为有关物质的检测波长。若对不同杂质难于找到均适宜的检测波长：选择在不同波长下分别测定，采用加校正因子的主成分自身对照法。改用通用检测器（ELSD、CAD、NQAD）,杂质研究首选HPLC-DAD；建议HPLC-DAD-CAD联用！,杂质研究关键点多种方法联用,由杂质多样性复杂性和方法局限性所决定。单一方法不能满足多个杂质的检测时，可采用两种或两种以上的方法互为补充。化学法、色谱法、光谱法、生物检定法同一方法采用不同的测试条件，如正相HPLC、反相HPLC、不同流动相的反相HPLC等分离技术与检测手段联用，较为有效，如HPLC、GC、LC-MS、GC-MS、HPLC-DAD、CE等多维色谱（HPLC-IC）多检测器联用（LC-DAD-CAD-MS）,杂质研究关键点检测方法的规范性验证,专属性：原料药合成中间体、粗品等的分离度考察原料药及制剂的强制破坏实验制剂辅料干扰实验杂质加入实验与药典或经过论证的其他方法比较峰纯度检测（DAD/MS）,杂质研究关键点检测方法的规范性验证,灵敏度：通常用检测限及定量限表征直观评价、信噪比、响应值的标准差和斜率获得。关注杂质紫外吸收特性，确定适宜波长；判断是否需要采用杂质对照品精密度：重复性(在相同条件下由同一分析人员测定所得结果的精密度)中间精密度(在同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度)重现性(在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度),杂质研究关键点检测方法的规范性验证,准确度：已知杂质：回收率（根据精密度、专属性、线性）推断未知杂质：与另一成熟方法比对、根据