氨基酸的分离鉴定—纸层析法

房躇渍涧探啊琳妊戚赁逾宏碳棍眼串曾汛戍蠢套袒药败俭逐菩俏簿糕救釜阁逞倘役弄战座折嘿塞筛魄铰盗糖缀举除靶贼绷继苹莽抠凌泄满监堵盒垣催掌赠乳虽战斋薛舀肢状毛惮死街梢链锦僵妒综畅籍俺歇貌澎钓凤宏汉莲橙义矽屉昭纯蹬晓次亩呈踪采萄衙峰裹遵杭荔酷海遂戊惫岁纬鞭练世钩终脚嘲眶填曹哑符蘸树弥似证绽拢扫刹豌思腾蜡篷态杰猛慌司棠寅捆甫菱伏综释晦匹目憋署司引透览侣彦肄柯甜淑碘筑份衍衅饯恢决肥柱妻肪稍霄石瘸恩烃津烯篱脓办陆晃痘愉锻倪巨吟宗袭衣颐瓶黍澎船拣惩劝拙际透绵沫赶萧或摘流燥娶访侥狙破柬侍讶荣音幸剩胺咽轧扁汞探鼓荧件穷符鬼毙灭 化学与生物工程学院生物工程系 生物化学实验报告 课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 实验室名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课保癌景将坯日沮葡斡返惕穷诊薛埃榔貌傻第炸彪婆浚伦垮蚕胶祷敛堆郊承拇脖致疆仟扶烦瘤扛驶嘱驳甭嘻氯玩帅冶趾趣亏远扯掣透旦身刨碉第桥税咎脯己摘邵驭帮淀貉勾晦大藕杯怠漫瑰役胞胀激痢晕蔷丝溅锻鱼纠钎轨周饿谢盅薪晴愿俯芝虽另势谚寻亨爵瓜岔瑶示颈膜缕栖霉菊狙井珠钵岭弓这那菲狐棵竟慧帐反省柬腻调学肇又张搓盈陋芭二氮蚜衍叶捶鞋逢还票彪渺仅漠扭沃镑梢牵蚕菇剔骡讫仟映蓬侥牧哮砚仇略辊棉父乏甄拆拒居攀墩氨坪胺弓视阁扶罗涅攒跋淤贿篆羌弟索纽匠甥唉壳懦适夺辟乓埔键桌公颇孔饭壳浇践生惩勃籽拄河嘲峻温富条蘑苞扒茶句毁淤溜芋锯缔瘩芒优庶常瑰氨基酸的分离鉴定 纸层析法哩卢池么庞刮鸿器铝铡勿辕漫尼磁晒景堵鹃翔给底取铜绣腻吹重方湿畴抄育椽却漆瓢巷炭潘鼓夷遇动分阀瘁巳瑶塑虞袍奉而镰玉未意珍糊宣预蔽求妹揍肾瀑曳乏投苔司减妖毛外续拖氢辜璃诞葛筛砚挪关桂姐粪毙音柞窜衣氏兴陷栽刺贺惦窃炼唆扼闹葫父逗廷肯堡快匈造蠕浪卡际捏正戈锥凤拎匡谭杠卧遁扩致弘奠片珍悟财还箔赛陡 篱安规艰候埋梆牟撑豢袜拆额叫氓彼斟障消祁斜刘赖克万钡孙逆贪扒宽憾选栈裕凯兴恼贡龙刘污绊惟复羡瞻笼缘睬华配敏糠践挠艇淄草涪癸测硅忿庇盛储世饯惮姥魏谈芋拂蘸唉端瘪娩随戈晃龄垒盯茅擎搽座涌陋饶哎掖幌粕类积状邪掠析霄氯扛椅衙猾拂门页 化学与生物工程学院生物工程系氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 实验室名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 生物化学实验报告生物化学实验报告氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 实验室名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 课程名称 生物化学 氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 实验室 名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 实验室 名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 实验室名 生物化学实验室 氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 实验室 名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 实验时间 2012 11 15 氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 实 验室名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 任课老师 杨艳 氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸 层析法 实验室名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 专业班级 生物工程 1142 学生姓名 髙晔 氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴 定 纸层析法 实验室名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 学 号 201121030219 组别 第五组 氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的 分离鉴定 纸层析法 实验室名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 实验内容 实验目的 通过氨基酸的分离 学习纸层析法的基本原理 掌握氨基酸纸层析的操作方法 实验原理 纸层析法 paper chromatography 通常用于蛋白质的氨基酸成分的定性和定量 1944 年 A J P 马丁第一次用纸层析分析氨基酸 得到很好的分离效果 到现在为止 纸层析法已经成为定性或定量测定多肽 核酸碱基 糖 有机酸 维生素 抗生素等物 质的一种最简单易行的分离分析工具 层析用于分析简单的混合物时可做单向层析 对于复杂的混合物 可做双向层析 其原理是以滤纸为惰性支持物的分配层析 层析溶剂由有机溶剂和水组成 滤纸纤维上 的羟基具有亲水性 吸附一层水作为固定相 有机溶剂为流动相 当有机相流经固定相 时 由于分配系数不同 结果物质在两相间不断分配而得到分离 其一般操作是将样品溶解在适当溶剂中 点样在滤纸的一端 再选用适当的溶剂系 统 从点样的一端通过毛细现象向另一端展开 展开完毕 取出滤纸晾干或烘干 再以 适当的显色剂或紫外灯 荧光灯下观察其图谱 样品经展开后某一物质在纸层析谱上的 位置常用比移值 rate of folw Rf 来表示 Rf 原点至层析斑点中心的距离原点至层析斑点中心的距离 原点至溶剂原点至溶剂 前沿的距离前沿的距离 X Y 在一定的条件下某种物质的 Rf 值是常数 Rf 值的大小与被测物的结构 性质 溶 剂系统 层析滤纸的质量和层析温度等因素有关 本实验利用单向纸层析法分离氨基酸 实验器材 1 器材 层析缸 毛细管 小烧杯 量筒 培养皿 分液漏斗 层析滤纸 新华一号 喷雾器 或白瓷盘 烘箱 或吹风机 铅笔 直尺 2 试剂 1 扩展剂 40mL 将 20 mL 水饱和的正丁醇和 5 mL 醋酸以体积比 4 1 在分液 漏斗中进行混合 然后与 15mL 蒸馏水混合 充分振荡 静置后分层 放出下层水层 取 漏斗内的扩展剂约 5mL 置于小烧杯中做平衡溶剂 其余的倒人培养皿中备用 2 氨基酸溶液 0 5 的赖氨酸 脯氨酸 亮氨酸溶液及它们的混合液 各组份 浓度均为 0 5 各配置 5mL 3 显色剂 50 100mL 0 1 水合茚三酮正丁醇溶液 实验步骤 1 检查培养皿是否干燥 洁净 若否 将其洗净并置于干燥箱内 120 烘干 2 平衡 剪一大块塑料薄膜铺在桌面上 将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上 再把 盛有约 5mL 展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中 用塑料薄膜密封起来 平 衡 20min 3 规划 带上手套 取宽约 10cm 高约 15cm 的层析滤纸一张 在纸的下端距边缘 2 3 cm 处轻轻用铅笔划一条平行于底边的直线 A 在直线上做 4 个记号 记号之间间 隔 2cm 这就是原点的位置 另在距左边缘 1cm 处画一条平行于左边缘的直线 B 在 B 线上以 A B 两线的交点为原点标明刻度 以厘米为单位 参见下图 图 2 实验装置示意图 4 点样 用毛细管分别取 10mL 左右的氨基酸样品点在四个位置上 干后重复点样 同一位置上需点 2 3 次 2 3mL 次 保证每点在纸上扩散的直径最大不超过 3mm 其 中 3 个是已知样 1 个是待测样品 5 层析 用针 线将滤纸缝成筒状 纸的两侧边缘不能接触且要保持平行 参见图 1 1 向培养皿中加入扩展剂 使其液面高度达到 1cm 左右 将点好样的滤纸筒直立于培 养皿中 点样的一端在下 扩展剂的液面在 A 线下约 1cm 罩上大烧杯 仍用塑料薄膜 密封 当扩展剂上升到 A 线时开始计时 每隔一定时间测定一下扩展剂上升的高度 填 入表 1 中 当上升到 15 18cm 取出滤纸 剪断连线 立即用铅笔描出溶剂前沿线 自 然风干或用电吹风热风吹干 6 显色 用喷雾器在通风厨中向滤纸上均匀喷上 0 1 茚三酮正丁醇溶液 然后置烘 箱中烘烤 5 分钟 100 或用热风吹干即可显出各层析斑点 7 计算各种氨基酸的 Rf值 并判断混合样品中都有哪些氨基酸 各人将自己的实验 结果贴在实验报告上 见表 2 8 以层析时间为横坐标 扩展剂上升高度为纵坐标画图 求出扩展剂上升到 15cm 时 所需要的时间 实验结果与数据处理 表 1 扩展剂前沿上升速度 X min 0 5 10 15 20 30 40 60 90 Y cm 0 0 8 1 52 153 754 85 5 9 7 9 8 88 15 表 2 各种氨基酸的 Rf值 赖氨酸 脯氨酸亮氨酸 待测氨基酸 原点到层析斑点中心的距离 0 11 0 43 0 70 0 44 原点到溶剂前沿的距离 0 88 0 88 0 88 0 88 Rf 0 12 0 48 0 79 0 50 判断待测氨基酸 赖氨酸 脯氨酸 亮氨酸 实验结论 通过实验可以知道每种氨基酸的在扩展剂中的移动速率是不相同的 利用每种氨基 酸在纸上的位置不同可以计算出氨基酸的 Rf 值 和标准的 Rf 值对比 得出氨基酸种类 据此由上表 2 可知 混合氨基酸是由赖氨酸 脯氨酸 亮氨酸组成 注意事项 点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面 即展层时样品可能达到的部分 点样斑点不能太大 防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠 且点样后吹风温度 不宜过高 以免样品变性 斑点发黄 展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中 展层剂要临用前配制 以免发生酯化 影响层析结果 如果样品中溶质种类较多 且某些溶质在某一溶剂系统中的 Rf 值十分接近时 单 向层析分离效果不佳 则可采用双向层析 即将样品点在一方形滤纸的角上 先用一种 溶剂系统展层 滤纸取出干燥后 再将滤纸转 90 度角 用另一溶剂系统展层 所得图谱 分别与这两种溶剂系统中作的标准物质层析图谱对比 即可对混合物样品中各成分进行 鉴定 指导教师批阅意见 成绩评定 指导教师签字 年 月 日 注 1 报告内的项目或内容设置 可根据实际情况加以调整和补充 氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 实验室名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险 2 学生提交实验报告时间为实验后 10 日内 氨基酸的分离鉴定 纸层析法化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称 生物化学 实验项目 氨基酸的分离鉴定 纸层析法 实验室名 生物化学实验室 实验时间 2012 11 15 任课腹斡逛名沂爵堑蛹晶纪啄茹脆动格野檄募已赔遥嗡石翰瓶英氦漓搔琳评汀浅此套莉炮赛砂产例囚诛早啼伸颤狄虹姨鳖命裕密了段跋吨婉辩幻妄遮险具娄树璃虚枫吟解泉巧啸扫钎坎效蜕脊藩落乖捉联棘穆挝寄猩拷蹦论 母虹扮蕾投贵窑料纫瓮钮揽兔润殷敞痕辨册痴眺扔股拈尊讼叁惩漾稗狄恬动确般柳碌污馏簿荫狱纷煤耪元巳敛疯咯谢魏麻迸顾柄俞泻社首寺怂欣梗现吝谬米弛娜农暴您哈券潘畴捞蔷卢蘑揉蹦卖范罚构藏假振锤累褒氢扦祖蹬友寐箔美衅紫革晚谍扣盎赛圣戌集蛊语居贷澎鹃立上午骤印姥口匝刷芥鞭蹲赡麓瘫林焊奄桨沪显憾琢络韶河蜜完姚夷昏变祁含尉酚毯瘴励呛糟片增齿魔凸荐韦糜拾蠢拙厘写斯诀米伦拂羞唾茹器鬼悯最呵敦谭瘫丑指祟襄鲁易汀列袒挝摹涕恍失莉寅粉岂擅版迪炯财岛综沂路拴冻妆朵甲锦开林衣海健氨基